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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案医学免疫学课程试验教案实 验 一试验名称： E- 玫瑰花环形成试验 方案学时： 4 学时试验目的与要求： 1. 把握人 T 淋巴细胞形成 E- 花环的试验原理和操作方法； 2. 熟识 T 淋巴细胞的功能检测方法；试验仪器、试剂：淋巴细胞分层液（Ficou）、1%绵羊红细胞、肝素抗凝人血、无钙镁 Hanks 液、水平离心机、 0.8%戊二醛、 37水浴箱、显微镜、其他；试验对象：试验同学试验原理：体外测定人外周血中T 淋巴细胞数量的方法有多种,以玫瑰花环试验最为简易常用, T 淋巴细胞数量的变化与机体的细胞免疫功能状态有肯定关系
2、；人四周血液中T 淋巴细胞表面有绵羊红细胞受体,与绵羊红细胞相遇时, 在其四周形成花环样细胞团, 凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E 攻瑰花环形成细胞；正常人的花环形成率为5070%,大致可以代表四周血中 T 细胞的百分数；临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观看；操作方法：1、取肝素抗凝血 12ml,用分层液分出淋巴细胞并洗涤,用 Hanks 液调整细胞浓度为 22.5 10 6ml；2、取小试管加入 l ml 淋巴细胞悬液及 5 分钟；1%羊红细胞 0. l ml ,混匀置 37水浴箱3、8001000 r/min 低速离心 5 分钟,放 4冰箱 2 小时；4、轻轻旋转试管使团块混匀,加 2
3、 滴 0.8%戊二醛液,摇匀,室温静置 10 分钟,使 E 花环固定；5、取悬液一滴放于载玻片上,将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色 3 分钟；6、弃去染液,待干后油镜观看,计数 出百分率；200 个淋巴细胞中形成花环的细胞效,算试验现象与数据： 1、淋巴细胞染成深蓝色,羊红细胞染成淡红色；2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形 成细胞；结果分析与结论：共计200 个 T 淋巴细胞,算出形成花环细胞占全细胞数的百分率；正常人的花环形成率为 5070%,大致可以代表四周血中 T 细胞的百分数；临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观看；名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,
4、共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案留意事项： 1.离心时留意使用 8001000r/min 低速离心；2.要轻轻旋转试管使团块混匀,以防形成的花环散开；摸索与创新：实 验二试验名称：淋巴细胞转化试验 方案学时：试验目的与要求： 1. 把握淋巴细胞转化现象的试验方法和原理；2. 熟识淋巴母细胞形状学观看方法；试验仪器、试剂： 1、正常人淋巴细胞（用分层液分出） ；2、培育液： 0.5%水解乳蛋白 Hanks 氏液（含 20%小牛血清和 青霉素 100 单位 /ml、链霉素 100 微克/ml）；用 5.6%NaHCO3 调整 PH 至 7.27.4；3
5、、植物血凝素 PHA,姬姆萨染液；4、青霉素小瓶、吸管、载玻片、显微镜、离心机、恒温箱等；试验对象：试验同学试验原理： T 淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原（PHA、PWM 和 ConA）刺激均能使细胞发生转化； T 淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平, 常被作为细胞免疫功能指标之一；淋巴细胞转化试验可从四周血中分别出淋巴细胞,也可采纳全血试验；操作方法：1、制备细胞悬液：用培育液将淋巴细胞稀释成 2 l0 6/ml,细胞悬液；2、分装：向两个小瓶中各加 2ml,细胞悬液 ,一瓶加 PHA 0.1ml100 单位 ,另瓶不加作对比；3、37培育 72 小时；离心沉淀,用 Han
6、ks 液洗两次；4、用沉淀推成血片 ,加姬姆萨染液栗色 ,镜下观看计数 200 个以上淋巴细胞, 算出转化率；试验现象与数据：1、成热的淋巴细胞 :与外周血中小淋巴细胞形状一样、直径 68 微米,核染色质网密、无核仁、胞浆略大于核贡轻度嗜碱性；2、过度型淋巴细胞 :直径 10 一 20 微米核质密,但有明显核仁；3、淋巴母细胞,细胞增大,形状不规章,直径2030微米,核也增大,染色质网纤细有核仁 12 个,胞浆扩大,强嗜碱性可见数个空泡及颗粒；4、网状细胞样母细胞：细胞增,形状不规章,核淡染有 核仁,胞浆扩大、含空泡,嗜碱性不强有透亮感；1 一 2 个大小不规章的名师归纳总结 - - - -
7、- - -第 2 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案用姬姆萨染色后,运算200 个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数（包括过渡型、母细胞和分裂相淋巴细胞） ,依转比的百分率判定 T 淋巴细胞的功能；结果分析与结论：对比管转化率 1%左右,加 PHA 之管转化主约为 70%左右；T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平,常被作为细胞免疫功能指标之一；留意事项：摸索与创新：实 验 三试验名称：中性粒细胞吞噬功能测定方案学时： 4 学时试验目的与要求： 1、把握中性粒细胞吞噬白色葡萄球菌试验的操作过程 2、把握瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的运算试
8、验仪器、 试剂：葡萄球菌培育液抗凝剂 载玻片 瑞氏染液水浴箱 离心机 注射器 止血带 消毒药水 试验对象：试验同学 试验原理：中性粒细胞具有非特异性的吞噬功能；操作方法：1. 采血：取人静脉血 2 毫升,放入含肝素的小试管中,混匀,防止凝血；2. 菌液制备：取葡萄球菌液,加生理盐水离心洗涤 23 次2000r/min, 510min）,去上清,留沉淀加入生理盐水,用比浊法配制到相宜浓度（1107个/ml）；3. 混合温浴：将制备好的菌液 0.5 毫升加入到抗凝的人静脉血中轻轻混匀,置于 37水浴箱中水浴 30 分钟（每 10 分钟轻摇匀一次）；4. 吸取混合悬液点在玻片上,制成血涂片,干燥后进
9、行瑞氏染色,油镜下观看；试验现象与数据：镜下可见中性粒细胞细胞核呈蓝色,被吞噬的葡萄球菌呈蓝（紫）色,计数 200 个中性粒细胞,并运算吞噬阳性细胞的百 分率；结果分析与结论：吞噬率吞噬细菌中性粒细胞 留意事项： 1. 菌液配备时留意无菌操作；/ 200 个中性粒细胞 100%2. 留意静脉血和菌液应按肯定体积比混合,血 菌 =5 1摸索与创新：名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案实 验 四试验名称：凝集反应 方案学时：试验目的与要求： 1、把握抗原抗体反应的特异性；2、熟识凝集反应的原理、方法和分类
10、；试验仪器、试剂： 1、妊娠诊断血清 抗 HCG 血清 ；2、妊娠诊断抗原 吸附有 HCG 的免疫微球 ；3、待检尿、正常尿、生理盐水、吸管、试管、玻片等；试验原理：凝集反应是完整的细菌、 红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在肯定条件下显现 凝集物的现象； 参加反应的抗原称凝集原, 抗体称凝集素； 凝集反应包括直接凝 集反应、间接凝集反应、 间接凝集抑制反应、 反向间接凝集反应、 协同凝集试验、抗球蛋白试验等；本试验介绍间接凝集抑制反应；可溶性抗原与抗体结合后不显现凝集；如把可溶性抗原吸附在载体微球上,成为人工免疫微球, 再与抗体结合即显现凝集, 此称间接凝集反应； 由于载体微 球增大了可溶性抗原的
11、反应面积, 微球上少量抗原存在就足以显现肉眼可见的反 应；这种反应的敏锐性比沉淀反应高得多；如先使可溶性抗原与抗体充分结合,再加入有关的免疫微球；因抗体已被抗原结合,不再显现免疫微球的凝集现象；这一试验称间接凝集抑制反应；绒毛膜促性腺激素 HCG为可溶性抗原,在妊娠尿中含量显著增高；如尿中有此抗原存在与相应抗体抗一 HCG结合后,加入吸附HCG 的免疫微球时,不显现凝集现象,呈匀称乳液,如尿中无HCG 存在,没有抗原与抗体结合,再加入相应的免疫微球时,即显现肉眼可见的凝集 即凝集未被抑制 ；操作方法：1、取一干净玻片,用蜡笔划分 1、2 两格； 图 1 待检尿 正常尿1、阳性结果 2、阴性结果
12、2、加被检尿滴于 1 格内,加正常尿滴于 2 格内；3、每滴尿中各加抗 HCG 血清 1 滴摇匀或用牙签混匀；名师归纳总结 4、再于各滴中加（ HCG 乳胶抗原； HCG 兔疫微球） 1 滴；混匀,连续摇动2第 4 页,共 8 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案3 分钟,肉眼观看结果；试验现象与数据：妊娠尿滴呈匀称乳状,无凝集现象阳性 ；正常尿滴显现明显凝集颗粒阴性 ；结果分析与数据：摸索与创新：试验八试验名称：沉淀反应 方案学时：试验目的与要求： 1、把握抗原抗体反应的特异性和沉淀反应的原理；2、熟识双向琼脂扩散、 单向琼脂扩散的
13、操作方法和结果分析；试验仪器、试剂：（一） 双向琼脂扩散试验：1、抗体：甲胎蛋白诊断血清；2、抗原:肝癌病人甲胎蛋白阳性血清或正常人胚胎组 织浸出液,待检血清；3、1%生理盐水琼脂、载玻片、打孔器、毛细管等；（二）单向琼脂扩散试验：1、3%生理盐水琼脂；2、抗体 :免抗人毛 Ig 抗体血清；3、抗原 :待检人血清、 IgG 参考抗原；4、塑料板、吸管、打孔器；试验对象：试验同学试验原理：（一） 双向琼脂扩散试验 利用可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂对应孔中各自向四周进行扩散,如 抗原抗体相对应, 两者在比例适当处, 就显现肉眼可见的白色沉淀线；如同时具 有几种抗原抗体系统,因各自的扩散速度不同
14、,可在琼脂中显现多条沉淀线；（二） 单向琼脂扩散试验单扩散试验是一种定量试验方法；先将肯定量抗体混合于琼脂中, 倾注于平板上；凝固后打孔；加入待测抗原；如抗原与抗体一样时,抗原向孔四周扩散,与孔四周抗体形成抗原抗体复合物,呈白色沉淀环, 沉淀环直径大小与抗原浓度成正比；如先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线,就未知标本中的抗原含量,即可从标准曲线中求出；本试验主要用于检查标本中各种 成分的测定；操作方法（一） 双向琼脂扩散试验 1、将 1%生理盐水琼脂加热溶化；Ig 与血清中各种补体名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 名
15、师精编 优秀教案2、制备琼脂板 :取干净载片一片,放一水平台上,将溶化的 25m1 琼脂趁热用吸管注于玻片上,使其自然流成平面,琼脂凝固后用打孔器打孔,去掉孔中的琼脂；3、加样 :中心孔中加入甲胎蛋白 （AFP）诊断血清, 1、4 孔加肝癌病人阳性血清,2、3、5、6 孔加待检血清；加血清至满勿外溢；不行有气泡；4、加样后,将掠脂板放入有肯定湿度带盖容器中,置 果；（二） 单向琼脂扩散试验37温箱, 24 小时观看结1、制备含抗 IgG 抗体的琼脂板 :溶化的 3%琼脂、待冷至 56时吸取 1.5ml 琼脂 与等量适当稀释的抗 IgG 抗体混合匀称； 倾注于水平放置的塑料板上, 制成厚薄匀称的
16、琼脂板；凝固后用打孔器打孔二排,每排 整光滑；2、加样 :用微量加样器加样；5 孔、孔距 810mm,孔要圆图示 单向琼脂扩散试验模式1 第一排五孔分别加入不同浓度 20、25、50、100、200 倍的参考 IgG 抗原 10 l；2其次排五孔,同法加1:50 待检血清 10 l, 3 将琼脂板平放于保持肯定湿度的带盖容器内, 37温箱放置 24 小时观看结果；试验现象与数据：结果分析与结论：（一） 双向琼脂扩散试验 1、1、4 孔为阳性对比孔 加已知阳性标本 ,与中心孔间显现乳白色沉淀线；2、其余各孔与中心孔如显现沉淀线,且一端与阳性对比沉淀线相吻合者为阳性；证明该份血清含有甲胎蛋白； 如
17、两条沉淀线相交, 说明二者抗原性不同, 显现的 沉淀线另一种抗原抗体反应,不能判定阳性；3、如待检孔与中心抗体孔间未显现沉淀线为阳性,证明待检血清中没有甲胎蛋 白；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案图示 双向琼脂扩散试验结果2、6 孔：吻合沉淀线（阳性）；5 孔：交叉沉淀线（阴性）；3 孔：无沉淀线（阴性） ；（二）单向琼脂扩散试验标准曲线的绘制及血清标本中 IgG 含量的测定；1、以各稀释度标准抗原孔沉淀环直径为横座标,相应孔中 半对数座标纸上作图,画出标准曲线；2、依待检血清标本孔沉淀直径,查标
18、准曲线,将查得的唾 释倍数,即为血清中 IgG 的含量；留意事项：摸索与创新：实 验 九IgG 含量为纵座标在G 含量乘以标本的稀试验名称：巨噬细胞吞噬功能试验 方案学时：试验目的与要求： 1、把握巨噬细胞的生物学功能；2、熟识巨噬细胞吞噬功能试验的原理和操作方法；试验仪器、试剂： 1、1%鸡红细胞悬液、瑞氏染液；2、6%可溶性淀粉肉汤肉汤培育液 100ml 加入可溶性淀粉6g,混匀后煮沸灭菌备用； ；3、解剖小器械一套、无菌注射器、显微镜；试验动物：小白鼠试验原理 : 巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性,通常选用鸡红细胞作为吞噬颗粒,将其注入小鼠腹腔中, 腹腔中巨噬细胞就将鸡红细胞吞入；取小鼠
19、腹腔液涂片、 染色后可见鸡红细胞被吞噬的现象, 计数 100 个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数 可判定其吞噬功能；操作方法：名师归纳总结 1、于验前 3 天,小白鼠腹腔内注射6%可溶性淀粉肉汤1ml；第 7 页,共 8 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 名师精编 优秀教案2、试验当天于每只小鼠腹腔内注射0.5ml 1%鸡红细胞悬液,并轻揉腹部；3、注射后 30min,将小鼠处死、取腹腔液涂片并行瑞氏染色；4、油镜观看涂片；试验现象与数据：镜下可见吞噬细胞细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞胞浆呈红色, 而核就然成蓝色（鸡红细胞有细胞核） ；计数 100 个吞噬细胞,并运算吞噬阳性细胞的百 分率；结果分析与结论：吞噬率 吞噬鸡红细胞阳性细胞 /100 个巨噬细胞 100% 吞噬率与试验前腹腔刺激产生吞噬细胞、吞噬的时间等有关；留意事项：1、小白鼠腹腔注射时留意不要刺伤内脏；2、如小鼠腹腔液过少时,可注入适量的生理盐水；3、被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短就尚未被吞噬,因此必需掌 握好时间；摸索与创新：名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 8 页