精液冷冻概述.ppt

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1、精液冷冻技术概述四川大学华西第二医院人类精子库四川大学华西第二医院人类精子库四川大学华西第二医院人类精子库精液冷冻历史回顾精液冷冻历史回顾 17761776年年年年SpallanzaniSpallanzani偶偶偶偶然然然然发发发发现现现现将将将将人人人人精精精精液液液液埋埋埋埋藏藏藏藏于于于于冰冰冰冰雪雪雪雪仍仍仍仍可可可可存活存活存活存活18861886年年年年MantegazzaMantegazza发发发发现现现现在在在在1515下下下下的的的的精精精精子子子子可可可可以以以以存存存存活活活活较较较较长时间;长时间;长时间;长时间;19371937年年年年JannelJannel报告人类

2、精子可在报告人类精子可在报告人类精子可在报告人类精子可在-196-196中存活;中存活;中存活;中存活;19491949年年年年PolgePolge首首首首先先先先发发发发现现现现甘甘甘甘油油油油对对对对冷冷冷冷冻冻冻冻精精精精子子子子具具具具有有有有特特特特殊殊殊殊保保保保护护护护作作作作用。用。用。用。2四川大学华西第二医院人类精子库冷冻精液的临床意义冷冻精液的临床意义供供供供者者者者人人人人工工工工授授授授精精精精(AIDAID)使使使使用用用用方方方方便便便便,并并并并且且且且可可可可以以以以配配配配合合合合女女女女性性性性生生生生殖殖殖殖周周周周期期期期进进进进行;行;行;行;对有先

3、天遗传疾病和严重传染性疾病的患者可以使用;对有先天遗传疾病和严重传染性疾病的患者可以使用;对有先天遗传疾病和严重传染性疾病的患者可以使用;对有先天遗传疾病和严重传染性疾病的患者可以使用;进进进进行行行行生生生生殖殖殖殖保保保保险险险险;如如如如男男男男性性性性绝绝绝绝育育育育手手手手术术术术者者者者,肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤患患患患者者者者化化化化疗疗疗疗前前前前,从从从从事事事事危危危危险险险险行业者等;行业者等;行业者等;行业者等;对于少、弱精症者,可多次采集冷冻后加以浓缩;对于少、弱精症者,可多次采集冷冻后加以浓缩;对于少、弱精症者,可多次采集冷冻后加以浓缩;对于少、弱精症者,可多次采集冷冻后加

4、以浓缩;对对对对于于于于取取取取精精精精困困困困难难难难和和和和梗梗梗梗阻阻阻阻性性性性无无无无精精精精症症症症的的的的患患患患者者者者在在在在ICSIICSI治治治治疗疗疗疗时时时时,用用用用冻冻冻冻融融融融精精精精子子子子代代代代替替替替新新新新鲜鲜鲜鲜精精精精子子子子可可可可避避避避免免免免反反反反复复复复抽抽抽抽吸吸吸吸睾睾睾睾丸丸丸丸或或或或附附附附睾睾睾睾,利利利利于于于于医医医医患患患患双双双双方方方方掌掌掌掌握握握握治治治治疗进度。疗进度。疗进度。疗进度。3四川大学华西第二医院人类精子库冷冻损伤原理冷冻损伤原理 冰晶损伤学说冰晶损伤学说icecrystaldamage溶液效应学

5、说溶液效应学说solutedamage4四川大学华西第二医院人类精子库冷冻原理冷冻原理降温过程分期:降温过程分期:降温过程分期:降温过程分期:温度休克期温度休克期温度休克期温度休克期RT5RT5潜热扩散期潜热扩散期潜热扩散期潜热扩散期5 5 5 50 0 0 0 冰晶形成期冰晶形成期冰晶形成期冰晶形成期0 0 0 015151515再结晶期再结晶期再结晶期再结晶期15157979保存期保存期保存期保存期80801961965四川大学华西第二医院人类精子库冷冻损伤原理冷冻损伤原理 精子精子示意图:示意图:示意图:示意图:精子细胞外精子细胞外冰晶形成冰晶形成胞内冰晶形成胞内冰晶形成细胞脱水细胞脱水

6、冰晶损伤冰晶损伤溶液损伤溶液损伤降温降温快速快速慢速慢速6四川大学华西第二医院人类精子库冷冻对精子产生的损伤冷冻对精子产生的损伤 超微结构的损伤:超微结构的损伤:超微结构的损伤:超微结构的损伤:冷冻复温后的精子外膜变薄,波浪状改变或破损,胞浆、顶体内冷冻复温后的精子外膜变薄,波浪状改变或破损,胞浆、顶体内冷冻复温后的精子外膜变薄,波浪状改变或破损,胞浆、顶体内冷冻复温后的精子外膜变薄,波浪状改变或破损,胞浆、顶体内和线粒体内透光度增加,顶体增宽,线粒体外形变圆,轴丝增粗,和线粒体内透光度增加,顶体增宽,线粒体外形变圆,轴丝增粗,和线粒体内透光度增加,顶体增宽,线粒体外形变圆,轴丝增粗,和线粒体

7、内透光度增加,顶体增宽,线粒体外形变圆,轴丝增粗,提示细胞肿胀是形态改变得主要征象。提示细胞肿胀是形态改变得主要征象。提示细胞肿胀是形态改变得主要征象。提示细胞肿胀是形态改变得主要征象。精子功能精子功能精子功能精子功能:日日日日本本本本学学学学者者者者研研研研究究究究根根根根据据据据精精精精子子子子顶顶顶顶体体体体功功功功能能能能和和和和穿穿穿穿透透透透率率率率无无无无显显显显著著著著变变变变化化化化,发发发发现现现现冷冷冷冷冻冻冻冻精子授精能力无下降。精子授精能力无下降。精子授精能力无下降。精子授精能力无下降。染色体染色体染色体染色体:目前对冷冻保存精子染色体自然畸变率报道不多,仍存在争论目

8、前对冷冻保存精子染色体自然畸变率报道不多,仍存在争论目前对冷冻保存精子染色体自然畸变率报道不多,仍存在争论目前对冷冻保存精子染色体自然畸变率报道不多,仍存在争论 7四川大学华西第二医院人类精子库冷冻保护原理冷冻保护液冷冻保护液冷冻保护液冷冻保护液渗透性渗透性渗透性渗透性 增加细胞内外的渗透压,降低细胞内外液的冰点,增加细胞内外的渗透压,降低细胞内外液的冰点,增加细胞内外的渗透压,降低细胞内外液的冰点,增加细胞内外的渗透压,降低细胞内外液的冰点,减少冰晶的形成。减少冰晶的形成。减少冰晶的形成。减少冰晶的形成。非渗透性非渗透性非渗透性非渗透性 调节调节调节调节PHPH,细胞外渗透压,增加营养细胞外

9、渗透压,增加营养细胞外渗透压,增加营养细胞外渗透压,增加营养不同温区最适的冷冻速率不同温区最适的冷冻速率不同温区最适的冷冻速率不同温区最适的冷冻速率研究表明过快或过慢的降温都是不合适的,应根据不同研究表明过快或过慢的降温都是不合适的,应根据不同研究表明过快或过慢的降温都是不合适的,应根据不同研究表明过快或过慢的降温都是不合适的,应根据不同的冷冻保护剂选择各个温区最佳的降温速度。目前还未找的冷冻保护剂选择各个温区最佳的降温速度。目前还未找的冷冻保护剂选择各个温区最佳的降温速度。目前还未找的冷冻保护剂选择各个温区最佳的降温速度。目前还未找到。到。到。到。8四川大学华西第二医院人类精子库冷冻保护剂冷

10、冻保护剂(CPM)根据根据根据根据CPMCPM的特性的特性的特性的特性:非渗透性非渗透性非渗透性非渗透性CPMCPM:卵黄、葡萄糖、蔗糖卵黄、葡萄糖、蔗糖卵黄、葡萄糖、蔗糖卵黄、葡萄糖、蔗糖 渗透性渗透性渗透性渗透性CPMCPM:甘油甘油甘油甘油根据根据根据根据CPMCPM种类种类种类种类:单一甘油型单一甘油型单一甘油型单一甘油型 复合甘油型复合甘油型复合甘油型复合甘油型 无甘油型无甘油型无甘油型无甘油型9四川大学华西第二医院人类精子库冷冻保护剂冷冻保护剂(CPM)各成分的主要作用各成分的主要作用各成分的主要作用各成分的主要作用:甘油甘油甘油甘油:有渗透性,当进入精子细胞内时使精子内的含水蛋白

11、质稳定,:有渗透性,当进入精子细胞内时使精子内的含水蛋白质稳定,:有渗透性,当进入精子细胞内时使精子内的含水蛋白质稳定,:有渗透性,当进入精子细胞内时使精子内的含水蛋白质稳定,降低细胞内液冰点,减少冷冻时细胞内冰晶的形成。但甘油本身降低细胞内液冰点,减少冷冻时细胞内冰晶的形成。但甘油本身降低细胞内液冰点,减少冷冻时细胞内冰晶的形成。但甘油本身降低细胞内液冰点,减少冷冻时细胞内冰晶的形成。但甘油本身对细胞也有一定的毒性,一般终浓度控制在对细胞也有一定的毒性,一般终浓度控制在对细胞也有一定的毒性,一般终浓度控制在对细胞也有一定的毒性,一般终浓度控制在7 71010。卵卵卵卵黄黄黄黄:提提提提高高高

12、高细细细细胞胞胞胞外外外外渗渗渗渗透透透透压压压压,含含含含有有有有卵卵卵卵磷磷磷磷脂脂脂脂,可可可可以以以以稳稳稳稳定定定定精精精精子子子子的的的的细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜,防防防防止止止止顶顶顶顶体体体体外外外外膜膜膜膜破破破破裂裂裂裂。它它它它的的的的缺缺缺缺点点点点是是是是冻冻冻冻融融融融后后后后有有有有大大大大量量量量的的的的颗颗颗颗粒粒粒粒和和和和碎碎碎碎片片片片,并并并并且有病毒感染和过敏反应当可能。且有病毒感染和过敏反应当可能。且有病毒感染和过敏反应当可能。且有病毒感染和过敏反应当可能。10四川大学华西第二医院人类精子库冷冻保护剂冷冻保护剂(CPM)各成分的主要作用各成分的主要

13、作用各成分的主要作用各成分的主要作用:葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖:与调节渗透压有关:与调节渗透压有关:与调节渗透压有关:与调节渗透压有关 缓冲系统缓冲系统缓冲系统缓冲系统:可以结合游离的:可以结合游离的:可以结合游离的:可以结合游离的H+H+和和和和OHOH,有助于溶液和精子脱水有助于溶液和精子脱水有助于溶液和精子脱水有助于溶液和精子脱水现在常用现在常用现在常用现在常用CPM:CPM:单一甘油型单一甘油型单一甘油型单一甘油型GGY YC C型(甘油卵黄柠檬酸钠型)型(甘油卵黄柠檬酸钠型)型(甘油卵黄柠檬酸钠型)型(甘油卵黄柠檬酸钠型)TESTTESTGGY YC C(TESTESTrisTris

14、缓冲系统缓冲系统缓冲系统缓冲系统GYCGYC)型型型型GGY YC CGG型(型(型(型(GYCGYC谷氨酰胺)谷氨酰胺)谷氨酰胺)谷氨酰胺)改良改良改良改良T TGG型(改良型(改良型(改良型(改良TyrodeTyrode液甘油型)液甘油型)液甘油型)液甘油型)11四川大学华西第二医院人类精子库冷冻保护剂冷冻保护剂(CPM)改良改良改良改良T TGG型,它的优点型,它的优点型,它的优点型,它的优点 有:有:有:有:相比有较好的冷冻复苏率(本精子库平均相比有较好的冷冻复苏率(本精子库平均相比有较好的冷冻复苏率(本精子库平均相比有较好的冷冻复苏率(本精子库平均62.662.6)可准确配制可准确配

15、制可准确配制可准确配制不含卵黄,消除可能的病毒感染和过敏反应不含卵黄,消除可能的病毒感染和过敏反应不含卵黄,消除可能的病毒感染和过敏反应不含卵黄,消除可能的病毒感染和过敏反应背景清晰,无大量颗粒和碎片背景清晰,无大量颗粒和碎片背景清晰,无大量颗粒和碎片背景清晰,无大量颗粒和碎片储存时间长,可达储存时间长,可达储存时间长,可达储存时间长,可达3 3个月个月个月个月12四川大学华西第二医院人类精子库降温程序分类:分类:分类:分类:程序降温:利用程序降温仪进行精确降温。程序降温:利用程序降温仪进行精确降温。程序降温:利用程序降温仪进行精确降温。程序降温:利用程序降温仪进行精确降温。手工降温:利用现有

16、降温设备和液氮蒸气分步骤降温。手工降温:利用现有降温设备和液氮蒸气分步骤降温。手工降温:利用现有降温设备和液氮蒸气分步骤降温。手工降温:利用现有降温设备和液氮蒸气分步骤降温。注:由于现在还没有找到降温过程中各个温区最佳降温速率,文献注:由于现在还没有找到降温过程中各个温区最佳降温速率,文献注:由于现在还没有找到降温过程中各个温区最佳降温速率,文献注:由于现在还没有找到降温过程中各个温区最佳降温速率,文献报道的各种降温程序精液复苏率效果不一!报道的各种降温程序精液复苏率效果不一!报道的各种降温程序精液复苏率效果不一!报道的各种降温程序精液复苏率效果不一!降温前处理:降温前处理:降温前处理:降温前

17、处理:在室温中将精液与在室温中将精液与在室温中将精液与在室温中将精液与CPM 1:1CPM 1:1CPM 1:1CPM 1:1混匀,通常是在混匀,通常是在混匀,通常是在混匀,通常是在20202020minminminmin逐量加入,且逐量加入,且逐量加入,且逐量加入,且用振荡器持续振荡,转速约用振荡器持续振荡,转速约用振荡器持续振荡,转速约用振荡器持续振荡,转速约300/300/300/300/minminminmin。此过程在提高精液复苏率中此过程在提高精液复苏率中此过程在提高精液复苏率中此过程在提高精液复苏率中起重要作用之一。起重要作用之一。起重要作用之一。起重要作用之一。13四川大学华西

18、第二医院人类精子库降温程序程序降温程序降温程序降温程序降温 得得得得到到到到多多多多数数数数学学学学者者者者的的的的认认认认同同同同,有有有有精精精精确确确确定定定定降降降降温温温温速速速速率率率率控控控控制制制制,复复复复苏苏苏苏率率率率较较较较高高高高。缺点是仪器昂贵,使用和维护费用也较高,不适合普及。缺点是仪器昂贵,使用和维护费用也较高,不适合普及。缺点是仪器昂贵,使用和维护费用也较高,不适合普及。缺点是仪器昂贵,使用和维护费用也较高,不适合普及。14四川大学华西第二医院人类精子库降温程序手工降温:手工降温:手工降温:手工降温:2525(RTRT下加下加CPMCPM)44-20minLV

19、-20minLV(LNLN上上5 5cmcm处)处)-10-10minLNminLN2525(RTRT下加下加CPMCPM)44-60min-60min2020-20minLN-20minLN2525(RTRT下下 加加 CPMCPM)44-20min-20min2020-20minLV-20minLV(LNLN上上5 5cmcm处处)-5-5minminLNLN2525(RTRT下加下加CPMCPM)LVLV(LNLN上上5 5cmcm处)处)-15-15minLNminLN15四川大学华西第二医院人类精子库复温程序 原则原则原则原则:是快冻快复、慢冻慢复是快冻快复、慢冻慢复是快冻快复、慢冻

20、慢复是快冻快复、慢冻慢复 方法方法方法方法:3737水浴快速复温水浴快速复温水浴快速复温水浴快速复温复复复复温温温温损损损损伤伤伤伤机机机机制制制制:MohammadMohammad等等等等连连连连续续续续观观观观察察察察精精精精子子子子在在在在冷冷冷冷冻冻冻冻过过过过程程程程中中中中的的的的损损损损伤伤伤伤情情情情况况况况发发发发现现现现绝绝绝绝大大大大多多多多数数数数的的的的细细细细胞胞胞胞损损损损伤伤伤伤发发发发生生生生在在在在复复复复苏苏苏苏期期期期。当当当当快快快快速速速速降降降降温温温温时时时时使使使使细细细细胞胞胞胞内内内内产产产产生生生生小小小小冰冰冰冰晶晶晶晶,如如如如果果果

21、果缓缓缓缓慢慢慢慢复复复复温温温温,小小小小冰冰冰冰晶晶晶晶将将将将会会会会融融融融合合合合成成成成大大大大冰冰冰冰晶晶晶晶对对对对细细细细胞胞胞胞形形形形成成成成损损损损伤伤伤伤;当当当当慢慢慢慢速速速速降降降降温温温温时时时时细细细细胞胞胞胞外外外外的的的的水水水水分分分分首首首首先先先先结结结结冰冰冰冰,胞胞胞胞外外外外溶溶溶溶质质质质浓浓浓浓度度度度升升升升高高高高导导导导致致致致精精精精子子子子细细细细胞胞胞胞脱脱脱脱水水水水,快快快快速速速速复复复复温温温温使使使使胞胞胞胞外外外外的的的的水水水水分分分分来来来来不不不不及及及及回回回回渗渗渗渗,造成精子的皱缩,形成溶质性损伤。造成

22、精子的皱缩,形成溶质性损伤。造成精子的皱缩,形成溶质性损伤。造成精子的皱缩,形成溶质性损伤。16四川大学华西第二医院人类精子库冷冻复温后的处理冷冻复温后的处理 使使使使用用用用精精精精子子子子营营营营养养养养液液液液可可可可使使使使复复复复温温温温后后后后的的的的精精精精子子子子在在在在较较较较长长长长时时时时间间间间内内内内保保保保持持持持良好的活动率。良好的活动率。良好的活动率。良好的活动率。使使使使用用用用化化化化学学学学物物物物质质质质如如如如:己己己己酮酮酮酮可可可可可可可可碱碱碱碱(PFPF)、2-2-脱脱脱脱氧氧氧氧腺腺腺腺苷苷苷苷(2-2-DADA)提高冷冻复苏后的精子的活率和

23、活力。提高冷冻复苏后的精子的活率和活力。提高冷冻复苏后的精子的活率和活力。提高冷冻复苏后的精子的活率和活力。17四川大学华西第二医院人类精子库精液研究的新进展精液研究的新进展 玻璃化低温保存玻璃化低温保存玻璃化低温保存玻璃化低温保存 最最最最理理理理想想想想化化化化的的的的精精精精液液液液保保保保存存存存方方方方法法法法。指指指指在在在在溶溶溶溶液液液液降降降降温温温温过过过过程程程程中中中中,相相相相变变变变后后后后直直直直接接接接转转转转变变变变为为为为非非非非晶晶晶晶态态态态(玻玻玻玻璃璃璃璃态态态态)的的的的固固固固态态态态。由由由由于于于于玻玻玻玻璃璃璃璃态态态态分分分分子子子子间间

24、间间的的的的关关关关系系系系和和和和液液液液态态态态没没没没有有有有明明明明显显显显变变变变化化化化,可可可可避避避避免免免免冰冰冰冰晶晶晶晶形形形形成成成成过过过过程程程程中中中中对对对对细细细细胞胞胞胞的的的的损损损损伤伤伤伤。要要要要形形形形成成成成玻玻玻玻璃璃璃璃态态态态必必必必须须须须有有有有两两两两个个个个条条条条件件件件:有有有有极极极极大大大大的的的的冷冷冷冷却却却却速速速速率率率率;极极极极大大大大增增增增加加加加溶溶溶溶液的浓度。液的浓度。液的浓度。液的浓度。18四川大学华西第二医院人类精子库精液研究的新进展精液研究的新进展冷冻损伤的新理论:冷冻损伤的新理论:冷冻损伤的新理

25、论:冷冻损伤的新理论:活性氧(活性氧(活性氧(活性氧(ROSROS)的损伤的损伤的损伤的损伤:精精精精液液液液冷冷冷冷冻冻冻冻过过过过程程程程中中中中产产产产生生生生较较较较多多多多的的的的活活活活性性性性氧氧氧氧,特特特特别别别别是是是是标标标标本本本本中中中中白白白白细细细细胞胞胞胞含含含含量量量量较较较较高高高高时时时时。从从从从样样样样本本本本中中中中除除除除去去去去白白白白细细细细胞胞胞胞或或或或冷冷冷冷冻冻冻冻前前前前用用用用抗抗抗抗氧氧氧氧化化化化剂剂剂剂处处处处理理理理,可可可可以以以以提高精子的活力和功能。提高精子的活力和功能。提高精子的活力和功能。提高精子的活力和功能。膜穿

26、透性膜穿透性膜穿透性膜穿透性:不不不不同同同同保保保保护护护护剂剂剂剂成成成成分分分分对对对对细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜的的的的穿穿穿穿透透透透性性性性,水水水水对对对对细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜的的的的穿穿穿穿透透透透性性性性,它它它它们们们们的的的的大大大大小小小小决决决决定定定定了了了了冷冷冷冷冻冻冻冻保保保保护护护护剂剂剂剂与与与与精精精精液液液液混混混混合合合合时时时时平平平平衡衡衡衡的的的的时时时时间间间间及及及及降降降降温温温温速速速速率率率率。穿透性越大的冷冻保护剂可以得到较高的冷冻复苏率。穿透性越大的冷冻保护剂可以得到较高的冷冻复苏率。穿透性越大的冷冻保护剂可以得到较高的冷冻复苏

27、率。穿透性越大的冷冻保护剂可以得到较高的冷冻复苏率。19四川大学华西第二医院人类精子库精液研究的新进展精液研究的新进展冷冻保护剂渗透压冷冻保护剂渗透压冷冻保护剂渗透压冷冻保护剂渗透压冷冷冷冷冻冻冻冻保保保保护护护护剂剂剂剂渗渗渗渗透透透透压压压压的的的的大大大大小小小小也也也也是是是是导导导导致致致致精精精精液液液液冷冷冷冷冻冻冻冻损损损损伤伤伤伤的的的的主主主主要要要要因因因因素素素素之之之之一一一一。冷冷冷冷冻冻冻冻保保保保护护护护剂剂剂剂渗渗渗渗透透透透压压压压20002000mOsmmOsm时时时时大大大大部部部部分分分分细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜会会会会受受受受到到到到破破破破坏坏坏坏

28、。这这这这一一一一损损损损伤伤伤伤同同同同时时时时也也也也与与与与细细细细胞胞胞胞本本本本身身身身可可可可以以以以承承承承受受受受渗渗渗渗透透透透压压压压变变变变化化化化的的的的程程程程度度度度,在在在在冷冷冷冷冻冻冻冻和和和和复复复复温温温温过过过过程中,如果渗透压变化超过细胞本身承受能力,严重的细胞将死亡。程中,如果渗透压变化超过细胞本身承受能力,严重的细胞将死亡。程中,如果渗透压变化超过细胞本身承受能力,严重的细胞将死亡。程中,如果渗透压变化超过细胞本身承受能力,严重的细胞将死亡。冷打击冷打击冷打击冷打击 精精精精子子子子从从从从室室室室温温温温降降降降到到到到0 0时时时时会会会会受受

29、受受到到到到损损损损伤伤伤伤,我我我我们们们们称称称称之之之之为为为为冷冷冷冷打打打打击击击击。它它它它往往往往往往往往决决决决定定定定于精子本身抗冷打击的能力。于精子本身抗冷打击的能力。于精子本身抗冷打击的能力。于精子本身抗冷打击的能力。20四川大学华西第二医院人类精子库本精子库冷冻试验进展n n已建立合理的已建立合理的精液冷冻程序精液冷冻程序n n共进行精液冷冻试验共进行精液冷冻试验169169例,平均复苏率达例,平均复苏率达62.662.6n n随着条件不断的摸索,冷冻复苏率也在不断地提高;随着条件不断的摸索,冷冻复苏率也在不断地提高;n n已建立比较稳定的精液冷冻方法,冷冻复苏率完全满已建立比较稳定的精液冷冻方法,冷冻复苏率完全满足卫生部的要求。足卫生部的要求。21四川大学华西第二医院人类精子库精液冷冻研究的方向寻找更加适合精液冷冻的冷冻保护剂;寻找更加适合精液冷冻的冷冻保护剂;探讨渗透压对精液冷冻产生的影响;探讨渗透压对精液冷冻产生的影响;活性氧(活性氧(ROSROS)对精液冷冻产生的影响及应对方法;对精液冷冻产生的影响及应对方法;根据冷冻保护剂选择各个降温区最佳降温速度;根据冷冻保护剂选择各个降温区最佳降温速度;22四川大学华西第二医院人类精子库23

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