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1、医学科研方法学医学科研方法学医学科研的基本要素医学科研的基本要素中南大学基础医学院生理学系中南大学基础医学院生理学系罗自强罗自强内皮素内皮素-1对肺对肺型细胞表面活性物质合成的调控型细胞表面活性物质合成的调控被试因素被试因素实验对象实验对象实验效应实验效应一、被试因素一、被试因素1.1.因素（因素（factorfactor）与水平与水平（levellevel）*雌二醇对肺成纤维细胞增殖的调控雌二醇对肺成纤维细胞增殖的调控*不同季节环磷酰胺对小鼠精子细胞致畸效应的研究不同季节环磷酰胺对小鼠精子细胞致畸效应的研究*性别与年龄和心肌梗塞病死率的研究性别与年龄和心肌梗塞病死率的研究*心理应激与高血压发
2、生的关系心理应激与高血压发生的关系*CC16genepolymorphisminfluencesthedegreeofairwayresponsivenessinasthmaticchildren外源性的：外源性的：人为给予的物理、化学、生物因素人为给予的物理、化学、生物因素 外界客观存在的：气候、季节等外界客观存在的：气候、季节等内源性的的自身特征：内源性的的自身特征：性别、年龄、心理、遗传因素性别、年龄、心理、遗传因素因素因素实验的目的是阐明被试因素的作用实验的目的是阐明被试因素的作用被试被试因素（因素（T T）+非非被试被试因素（因素（N N）t+n t+n 实验组：实验组：T+N t+
3、n T+N t+n 对照组：对照组：N nN n必须明确被试因素；各组间非被试因素必须一致必须明确被试因素；各组间非被试因素必须一致效应效应T tt水平的选定水平的选定水平水平：实验因素的不同的量或状态：实验因素的不同的量或状态被试因素的效应与水平有依赖关系被试因素的效应与水平有依赖关系药物如果没有量药物如果没有量-效关系，为非特异作用效关系，为非特异作用水平的选择与目的有关水平的选择与目的有关药效筛选：最大安全量（通常药效筛选：最大安全量（通常LD50LD50的的1/101/10）影响药效的因素：半数有效浓度（影响药效的因素：半数有效浓度（EC50EC50）半数有效剂量（半数有效剂量（ED5
4、0ED50）毒性实验：半数致死量（毒性实验：半数致死量（LD50LD50）最大致死量（最大致死量（LD100LD100）单因素单水平：单因素单水平：简单易行，效率不高简单易行，效率不高单因素多水平：比较不同剂量单因素多水平：比较不同剂量多因素单水平：比较不同因素（药物、疗法）多因素单水平：比较不同因素（药物、疗法）多因素多水平：探索联合用药方案、最佳反应条件多因素多水平：探索联合用药方案、最佳反应条件因素与水平的组合因素与水平的组合2.2.因素的施加因素的施加确保因素的施加确保因素的施加被试因素标准化：保证被试因素在被试因素标准化：保证被试因素在整个实验过程中始终保持一致整个实验过程中始终保持
5、一致剂量、剂型、给药时间、用药剂量、剂型、给药时间、用药时间、给药途径、药品批号时间、给药途径、药品批号不同时间给予曲马多所引起的死亡率不同不同时间给予曲马多所引起的死亡率不同药学学报200108昼夜节律昼夜节律曲马多镇痛作用的昼夜变化曲马多镇痛作用的昼夜变化药学学报200108皖南医学院学报200201小鼠痛阈的昼夜变化季节节律季节节律苯丙苯丙胺胺LD501月小于月小于7月月实验组和对照组平行进行实验组和对照组平行进行给药途径给药途径*吸收速度吸收速度静脉注射静脉注射吸入吸入肌肉肌肉=腹腔腹腔皮下皮下口服口服经肛经肛贴皮贴皮*药物的生物转化药物的生物转化口服口服先经肝转化先经肝转化皮下、肌肉
6、、静脉皮下、肌肉、静脉先经肺转化先经肺转化正确选择剂量正确选择剂量口服口服100%灌胃灌胃100%灌肠灌肠100-200%皮下皮下30-50%肌肉肌肉25-30%腹腔腹腔25-30%静脉静脉20-25%二、受试对象二、受试对象实验对象的确定取决于试验目的实验对象的确定取决于试验目的1.受试对象的选择受试对象的选择（1）敏感敏感、稳定稳定动脉粥样硬化动脉粥样硬化兔兔过敏反应过敏反应豚鼠豚鼠心肌缺血心肌缺血狗、兔、大鼠、猪狗、兔、大鼠、猪降压治疗降压治疗高血压高血压II期期（2）可行性）可行性（3）病人诊断明确（客观指标）病人诊断明确（客观指标）实验动物实验动物种属、品系、窝别、性别、龄、体重、营
7、养状种属、品系、窝别、性别、龄、体重、营养状态和饲养条件态和饲养条件实验动物分为四级：实验动物分为四级：一级，普通动物（一级，普通动物（conventinalanimal）：）：教学和教学和预试预试二级，清洁动物（二级，清洁动物（cleananimal）：）：大多数的科研大多数的科研三级，无特定病原体动物（三级，无特定病原体动物（specificpathogenfreeanimal）：）：为国际标准级，所有科研为国际标准级，所有科研四级，无菌动物（四级，无菌动物（germfreeanimal）：）：特殊课题特殊课题第四章第四章实验动物的应用实验动物的应用第十九条第十九条应用实验动物应当根据不同
8、的实验目的，应用实验动物应当根据不同的实验目的，选用相应的合格实验动物。申报科研课题和鉴定科研选用相应的合格实验动物。申报科研课题和鉴定科研成果，应当把应用合格实验动物作为基本条件。应用成果，应当把应用合格实验动物作为基本条件。应用不合格实验动物取得的检定或者安全评价结果无效，不合格实验动物取得的检定或者安全评价结果无效，所生产的制品不得使用。所生产的制品不得使用。第二十条第二十条供应用的实验动物应当具备下列完整的资供应用的实验动物应当具备下列完整的资料：料：（一）品种、品系及亚系的确切名称；（一）品种、品系及亚系的确切名称；（二）遗传背景或其来源；（二）遗传背景或其来源；（三）微生物检测状况
9、；（三）微生物检测状况；（四）合格证书；（四）合格证书；（五）饲育单位负责人签名。（五）饲育单位负责人签名。实验动物管理条例（国家科委，实验动物管理条例（国家科委，1988）人体为研究对象人体为研究对象种族、性别、年龄、体重、职业、工种、种族、性别、年龄、体重、职业、工种、工龄、精神状态、居住条件、生活习惯、嗜好、工龄、精神状态、居住条件、生活习惯、嗜好、经济及社会因素经济及社会因素病人为研究对象病人为研究对象病种、病程、病期、病型、既往史、治病种、病程、病期、病型、既往史、治疗和护理条件疗和护理条件人体实验或用人体组织或器官作材料人体实验或用人体组织或器官作材料,应被有关研究单位的专门委员会
10、批准，同时应被有关研究单位的专门委员会批准，同时符合符合1975年出版、年出版、1983年修订的年修订的赫尔辛赫尔辛基宣言基宣言和有关国际伦理标准。被试者应知和有关国际伦理标准。被试者应知情并同意。医院和被试者的名称可以省略。情并同意。医院和被试者的名称可以省略。动物实验也应符合国家动物实验也应符合国家实验动物管理条例实验动物管理条例和有关动物保护与使用的法律和法规。和有关动物保护与使用的法律和法规。-生理学报生理学报投稿须知投稿须知所有医学研究的基本原则所有医学研究的基本原则-摘自赫尔辛基宣言摘自赫尔辛基宣言*要保护人体对象的生命、健康、隐私和尊严。要保护人体对象的生命、健康、隐私和尊严。*
11、必须遵守公认的科学原则，十分熟悉科学文献、必须遵守公认的科学原则，十分熟悉科学文献、以及适当的动物实验的基础上以及适当的动物实验的基础上。*实验方案应上报专门的道德审核委员会批准。实验方案应上报专门的道德审核委员会批准。*只能由科学上合格的人员来承担，并在医务人只能由科学上合格的人员来承担，并在医务人员的监督下进行。员的监督下进行。*必须先对预计的风险和压力或给实验对象的好必须先对预计的风险和压力或给实验对象的好处进行仔细评估。处进行仔细评估。*医学研究只有当研究结果有可能造益于参与研医学研究只有当研究结果有可能造益于参与研究的人们时才是合理的。究的人们时才是合理的。*研究对象必须自愿，并了解
12、研究项目情况研究对象必须自愿，并了解研究项目情况。下列情况一般不作为临床研究对象下列情况一般不作为临床研究对象*存在影响结果的并发症存在影响结果的并发症*危重状态危重状态*多种疗法无效多种疗法无效*不配合者不配合者2.选择适当的研究水平选择适当的研究水平整体实验整体实验（invivo）：综合性实验综合性实验离体实验离体实验（invitro）：）：分析性实验分析性实验器官水平器官水平细胞水平细胞水平分子水平分子水平半体内实验（半体内实验（exvivo）：）：分析性实验分析性实验3.受试对象的纯化受试对象的纯化所用受试对象力求一致，尽力减少个体差异，所用受试对象力求一致，尽力减少个体差异，降低非被
13、试因素对效应的影响降低非被试因素对效应的影响（1）表现典型的确诊病例表现典型的确诊病例（2）病情轻重一致，先从病情中等的病例开始病情轻重一致，先从病情中等的病例开始（3）使用统一、公认的诊断和分型分级标准使用统一、公认的诊断和分型分级标准Case4某人为了研究某人为了研究“补充维生素补充维生素A对学龄前儿对学龄前儿童血红蛋白的影响童血红蛋白的影响”，选择，选择1999年秋季入托年秋季入托的三岁儿童进行体检，排除呼吸道、消化道等的三岁儿童进行体检，排除呼吸道、消化道等系统疾病，测定系统疾病，测定174名儿童的血清名儿童的血清VA、血红蛋血红蛋白、血清铁浓度，将血红蛋白白、血清铁浓度，将血红蛋白1
14、10g/L定为定为贫血。再将贫血组儿童随机分为两组，一组为贫血。再将贫血组儿童随机分为两组，一组为治疗组治疗组33例，每日投例，每日投VA2000IU，另一组为另一组为对照组对照组25例。三月后，两组儿童分别查血清例。三月后，两组儿童分别查血清VA、血红蛋白、血清铁浓度。结果：治疗组三血红蛋白、血清铁浓度。结果：治疗组三月后血清月后血清VA、血红蛋白、血清铁浓度明显升高血红蛋白、血清铁浓度明显升高P0.01，对照组治疗后无明显变化对照组治疗后无明显变化P0.05。4.受试对象的依从性受试对象的依从性按预定计划接受被试因素的合作程度按预定计划接受被试因素的合作程度*增加患者的信任感增加患者的信任
15、感*实验时间不要太长实验时间不要太长*盲法（单盲、双盲、三盲）盲法（单盲、双盲、三盲）急性动物实验必须在药物麻醉下进行急性动物实验必须在药物麻醉下进行,严严禁单纯用肌肉松弛剂进行实验动物手术。禁单纯用肌肉松弛剂进行实验动物手术。生理学报生理学报 投稿须知投稿须知20015.麻醉麻醉三、试验效应三、试验效应客观指标客观指标主观指标主观指标定量指标定量指标定性指标定性指标率率定量和定性指标的转换定量和定性指标的转换特异性指标特异性指标非特异性指标非特异性指标比较生物效应比较生物效应可以用引起同一水平效应所需要的量可以用引起同一水平效应所需要的量半数致死量半数致死量LD50LD50半数有效量半数有效
16、量ED50ED50半数有效浓度半数有效浓度EC50EC50阈强度阈强度比较生物效应的时间比较生物效应的时间潜伏期潜伏期半衰期半衰期效应持续期：从起效到作用消失所需时间效应持续期：从起效到作用消失所需时间三、试验效应三、试验效应（一）指标的要求（一）指标的要求1.扣题扣题-关联性关联性2.TXA2TXB211脱氢脱氢TXB23.PGI26酮酮PGFI 去二甲去二甲6酮酮PGFI 4.自由基自由基膜磷脂膜磷脂5.MDA6.血小板血小板AA代谢代谢自由基自由基膜磷脂膜磷脂异构异构前列腺素前列腺素（isoprostane)结果结果两名医生读两名医生读名医生在两次名医生在两次同一批片子同一批片子不同时间
17、读片不同时间读片结果一致结果一致6245701结果不一致结果不一致2686（30%）192（21%）X线胸片读片结果2.客观化客观化三、试验效应三、试验效应（一）指标的要求（一）指标的要求1.扣题扣题-关联性关联性指标与研究主题要有本质联系指标与研究主题要有本质联系2.客观化客观化*统一标准统一标准*仪器相对定量仪器相对定量*多人盲法，加权平均多人盲法，加权平均3.灵敏度灵敏度能正确反映效应变化的最小数量或水平能正确反映效应变化的最小数量或水平4.指标的可用性指标的可用性敏感度：是否可检出发生的变化，真阳性率敏感度：是否可检出发生的变化，真阳性率特异度：检出变化的专一性，真阴性率特异度：检出变
18、化的专一性，真阴性率真阳性率真阳性率=a/（a+c）真阴性率真阴性率=d/（b+d）漏诊率漏诊率=1-真阳性率真阳性率误诊率误诊率=1-真阴性率真阴性率5.指标的精确性指标的精确性准确度：与真实值的接近程度，测定的正确性准确度：与真实值的接近程度，测定的正确性主要取决于系统误差主要取决于系统误差精密度：各次测定值的集中程度，测定的可重复性精密度：各次测定值的集中程度，测定的可重复性主要取决于随机误差主要取决于随机误差（二）注意事项（二）注意事项1.标本的采集于储存标准化标本的采集于储存标准化采样时间、部位、方法、保持、运输采样时间、部位、方法、保持、运输2.测定方法标准化测定方法标准化方法、仪器、试剂、条件、人员方法、仪器、试剂、条件、人员3.依据专业知识选指标依据专业知识选指标药物药物显效显效好转好转无效无效恶化恶化死亡死亡合计合计有效率有效率死亡率死亡率A55800158823856.7%37.0%B1323018517.1%33.3%A、B两药治疗肝癌的近期效果两药治疗肝癌的近期效果4.多指标多指标5.尽量选高、精、尖、新指标尽量选高、精、尖、新指标6.重视实验方法的可靠性重视实验方法的可靠性7.减少其他因素对指标的干扰减少其他因素对指标的干扰