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1、1第一节 细菌学诊断第1页/共40页2一、标本的采集原则：一、标本的采集原则：无菌采集无菌采集 严格无菌操作，避免标本被污染严格无菌操作，避免标本被污染。标本。标本收集于无菌容器中，容器须先经高压灭菌、收集于无菌容器中，容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂处理。菌容器，而不能用消毒剂处理。第2页/共40页3取样部位不同疾病、不同时期取不同部位标本 如流脑病人取CSFCSF、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程1 12 2周内取血液，2 23 3周时取粪便。尽可能取病变明显部位的材料 取局部病变标本，不可使用消毒剂，必要
2、时以无菌生理盐水冲洗，拭干后取材。第3页/共40页4粪标本：自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液的粪便一小匙。液体粪便则取絮状物，一般取13ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。第4页/共40页5痰标本：采集标本前应用清水、冷开水漱口有假牙者应取下假牙。首先轻咳，咳出咽喉部的分泌物，弃去，再用力咳嗽，咳出肺部的痰液直接吐入无菌的容器中。若怀疑结核感染找抗酸杆菌，应收集24小时的痰液于清洁玻璃容器内。若怀疑放线菌感染，应让病人留取含有颗粒的痰液，实验室查到硫磺颗粒且弱抗酸，可以考虑放线菌感染。第5页/共40页6早期采集采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，且必须在抗菌药物使用
3、前，否则这份标本在分离培养时要加入药物拮抗剂。第6页/共40页7 一般标本采集后最好在2h内送检，大多细菌可4冷藏运送、特殊（如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保温立即送检。粪便标本中杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。尽快送检、冷藏运送第7页/共40页8注意安全 烈性传染病或病因不明患者临床标本的采集时应做好防护工作。第8页/共40页91 1、直接涂片染色镜检、直接涂片染色镜检 形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片镜检后有助于初步诊断初步诊断。如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串样球菌等。二、细菌学诊断方法第9页/共40页10葡葡 萄萄 球球 菌菌 霍霍 乱乱 弧弧 菌菌第10页/共40页
4、11A A A AB B B B结核分枝杆菌A.A.A.A.结核分枝杆菌培养的镜下形态结核分枝杆菌培养的镜下形态(抗酸染色抗酸染色)B.B.B.B.结核分枝杆菌痰标本直接涂片结核分枝杆菌痰标本直接涂片(抗酸染色抗酸染色)第11页/共40页122、分离培养（isolation and cultivation）：所有标本原则上均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用不同培养基。分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时较久；大多细菌1624h，结核杆菌需48w。分离培养是微生物学诊断的金标准。第12页/共40页13分离培养isolation and cultivation 分离培养是微生
5、物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。（图为普通孵箱）第13页/共40页14 厌氧箱 厌氧袋第14页/共40页15 各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）。3 3、生化试验糖发酵试验第15页/共40页164 4、血清学试验：含特异抗体的免疫血清未知纯种细菌进行血清学实验，可确定致病菌的种和型。常见有玻片凝集试验。玻片凝集试验第16页/共40页175 5、动物试验：主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。第17页/共40页186 6
6、、药物敏感试验 测定标本中致病菌对药物的敏感程度。对指导临床用药及控制感染有重要意义。常用纸碟法和试管稀释法。第18页/共40页19第二节第二节 血清学诊断血清学诊断 采用已知的细菌或其特异性抗原，检测患者血清或其他体液中有无相应特异性抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。第19页/共40页20p在血清学诊断中，最好采取患者急性期和恢复期双份血清标本。p结果：以抗体效价明显高于正常人水平或患者恢复期抗体效价比急性期升高4 4倍方有意义。p常用有凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、中和试验、ELISA等。p优点：快速、灵敏且不受抗生素等药物影响。第20页/共40页21 肥达试验 玻片
7、凝集实验第21页/共40页22第三节第三节 分子生物学诊断分子生物学诊断lPCR技术 lDNA探针技术 lDNA芯片技术 第22页/共40页23细菌学诊断基本方法第23页/共40页24第四节第四节 细菌感染的细菌感染的特异性防治特异性防治第24页/共40页25特异性免疫产生的方式人工免疫 人工主动免疫 疫苗、类毒素 人工被动免疫 抗毒素、丙球自然免疫 自然被动免疫 胎盘、初乳 自然主动免疫 患病、隐性感染人工免疫：采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。第25页/共40页26一、人工主动免疫 人为地将疫苗（vaccine）或类毒素接种
8、于人体，使机体主动产生特异性免疫力的一种防治微生物感染的措施。第26页/共40页27常用制剂l疫苗 -灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组活载体疫苗、转基因植物疫苗和治疗性疫苗。l类毒素第27页/共40页281 1、灭活疫苗：选用免疫原性强的细菌经人工大量培养后，用理化方法杀死而成。如伤寒、百日咳、霍乱等灭活疫苗。优点：易于制备和保存。缺点：接种剂量大；维持时间短；接种次数多；注射的局部和全身性副反应较大；不产生细胞免疫应答。第28页/共40页292 2、减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成；如BCG 优点：只需接种一次、接种剂量较小、副反应轻微或无、免疫效果好且持久、能同时产
9、生细胞免疫和体液免疫；以自然途径接种，有SIgA抗体的局部粘膜免疫形成。缺点：不易保存（冷藏且保存期短）、回复毒力的危险性第29页/共40页30第30页/共40页313.3.亚单位疫苗：v用化学方法裂解和提取或通过基因工程产生的细菌保护性抗原组分制成的疫苗。v如:脑膜炎球菌的荚膜多糖，乙肝疫苗等。第31页/共40页324 4、核酸疫苗DNADNA疫苗基因疫苗将能编码诱发保护性免疫应答的病原体基因片段和能在真核细胞表达的质粒重组，直接注入宿主体内使其表达目的免疫原，进而诱导出保护性抗体和细胞免疫的新型疫苗，如乙肝疫苗。核酸疫苗的出现与发展是疫苗发展史上的第三次革命。第32页/共40页33l重组活
10、载体疫苗l转基因植物疫苗l治疗性疫苗等。第33页/共40页34类毒素：外毒素经0.30.4%甲醛作用34周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如白百破三联疫苗（DPT）是将白喉类毒素、百日咳死菌苗、破伤风类毒素混合而成。第34页/共40页35 二、人工被动免疫 给机体注射含特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等制剂，使机体即刻获得特异性免疫力的过程，以治疗或紧急预防感染。第35页/共40页361、抗毒素：p一般用细菌类毒素或外毒素多次免疫马后采血，从血清中提取免疫球蛋白精制而成。抗毒素能中和相应的外毒素，阻断其毒性作用。例如用于白喉、破伤风等疾病。p 注射前需做皮肤试验。p 应早期、足量注射。常用制剂第36页/共40页372、免疫球蛋白 -丙种球蛋白、胎盘球蛋白 （麻疹、甲肝、乙肝、脊髓灰质炎等）3、抗菌免疫血清等第37页/共40页38区别要点区别要点 人工主动免疫人工主动免疫 人工被动免疫人工被动免疫免疫物质 抗原 抗体或细胞因子免疫出现时间 慢，24周 快，立即免疫维持时间 长，数月数年 短，23周主要用途 预防 治疗或紧急预防 人工主动免疫和人工被动免疫的主要区别第38页/共40页39本章主要内容小结1.细菌感染的微生物学诊断方法。2.人工主动免疫和人工被动的主要区别及常用的制剂。第39页/共40页40感谢您的观看！第40页/共40页