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1、实验一 母种培养基的制作 一、本次实验的目的和要求 学会母种培养基的配制方法，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的根本技能。二、实验内容或原理 母种培养基配制。工艺流程：培养基配方 培养基的配制 分装试管理 灭菌 摆斜面 三、需用的仪器或试剂等 仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。四、实验步骤 1.培养基配方 以 PDA 培养基为例，马铃薯去皮200g、葡萄糖 20g、琼脂 20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、VB110mg。2.培养基配制 首先将马铃薯去皮、洗
2、净、挖去芽眼、切成薄片，称取 200 g，放入铝锅中用1000ml 清水加热煮沸，维持 20min 左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再参加琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。3.分装试管 培养基配制后应趁热分装。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每 10 支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，防止灭菌时被水蒸汽浸湿。4.灭菌 灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开场加热，
3、当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽 3-5 min，关闭放气阀。当压力表指针指到 0.15 Kg/cm2 时灭菌所需压强开场计时，继续维持该压强 30min。灭菌完毕持压力表指针自然回到0”位时翻开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，翻开锅盖。注意切忌在压力表未到0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。5、摆斜面 当培养基的温度降到 60时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的 1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。五、教学方式 以分组的形式进展实验、讨论 六、考核要求 掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、
4、良、中、及格、不及格。七、实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。实验二 菌种的别离与培养 一、本次实验的目的和要求掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌制作母种的根本技能。二、实验内容或原理 本实验以组织别离为例进展菌种别离与培养，工艺流程：种菇的选择与消毒 组织块的切取 菌丝培养 三、需用的仪器或试剂等 仪器：接种箱或超净工作台、解剖刀、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯等。试剂：75%酒精、高锰酸钾、富尔马林等。四、实验步骤 菌种的别离与培养本实验以组织别离为例 种菇的选择与消毒选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定
5、后，用 75%酒精进展外表消毒。组织块的切取将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯或化学药品进展消毒以上，关闭紫外灯后 20min 后，再开场进入接种室内进展接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进展接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最根本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面三刀半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取 2 的小方块组织，将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。菌丝培养接种后置于 25恒温箱中培养，2-3 天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝，此时每天要检查杂菌污
6、染情况。培养7-10 天后，菌丝即可长满斜面。观察记载详细观察比拟母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。菌落的直径mm-菌种块直径mm试管内菌丝生长的速度=菌落生长的时间d观察母种菌丝的外表形态特征。通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。五、教学方式 以分组的形式进展实验、讨论 六、考核要求 要求组织别离成功率在 50%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。七、实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告。实验三 原种与栽培种制作 一、本次实验的目的和要求 学会原种与栽培种培养基的配制方法，掌握原种与栽培种的接种技术，了解食
7、用菌原种与栽培种制作的工艺流程和制作的根本技能。二、实验内容或原理 1.原种与栽培种培养基配制 工艺流程：培养基配料装瓶或装袋灭菌冷却接种 2.掌握原种与栽培种的接种操作技术 接种箱消毒器械消毒无菌接种菌丝培养 三、需用的仪器或试剂等 仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等。试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等。四、实验步骤 1.配方 本实验以棉籽壳为主料培养基为例。配方为：棉籽壳78%，麦麸或米糠 20%，过磷酸钙 1%，蔗糖 1%。2.拌料 先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在
8、一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。3.含水量的测定 拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为 62%-64%。4.装瓶 将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋中央，边装边压实但不得过紧，一直装到瓶肩处为宜。5.擦瓶 将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉，以免接种后污染杂菌。6.封口 用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口，再包一层防潮纸或牛皮纸，用线绳将瓶口扎好，准备灭菌。7、灭菌 灭菌方法同母种的灭菌方法，压强为/cm2，1.5-2.0h 8、接种 挑取母种培养基一小块，置于原种或栽培种培养基中央孔边，随即按原样封口。9、菌丝
9、培养 接种后的原种，置于 25的培养室培养。3-5 天后菌丝即可恢复生长。5-7 天菌丝开场伸入培养基内。当菌丝长满瓶后，即可直接分移栽培种，栽培种菌丝长满面瓶后，需要养菌 1-2 周，以增加菌丝量及增强菌丝活力后，再用于生产。10.观察记载 观察原种菌丝的外表形态特征。五、教学方式 以分组的形式进展实验、讨论 六、考核要求 掌握原种与栽培种培养基的料水比例与高压、常压蒸汽灭菌方法，要求原种与栽培种成功率在 90%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。七、实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告。实验四 食用菌栽培技术 一、本次实验的目的和要求
10、学会平菇或金针菇栽培袋的的制作方法，掌握其出菇管理技术。二、实验内容或原理 1.平菇或金针菇栽培袋制作 工艺流程：栽培原料配制装袋灭菌冷却搬入接种室接种室消毒 接种适温培养菌丝 2、出菇管理：控温调温通风采收补水 三、需用的仪器或试剂等 仪器与设备：接种箱、高压灭菌锅或常压灭菌灶、接种铲、酒精灯。试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉等。四、实验步骤 1.配方 本实验以棉籽壳为主料培养基为例。配方为：棉籽壳78%，麦麸或米糠 20%，过磷酸钙 1%，蔗糖 1%。2.拌料 先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，
11、过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。3.含水量的测定 拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为 62%-64%。4.装袋 将拌好的培养料装入塑料袋中央，边装边压实但不得过紧，一直装到 2/3长为宜。5.套环 用双套环或纤维绳扎实袋口，准备灭菌。6.灭菌 灭菌方法同原种栽培种的灭菌方法。7.接种 挑取栽培种培养基一小块，置于栽培袋中，随即按原样封口。8.菌丝培养 接种后的栽培袋，置于培养室培养。3-5 天后菌丝即可恢复生长。5-7 天菌丝开场伸入培养基内。当菌丝长满袋后，移入菇房。9.出菇管理 控温、调温、通风、采收
12、、补水 五、教学方式 以分组的形式进展实验、讨论 六、考核要求 掌握平菇或金针菇栽培袋的制作技术，要求制袋成功率在 95%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。六、实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告。实验五 食用菌栽培与加工现场参观 一、本次实验的目的和要求 通过参观食用菌栽培与加工现场，增强食用菌规模化生产或工厂化生产与食用菌加工的感性认识。二、实验内容或原理 参观金针菇、平菇、香菇等食用菌大型菇场或加工厂。三、需要的实验材料 无 四、实验步骤 参观收集资料总结、归类撰写实验报告课堂讨论 实验六 食用菌电化教学 一、目的要求 通过观看食用菌生长发育和栽培新技术的录像片，让学生观看食用菌菌丝体及子实体生长发育的动态过程，了解当前不同地区食用菌栽培的特色，学习食用菌栽培新技术。二、实验仪器 有关食用菌菌丝及子实体生长发育和栽培技术的光盘或DVD。三、方法步骤 在放映前，指导教师先对有关食用菌菌丝、子实体生长特点和栽培技术提出几个问题，请学生在观看时注意记录，观看完毕之后，针对问题进展讨论。