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1、实验二 放线菌、真菌形态的观察 细菌芽孢染色目的要求n学习观察放线菌和真菌形态的基本技术；n加深对放线菌和真菌形态特征的理解；n掌握细菌芽孢染色的方法。原理n放线菌与真菌虽然都有分支状菌丝，但两者在系统发育学上分属两大界：放线菌-原核生物，16SrRNA；真菌-真核生物（低等），18SrRNA。n链霉菌是放线菌的重要类群，其菌丝体分为基内菌丝（营养菌丝）、气生菌丝两部分，气生菌丝的顶端分化为孢子丝，生长到一定时期形成成熟的孢子。可用插片法观察链霉菌的孢子。n酵母菌是单细胞真核微生物，其细胞比细菌细胞大，呈卵圆形或柱形。可制成水浸片在高倍镜下观察酵母菌的形态和繁殖方式（芽殖）。原理（2）n美蓝染
2、色可区分死活细胞，因为在活细胞中美蓝被还原为无色，死细胞不能使美蓝发生还原反应，故死细胞呈现为蓝色。n本实验中芽孢染色采用石炭酸复红初染（加热）和美蓝复染法，基于石炭酸复红为酸性染料，与菌体结合差，易被水冲洗掉，而芽孢中的复红染料却难以脱去（芽孢壁较厚，芽孢一旦着色后难以脱色）。结果是菌体被染成蓝色，芽孢呈红色。插片法n高氏1号琼脂培养基倒平板 无菌盖玻片斜插（45oC）入琼脂 划线接种放线菌 28oC培养6-7d 取出盖玻片 固定 染色 水洗 镜检水浸片n滴加吕氏美蓝于载玻片 接种环取酵母培养物 盖上盖玻片（防止气泡产生）镜检Streptomyces scabiesSaccharomyces cerevisiae细菌芽孢染色n绘图示青色链霉菌的气生菌丝、孢子丝；n绘图示酵母菌的形态。n思考题：为什么芽孢染色法中用酸性复红初染时需要加热并维持5 min？