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1、实验七放线菌形态的观察实验的目的要求实验的目的要求v学习并掌握观察放线菌形态的基本方法学习并掌握观察放线菌形态的基本方法v初步了解放线菌的形态特征初步了解放线菌的形态特征放线菌放线菌是一类具有丝状分枝的单细胞是一类具有丝状分枝的单细胞，主要以外生孢子，主要以外生孢子的形式繁殖，的形式繁殖，革兰氏阳性革兰氏阳性，与细菌同属原核微生物。，与细菌同属原核微生物。放放线菌菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状呈放射线菌菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状呈放射状生长，并因此而得名。放线菌有特殊的土霉味。状生长，并因此而得名。放线菌有特殊的土霉味。分布：分布：含水量较低、有机物丰富、呈微碱性的土壤中。
2、含水量较低、有机物丰富、呈微碱性的土壤中。估计每克土壤中约含放线菌孢子估计每克土壤中约含放线菌孢子107个。个。应用：应用：放线菌对人类最突出的贡献就是它能产生大量的、放线菌对人类最突出的贡献就是它能产生大量的、种类繁多的抗生素。放线菌还是酶类、维生素的生产种类繁多的抗生素。放线菌还是酶类、维生素的生产菌；有的放线菌有固氮能力；放线菌在自然界物质循菌；有的放线菌有固氮能力；放线菌在自然界物质循环中也起着重要作用，由于它们具有较强的分解复杂环中也起着重要作用，由于它们具有较强的分解复杂有机物的能力，对于土壤肥力的提高也有重要作用。有机物的能力，对于土壤肥力的提高也有重要作用。危害：危害：只有极少
3、数放线菌对人类构成危害，某些放线菌只有极少数放线菌对人类构成危害，某些放线菌属菌种引起动物放线菌病（皮肤、脑、肺和足部感染）属菌种引起动物放线菌病（皮肤、脑、肺和足部感染），某些诺卡氏菌属菌种引起人和动物的诺卡氏菌病；，某些诺卡氏菌属菌种引起人和动物的诺卡氏菌病；还有少数放线菌能引起植物病害。还有少数放线菌能引起植物病害。营养菌丝营养菌丝气生菌丝气生菌丝孢子丝孢子丝营养菌丝和气生菌丝形态比较营养菌丝和气生菌丝形态比较 营养菌丝营养菌丝 气生菌丝气生菌丝位置位置颜色颜色直径直径在培养基内和表面在培养基内和表面位于下层位于下层 浅浅 细细 在培养基上方在培养基上方位于上层位于上层深深粗粗实验材料实
4、验材料v菌种：菌种：细黄链霉菌和青色链霉菌细黄链霉菌和青色链霉菌v培养基：培养基：高氏高氏I号琼脂号琼脂v仪器和用具仪器和用具载玻片载玻片盖玻片盖玻片滤纸滤纸平皿平皿玻璃纸玻璃纸玻璃涂棒玻璃涂棒显微镜显微镜镜头纸镜头纸接种环接种环接种铲接种铲镊子镊子方法方法v插片法插片法v玻璃纸法玻璃纸法v印片印片法法插片法原理插片法原理v将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜
5、检。轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。v这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。征，而且便于观察不同生长期的形态。插片法插片法v倒平板倒平板v接种接种v插片插片无菌操作用镊子将灭菌盖玻片以大约无菌操作用镊子将灭菌盖玻片以大约4545 角在接种线上插入琼脂内角在接种线上插入琼脂内。v培养培养将插片平板倒置，将插片平板倒置，2828 C C 培养培养3-53-5天天。v镜检镜检 用镊子小心拔出插片，用纸擦去背面培养物，将有菌的一面朝上放用镊子小心拔出插片，用纸擦去背面培养物，将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接显微镜观察在
6、载玻片上，直接显微镜观察。宜用略暗光线；先低倍再高倍观察；染色后效果更好（宜用略暗光线；先低倍再高倍观察；染色后效果更好（0.1%吕氏碱性美蓝）吕氏碱性美蓝）玻璃纸法原理玻璃纸法原理v玻璃纸是一种透明的半透膜，具有半透膜特性，其透光玻璃纸是一种透明的半透膜，具有半透膜特性，其透光性与载玻片的基本相同，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平性与载玻片的基本相同，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。定在载玻片
7、上直接镜检。v这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。不同生长期的形态特征。玻璃纸法玻璃纸法v倒平板倒平板v铺玻璃纸铺玻璃纸 无菌操作用镊子将灭菌的玻璃纸铺在无菌操作用镊子将灭菌的玻璃纸铺在高氏高氏I I号琼脂表面，用无菌玻璃号琼脂表面，用无菌玻璃涂布棒将玻璃纸压平。涂布棒将玻璃纸压平。v接种接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在玻璃纸玻璃纸上划线接种上划线接种。v培养培养将平板倒置，将平板倒置，2828 C C培养培养3-53-5天天。v镜检镜检 在洁净载玻片上滴一滴水，用镊子
8、小心取出玻璃纸，菌面朝上平贴在洁净载玻片上滴一滴水，用镊子小心取出玻璃纸，菌面朝上平贴在载玻片上，显微镜观察在载玻片上，显微镜观察。勿碰动玻璃纸菌面的培养物；玻璃纸与玻片间勿留气泡；勿碰动玻璃纸菌面的培养物；玻璃纸与玻片间勿留气泡；先低倍再高倍观察先低倍再高倍观察印片法原理印片法原理v将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。v方法简便，但形态特征可能有所改变。方法简便，但形态特征可能有所改变。印片法印片法
9、v印片印片v接种接种v培养培养v倒平板倒平板v染色染色 用接种铲或解剖刀将菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一用接种铲或解剖刀将菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上，取另一块载玻片在酒精灯上略微加热后，盖在菌苔上，载玻片上，取另一块载玻片在酒精灯上略微加热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢子）黏附在微热的载玻片轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢子）黏附在微热的载玻片上，印迹朝上，通过酒精灯火焰上，印迹朝上，通过酒精灯火焰2-32-3次固定。次固定。用石炭酸复红覆盖印迹，染色约用石炭酸复红覆盖印迹，染色约1 1分钟后水洗分钟后水洗。v镜检镜检干后用油镜观察干后
10、用油镜观察。不要用力太大压碎琼脂，也不要错动，以免改变放线菌自然形态不要用力太大压碎琼脂，也不要错动，以免改变放线菌自然形态营养菌丝营养菌丝v又称为基内菌丝、基质菌丝或一级菌丝；又称为基内菌丝、基质菌丝或一级菌丝；v是孢子发芽后不断伸长、分枝并放射状在培是孢子发芽后不断伸长、分枝并放射状在培养基内部和表面形成的大量色浅、较细的养基内部和表面形成的大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的丝状具有吸收营养和排泄代谢废物功能的丝状结构。结构。v空间位置位于下层。空间位置位于下层。气生菌丝气生菌丝v又称为二级菌丝；又称为二级菌丝；v是由基内菌丝向上向空间方向分化形成的颜色是由基内菌丝向上向空间方向分化形成的颜色较深、直径较粗的分枝菌丝。较深、直径较粗的分枝菌丝。v空间位置位于上层。空间位置位于上层。孢子丝孢子丝v孢子丝是由气生菌孢子丝是由气生菌丝分化形成的各种丝分化形成的各种形状和着生方式的形状和着生方式的丝状结构。丝状结构。v形态多样：有直、形态多样：有直、波曲、钩状、螺旋波曲、钩状、螺旋状、轮生等。状、轮生等。v空间位置位于上层。空间位置位于上层。单轮生单轮生螺旋状螺旋状谢谢观赏！2020/11/520