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1、学习内容学习内容第一节 血糖测定第二节 血清糖基化蛋白测定第三节 胰岛素释放及C肽释放试验第四节 糖代谢产物测定第五节 其他糖测定第1页/共55页学习目标学习目标掌握血糖及口服糖耐量试验的概念、实验原理、操作方法及临床应用；掌握糖化血清蛋白测定的原理、方法学评价及临床应用熟悉胰岛素及胰岛素释放试验的临床应用；熟悉C-肽及C-肽释放试验的临床应用。了解血乳酸、丙酮酸、-羟丁酸及其他糖的测定。能规范、熟练地进行血糖测定、口服糖耐量试验、糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的测定，并正确解释实验结果第2页/共55页糖是一类化学本质为多羟醛或多羟酮及其衍生物的有机化合物，糖代谢（carbohydrate met
2、abolism）指葡萄糖(glucose，Glc)、糖原(glycogen，Gn)等在体内的一系列复杂的化学反应。在人体内糖的主要形式是葡萄糖(glucose，Glc)及糖原(glycogen，Gn)。葡萄糖是糖在血液中的运输形式，在机体糖代谢中占据主要地位；糖原是葡萄糖的多聚体,包括肝糖原、肌糖原和肾糖原等，是糖在体内的储存形式。葡萄糖与糖原都能在体内氧化提供能量。前言前言第3页/共55页临床常用检测试验：血糖浓度测定，口服葡萄糖耐量试验，糖化血红蛋白测定，糖化血清蛋白测定，胰岛素及胰岛素释放试验，C-肽及C-肽释放试验，糖代谢产物（血乳酸、丙酮、-羟丁酸）测定，其他糖（果糖、半乳糖）测定等
3、。第4页/共55页第一节血糖测定第5页/共55页血糖一般指血液中的葡萄糖。在激素等因素的调节下，血糖浓度保持相对恒定。健康人群空腹血糖的参考范围通常为（70110mg/dl），但2003年美国糖尿病协会（ADA）建议下调参考范围上限为（100mg/dl）。血糖血糖第6页/共55页血糖浓度取决于血糖的来源及去路的动态平衡。血糖的来源主要受机体进食的影响，而去路则取决于机体对血糖的利用。一、糖代谢概述一、糖代谢概述第7页/共55页根据机体所处的不同状态，血糖主要有三个来源：1食物中糖类的消化吸收 2糖原的分解 3非糖物质的转化（一）血糖的来源（一）血糖的来源第8页/共55页葡萄糖的代谢过程根据机体
4、的需要而定，主要代谢去路有：1有氧氧化 2合成糖原 3转换为非糖物质 4转换为其他糖类衍生物 5生成尿糖（二）血糖的去路（二）血糖的去路第9页/共55页血糖的来源与去路血糖的来源与去路第10页/共55页血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节激素调节常见的升高血糖的激素胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素常见的降低血糖的激素胰岛素二、血糖浓度的调节二、血糖浓度的调节第11页/共55页定义：胰岛素（insulin）是由胰岛细胞合成分泌的多肽激素。它主要作用于肝脏、骨骼肌和脂肪组织。功能：一方面促进这些组织细胞摄取葡萄糖，并转换成糖原或脂肪贮存；另一方面抑制肝脏的糖原分解和糖异生，从而降低血糖。（一
5、）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素定义功能第12页/共55页化学构成化学构成人胰岛素含51个氨基酸残基，分子量5808，由A、B两条链组成，含两个链间二硫键和一个链内二硫键。人胰岛素有别于其他生物的胰岛素，但其B链的C末端（B23B26）具有高度保守性，是胰岛素生物学活性的决定性区域，故不同来源的胰岛素在免疫学和生物学活性上有相似性（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素第13页/共55页合成过程合成过程首先在胰岛细胞的核糖体上合成含100个氨基酸残基的前胰岛素原（preproinsulin）。前胰岛素原很快被酶切去信号肽，生成86个氨基酸的胰岛素原（proinsulin）。最后
6、胰岛素原通过蛋白酶作用，切掉4个氨基酸残基，水解为51个氨基酸的胰岛素和31个氨基酸的C-肽（C-peptide）。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素第14页/共55页（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素前胰岛素原（preproinsulin）胰岛素原（proinsulin）胰岛素（insulin）C-肽（C-peptide）第15页/共55页释放释放激动剂：葡萄糖、氨基酸、胰腺、胃肠激素等。阻断剂：高血糖、生长抑素和-肾上腺素能。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素第16页/共55页胰岛素主要为肝脏摄取并降解，少量由肾小球滤过，并在近曲小管重吸收和降解。胰岛素
7、在体循环中的生物半寿期为45min。主要通过胰岛素和胰岛素受体的结合，触发细胞内特异性的信号转导，从而产生相应的生物学效应。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素降解降解作用机制作用机制第17页/共55页胰岛素样生长因子（insulin like growth factors，IGF）是一种多肽，与胰岛素的结构相似，具有类似于胰岛素的代谢作用和促生长作用，主要有IGF I和IGF II。IGF I又称生长调节素C（somatomedin C），是细胞生长和分化的主要调节因子之一，而IGF II的生理作用尚不清楚。IGF I主要由肝脏产生，其他许多阿组织也可合成IGF I，但不入血，仅在
8、局部发挥作用。血液中，IGF浓度约比胰岛素高1 000倍，但绝大部分与特异性蛋白质结合，仅少量以游离形式存在。而胰岛素在血液中全部是游离的，因此相比胰岛素，血液中IGF的活性很低。IGF通过特异性的IGF受体或胰岛素受体而发挥作用。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素样生长因子第18页/共55页IGF I在正常糖代谢中的作用尚不清楚，外源性注入可导致低血糖，而IGF I缺乏可引起生长迟缓。胰腺外肿瘤可致IGF的生成过量，患者可有饥饿性低血糖。测定IGF I浓度可评价生长激素的缺乏和过量，监测机体的营养状况。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰岛素样生长因子第19页/共55页胰高
9、血糖素和肾上腺素（二）升高血糖的激素（二）升高血糖的激素 刺激葡萄糖释放减少葡糖糖利用生长激素和皮质醇第20页/共55页血糖的激素调节第21页/共55页如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖低血糖：低于2.8 mmol/L2.8 mmol/L。高血糖：高于7.1 mmol/L7.1 mmol/L（高于8.89 mmol/L8.89 mmol/L，出现糖尿）。最常见病理性高血糖：糖尿病。第22页/共55页高血糖症与糖尿病 高血糖症（高血糖症（hyperglycemia）是糖代谢紊乱导致是糖代谢紊乱导致血糖浓度高于参考上限的一种异常现象，主要表现为血糖浓度高于参考上限的一种异常现象，主要表现为
10、空腹血糖损伤、糖耐量减退或糖尿病。其中，空腹血空腹血糖损伤、糖耐量减退或糖尿病。其中，空腹血糖损伤和糖耐量减退是正常糖代谢与糖尿病之间的中糖损伤和糖耐量减退是正常糖代谢与糖尿病之间的中间状态，皆系发展为糖尿病及心血管病变的危险因子间状态，皆系发展为糖尿病及心血管病变的危险因子和标志，而糖尿病是一组严重的代谢性疾病。和标志，而糖尿病是一组严重的代谢性疾病。第23页/共55页糖尿病的发病机制与分型 糖糖尿尿病病（diabetes diabetes mellitus,mellitus,DMDM）是是一一组组由由于于胰胰岛岛素素分分泌泌不不足足或或/和和胰胰岛岛素素作作用用低低下下而而引引起起的的糖糖
11、代谢紊乱性疾病。代谢紊乱性疾病。分型：分型：型糖尿病、型糖尿病、型糖尿病型糖尿病临临床床症症状状:“三三多多一一少少”，即即多多尿尿、烦烦渴渴、多多饮饮和和体体重减轻。重减轻。第24页/共55页型糖尿病又叫青年发病型糖尿病或胰岛素依耐型糖尿病。原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏,从而完全失去了产生胰岛素的功能.治疗：依赖胰岛素治疗。型糖尿病又叫非胰岛素依耐型糖尿病。原因：自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素无法发挥作用。治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗第25页/共55页第26页/共55页测定方法 无机化学法有机化学法酶法参考范围3.9-6.1 mmol/L(70
12、 110 mg/dL)临床意义高血糖症低血糖症三、血清（浆）葡萄糖测定与评价三、血清（浆）葡萄糖测定与评价第27页/共55页原理葡萄糖在和碱性原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加混合加热后，可使后，可使 CuCu2+2+还原成原成CuCu+，后者与磷，后者与磷钼酸酸试剂作用生成作用生成蓝色的色的钼蓝。通。通过比色法比色法测定定蓝色化合物，色化合物，计算出血糖的含量算出血糖的含量特异性差、易受其他特异性差、易受其他还原性物原性物质的干的干扰，现已淘汰已淘汰空腹正常血糖参考空腹正常血糖参考值或或80-120mg/dL80-120mg/dL无机化学法：Folin-WuFolin-Wu法第28页/共55页有
13、机化学法：有机化学法：邻甲苯胺法甲苯胺法原理：原理：葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲羟甲基基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成，后者与邻甲苯胺缩合成青色的青色的Schiff碱碱。Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。评价：操作简便，特异性高，操作简便，可直接采用血浆或血清进行评价：操作简便，特异性高，操作简便，可直接采用血浆或血清进行测定，但其使用的测定，但其使用的试剂具有腐蚀性和致癌性，现应用较少试剂具有腐蚀性和致癌性，现应用较少。第29页/共55页酶
14、法葡萄糖氧化酶(GOD)法己糖激酶(HK)法葡萄糖脱氢酶法国际公认国际公认国家推荐国家推荐第30页/共55页实验 9-1葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GOD）法测定血糖原理：原理：葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化氢在过氧化物酶过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色无色的的4-4-氨基安替比林氨基安替比林与酚氧化缩合生成酚氧化缩合生成红色的红色的醌类化合物醌类化合物。红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。第31页/共55页试剂准备试
15、剂准备磷酸盐缓冲液（）磷酸盐缓冲液（）酶试剂酶试剂葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶1200U，过氧化物酶，过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林氨基安替比林10 mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液，溶于上述磷酸盐缓冲液80 mL中，调，定容中，调，定容至至100 mL，2-8保存，可保存保存，可保存3个月个月酚溶液酚溶液重蒸馏酚重蒸馏酚100 mg溶于溶于100 mL蒸馏水中，避光、蒸馏水中，避光、2-8保存保存，可保存，可保存1个月个月苯甲酸溶液（苯甲酸溶液（12 mol/L）葡萄糖标准液（葡萄糖标准液（5.0 mmol/L）第32页/共55页实验操作操作加入物/mL空白管标准管测定管血清0.02葡萄糖标
16、准液0.02蒸馏水0.02酶酚混合试剂3.03.03.0 混匀，置混匀，置 37 37 水浴保温水浴保温 1515分钟，分钟，每管加蒸馏水每管加蒸馏水0.5 ml0.5 ml，在，在510nm510nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。根据各管波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度吸光度计算其血糖浓度计算其血糖浓度。结果计算结果计算取取3 3支试管，按下表操作支试管，按下表操作葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）葡萄糖标准液浓度葡萄糖标准液浓度A A标准管标准管A A测定管测定管=第33页/共55页自动化分析仪检测试剂试剂主要成分与手动检测类似，见试剂盒说明书。主要成
17、分与手动检测类似，见试剂盒说明书。工作液配置：根据标本量，临时将酶试剂与缓冲液按工作液配置：根据标本量，临时将酶试剂与缓冲液按照照1:4比例混匀。比例混匀。操作操作定标、质量控制、标本上机定标、质量控制、标本上机结果计算结果计算1 mg/dL X 0.0555=0.0555 mmol/L第34页/共55页葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法可直接法可直接测定定脑脊液的葡萄糖含量，但不脊液的葡萄糖含量，但不能直接能直接测定尿液葡萄糖含量。定尿液葡萄糖含量。这是因是因为尿液中的尿酸等尿液中的尿酸等干干扰物物质浓度度过高，可干高，可干扰过氧化物氧化物酶反反应，造成，造成结果果假性偏低。假性偏低。对于血液于血液样
18、品需及品需及时分离分离红细胞。因胞。因为红细胞的酵解将胞的酵解将会会导致致测定定结果偏低。建果偏低。建议测定定样品以草酸品以草酸钾-氟化氟化钠为抗凝抗凝剂以抑制糖酵解。以抑制糖酵解。注意事项第35页/共55页严重黄疸、溶血及乳糜重黄疸、溶血及乳糜样血清先制血清先制备无蛋白血无蛋白血滤液，液，然后在然后在进行行测定。定。酶酚混合液一般酚混合液一般现用用现配。配。葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶对 -D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖糖约 36%为 型，型，64%为 型。葡萄糖的完全氧化需型。葡萄糖的完全氧化需要要 型到型到 型的型的变旋反旋反应。葡萄糖。葡萄糖变旋旋酶，可加速，
19、可加速这一反一反应，延，延长孵育孵育时间可达到完成自可达到完成自发变旋旋过程。新程。新配制的葡萄糖配制的葡萄糖标准液主要是准液主要是 型，故型，故须放置放置 2h 以上以上(最好最好过夜夜)，待，待变旋平衡后方可旋平衡后方可应用。用。注意事项第36页/共55页计算：计算：葡萄糖标准液：葡萄糖标准液：5 mmol/L5 mmol/L血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/Lmmol/L）=A=AT T/A/AS S C CS S参考值：3.96.1 mmol/L第37页/共55页本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿
20、酸、维生素 C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。但是对测定结果无显著影响。实验误差分析：第38页/共55页实验 9-2己糖激酶（HK）法测定血糖n原理：原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。n评价评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵试剂较贵。第39页/共55页试剂盒配方试剂盒配方第40页/共55页实验操作操作 （2 2）混匀，置）混
21、匀，置 37 37 水浴保温水浴保温 1010分钟，在分钟，在340nm340nm波长处比色，波长处比色，比色皿光径比色皿光径1 cm1 cm、以蒸馏水调零，读取各管吸光度。根据各管吸、以蒸馏水调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度光度计算其血糖浓度计算其血糖浓度。（3 3）结果计算）结果计算1 1）终点法）终点法（1 1）按下表操作）按下表操作第41页/共55页实验操作2）速率法）速率法 以半自动生化分析仪为例以半自动生化分析仪为例（1）主要参数如下）主要参数如下系数系数孵育时间孵育时间30s监测时间监测时间60s波长波长340nm比色皿光径比色皿光径温度温度37吸液量吸液量（2）加样）加样（
22、3）结果计算）结果计算血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/L）第42页/共55页注意事项及评价试剂要求：各工具酶均需高纯度产品。试剂要求：各工具酶均需高纯度产品。准确度及精密度较高，适用于自动分析仪，但试剂准确度及精密度较高，适用于自动分析仪，但试剂较贵。较贵。己糖激酶法测定血糖不收轻度溶血、脂血、黄疸、己糖激酶法测定血糖不收轻度溶血、脂血、黄疸、尿酸、维生素尿酸、维生素C等干扰，但严重溶血的标本会影响测等干扰，但严重溶血的标本会影响测定结果。罕见病症病例，特别是定结果。罕见病症病例，特别是IgM型中，血液葡萄型中，血液葡萄糖测定结果不可靠。糖测定结果不可靠。第43页/共55页不同检测方法所提供
23、的空腹正常血糖参考值存在差异。葡萄糖氧化酶法：Folin-WuFolin-Wu法：邻-甲苯胺法：第44页/共55页葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法法：该法特异性高，反法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖条件温和，能反映血中葡萄糖的真的真实含量，且已推广出含量，且已推广出试剂盒，广泛盒，广泛应用与用与临床。床。己糖激己糖激酶法法：特异性高，灵敏度高，干特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自因素少，适用于自动化分析，化分析，为葡萄糖葡萄糖测定的参考方法，但是定的参考方法，但是试剂较贵。Folin-WuFolin-Wu法法：该法法对葡萄糖葡萄糖无特异性无特异性，一切，一切还原物原物质均可均可产生同生
24、同样的的反反应。邻-甲苯胺法甲苯胺法：该法涉及法涉及强酸、加酸、加热等反等反应条件，不便于大条件，不便于大规模模检测，且且邻甲苯胺甲苯胺须蒸蒸馏后使用，后使用，有毒性有毒性，临床和科研上已很少采用。床和科研上已很少采用。血糖测定方法特点第45页/共55页测定方法 无机化学法有机化学法酶法参考范围3.9-6.1 mmol/L(70 110 mg/dL)临床意义高血糖症低血糖症四、葡萄糖耐量试验四、葡萄糖耐量试验第46页/共55页第二节血清糖基化蛋白质测定第47页/共55页血清糖基化蛋白质测定血清糖基化蛋白质测定比色法(酶法)测定糖化血红蛋白果糖胺法测定糖化血清清蛋白第48页/共55页第三节胰岛素释放及C肽释放试验第49页/共55页胰岛素释放及胰岛素释放及C C肽释放试验肽释放试验化学发光免疫分析法(CLIA)测定胰岛素电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定C肽第50页/共55页第四节糖代谢产物测定第51页/共55页糖代谢产物测定糖代谢产物测定血乳酸测定血测定丙酮血-羟丁酸测定第52页/共55页第五节其他糖测定第53页/共55页其他糖测定其他糖测定尿液果糖测定血半乳糖测定第54页/共55页感谢您的观看！第55页/共55页