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1、 药品质量标准分析方法验证和确认药品质量标准分析方法验证和确认 n一、法规要求n二、分析方法验证原则及类型n三、分析方法验证内容n四、分析方法验证常见问题一、法规要求n中国药典（2010年版）凡例n检验方法和限度n二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法进行比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。一、法规要求n药品生产质量管理规范（2010年修订）n第一百四十二条当影响产品质量的主要因素，如原辅料、与药品直接接触的包装材料、生产设备、生产环境（或厂房）、生产工艺、检验方法等发生变更时，应当进行确认或验证。
2、必要时，还应当经药品监督管理部门批准。一、法规要求n药品生产质量管理规范（2010年修订）n第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：1.采用新的检验方法；2.检验方法需变更的；3.采用中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠；一、法规要求分析方法验证或确认指导原则机构或组织机构或组织文件名称文件名称美国药典（USP）Validation of compend procedures 方法验证
3、Verification of compendial procedures 方法确认人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）Q2（R1）Validation of Analytical Procedures 分析方法验证中国药典（2010年版）一部附录“中药质量标准分析方法验证指导原则”二部附录“药品质量标准分析方法验证指导原则”n1、分析方法验证的定义：根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。二、分析方法验证原则及类型二、分析方法验证原则及类型n2、分析方法验证的目的：（1）证明采用的分析方法是科学、合理；（2）证明分析方
4、法能有效控制药品的内在质量n3、分析方法验证原则n用于检验的分析方法符合下列情形之一但不限于以下情况的，应当对检验方法进行验证：新建的检验方法，包括新建的产品检验方法和设备清洁验证残留物检验方法等；采用中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检验方法；二、分析方法验证原则及类型二、分析方法验证原则及类型n3、分析方法验证原则n用于检验的分析方法符合下列情形之一但不限于以下情况的，应当对检验方法进行验证：将法定方法用于测定新药，或将某一品种的法定测定方法用于另一品种；将法定方法用于测定新药，或将某一品种的法定测定方法用于另一品种；二、分析方法验证原则及类型n3、分析方法验证原则n用于检验的分析方
5、法符合下列情形之一但不限于以下情况的，应当对检验方法进行验证：检验用设备主要部分改变、药物生产工艺变更、制剂的组分变更、检验方法需变更的；原分析方法进行修改时；法规规定的其他需要验证的检验方法。二、分析方法验证原则及类型n4、分析方法验证类型n鉴别试验n杂质定量或限量检查n原料药或制剂中有效成分含量测定n制剂中其他成分（如防腐剂、残留物、添加剂等）的测定n药品溶出度、释放度等检查中溶出量测定三、分析方法验证内容1、准确度n定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。n验证方法（原料）：测定已知含量的对照品或供试品；测定结果与其他方法比较。1、准确度n验证方法（制剂）：直接回收法；加样
6、回收法；测定结果与其他方法比较。1、准确度n验证方法（杂质定量测定）：直接回收法；测定结果与其他方法比较。表1 样品中待测定成分含量和回收率限度待测定成分含量待测定成分含量回收率限度回收率限度100%98-101%10%95-102%1%92-105%0.1%90-108%0.01%85-110%10g/g(ppm)80-115%1 g/g75-120%10g/kg(ppb)70-125%2、精密度-重复性n定义：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。n验证方法：配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试。n在规定范围内，取
7、同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，用至少测定6 次的结果进行评价；n或设计3 个不同浓度，每个浓度分别制备3 份供试品溶液进行测定，用9 个测定结果进行评价。2、精密度-重复性2、精密度-中间精密度n验证方法：配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由二个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试。3、精密度-重现性n验证方法：配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由不同实验室、不同人员进行测试。表2 样品中待测定成分含量和精密度RSD可接受范围待测定成分含量待测定成分含量重复性（重复性（RSD）重现性（重现性（RSD）100%1%2%10%1.5%3%1%2%4%0.1%3%6%0.01%4%8%
8、10g/g(ppm)6%11%1 g/g8%16%10g/kg(ppb)15%32%3、专属性n定义：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。n验证方法（鉴别反应）：要求阴性样品均呈负反应。3、专属性n验证方法（含量测定及有关物质）：要求辅料不干扰，杂质分离度符合要求；阴性对照：薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱；影响因素试验：杂质检查考察分离度。3、专属性n可接受标准（含量测定）：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0，以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。3、专属性n可接受标准（有关物质）
9、：空白对照应无干扰，该杂质峰与其他峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。4、线性n定义：指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接程正比关系的程度。n验证方法：在80%至120%的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算含量，进行线性回归分析。4、线性n可接受标准（含量测定）：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴的截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的RSD应不大于2.0%.4、线性n可接受标准（有关物质）：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴的截距应在100%响应值的25%以内，响应因子的RSD应不大于10%.5、范围n定义：范围系指能达
10、到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。n范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。5、范围n可接受标准：原料药和制剂含量测定，范围一般为测试浓度的80%120%；制剂含量均匀度检査，范围一般为测试浓度的70%130%,特殊剂型，如气雾剂和喷雾剂，范围可适当放宽。5、范围n可接受标准：溶出度或释放度中的溶出量测定，范围一般为限度的20%，如规定了限度范围，则应为下限的-20%至上限的+20%；5、范围n可接受标准：杂质测定，范围应根据初步实际测定数据，拟订为规定限度的20%。6、检测限n定义：指试样中被测物能被检测出的最低量。n验证方法（直观法）
11、：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。6、检测限n验证方法（信噪比法）：把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。n可接受标准：杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。7、定量限n定义：指试样中被测物能被定量测定的最低量。n验证方法：把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地定量的最低浓度或量。n可接受标准：杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。8、耐用性n定义：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。n验证方法：分别考察流动相比例变化5%、流动相pH变化 0.2、柱温变化5、
12、检测波长变化5nm、流速相对值变化20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测定二次。8、耐用性n液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH 值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。n气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相、不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。n经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。8、耐用性n可接受标准：各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离，各条件下的含量数据（n=6）的RSD应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在 0.1%以内。9、系统适应
13、性n验证方法（含量测定）：配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析。n验证方法（有关物质）：配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析。9、系统适应性n可接受标准（含量测定）：该杂质峰面积的相对标准差（RSD）应不大于2.0%，保留时间的RSD应不大于1.0%，杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。n可接受标准（有关物质）：该杂质峰面积的相对标准差（RSD）应不大于2.0%，保留时间的RSD应不大于1.0%，杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。10、溶液稳定性n验证方法：按照分析方法分别配制对照品溶液与供试品溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后将
14、上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4）中，在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。n可接受标准：主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在 0.1%以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。11、溶出量测定方法验证n如溶出量测定所用的溶剂（溶出介质）与含量测定的溶剂不一致；n溶出量测定浓度与含量测定浓度不一致；n溶出度测定制剂为胶囊剂或需去除糖衣、薄膜衣后测定含量的片剂。11、溶出量测定方法验证n主要包括以下内容：（1）溶出介质及介质体积的选择；（2）溶出方法（转篮法与桨法）及其转速的选择；（3）溶出量测定方法的验证，（4）溶出度均一性试验（批内）、重现性试验（批间）等。12、滤膜吸附的验证n取溶出液过滤，舍去不同体积的初滤液后测定，观察响应值的变化，了解被测药物与滤膜的吸附情况。n取样后，一部分不过滤，直接采用高速离心，取上清液测定。另一部分采用过滤法，取所得的续滤液测定，考察两者间测定数据的差异。n取对照品溶液，经滤膜过滤后，与原溶液进行比较，观察测定前后数据的变化。13、滤膜吸附的验证n一般认为吸附量在2%以下时可忽略不计；n超过2%建议或在质量标准中明确注明滤膜规格或滤膜预处理方法（如煮沸1.5 h）、增加初滤液量（常规为5ml）或规定样品高速离心后取上清液测定。n四、分析方法验证常见问题