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1、高效液相色谱法简单的2022/12/9第一页，本课件共有14页液相色谱是以液体为流动相的色谱分析方法。英文缩写：液相色谱是以液体为流动相的色谱分析方法。英文缩写：LC。按其固定相的不同，又可分为液固色谱（按其固定相的不同，又可分为液固色谱（LSC）和液液）和液液色谱（色谱（LLC）液相色谱简介液相色谱简介2022/12/9第二页，本课件共有14页 气相色谱气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、
2、热稳定性差的物质。差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。现在，现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年）发明的，但其初期发年）发明的，但其初期发展较慢，在液相色谱普及之前，展较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法纸色谱法、气相色谱法气相色谱法和和薄层色谱薄层色谱法法是色谱分析法的主流。到了是色谱分析法的主流。到了20世纪世纪60年代后期，将已经发展年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使得比较成熟的气相色谱的
3、理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术填料制备技术、检测技术检测技术和和高压输液泵性能高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，年商品化。从此，这种这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压），也称高压液相色
4、谱法或高速液相色谱法。液相色谱法或高速液相色谱法。液相色谱的发展液相色谱的发展2022/12/9第三页，本课件共有14页液相色谱的分类液相色谱的分类 广义地讲，固定相为平面状的广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法纸色谱法和和薄层色谱法薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液也是以液体为流动相，也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为用固定相为柱型柱型的柱液相色谱法。的柱液相色谱法。通常将液相色谱法按分离机理分成通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色吸附色谱法谱法、分配色谱法分配色谱法、离子色谱法离子色谱法和和凝胶色谱法凝胶色谱法四大类。四
5、大类。2022/12/9第四页，本课件共有14页类类 型型主要分离机理主要分离机理主要分析对象或应用领域主要分析对象或应用领域吸附色谱吸附色谱吸附能，氢键吸附能，氢键异构体分离、族分离，制备异构体分离、族分离，制备分配色谱分配色谱疏水分配作用疏水分配作用各种有机化合物的分离、分析与制备各种有机化合物的分离、分析与制备凝胶色谱凝胶色谱溶质分子大小溶质分子大小高分子分离，分子量及其分布的测定高分子分离，分子量及其分布的测定离子交换色谱离子交换色谱库仑力库仑力无机离子、有机离子分析无机离子、有机离子分析离子排斥色谱离子排斥色谱Donnan膜平衡膜平衡有机酸、氨基酸、醇、醛分析有机酸、氨基酸、醇、醛分
6、析离子对色谱离子对色谱疏水分配作用疏水分配作用离子性物质分析离子性物质分析疏水作用色谱疏水作用色谱疏水分配作用疏水分配作用蛋白质分离与纯化蛋白质分离与纯化手性色谱手性色谱立体效应立体效应手性异构体分离，药物纯化手性异构体分离，药物纯化亲和色谱亲和色谱生化特异亲和力生化特异亲和力蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析表表51 液相色谱分类液相色谱分类返回2022/12/9第五页，本课件共有14页液相色谱仪（液相色谱仪（1）2022/12/9第六页，本课件共有14页液相色谱仪（液相色谱仪（2）2022/12/9第七页，本课件共有14页液相色谱仪（液相色谱仪（3）202
7、2/12/9第八页，本课件共有14页液相色谱仪（液相色谱仪（4）2022/12/9第九页，本课件共有14页一、一、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2022/12/9第十页，本课件共有14页二、流程及主要部件二、流程及主要部件1.1.流程流程2022/12/9第十一页，本课件共有14页2.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：1535106 Pa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小
8、小的的固固定定相相（10m），液液体体的的流流动动相相高高速速通通过过时时，将将产产生生很很高高的的压压力力，因因此此高高压压、高高速速是是高高效效液液相色谱的特点之一。相色谱的特点之一。应具有应具有压力平稳压力平稳、脉冲小脉冲小、流量稳定流量稳定可调、可调、耐腐蚀耐腐蚀等特性等特性2022/12/9第十二页，本课件共有14页选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用）尽量使用高纯度试剂作流动相高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免）避免流动相与固定相流动相与固定相发生作用
9、而使柱效下降或损坏柱子。发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在，防止产生沉淀并在柱中沉积。柱中沉积。（4）流动相同时还应）流动相同时还应满足检测器的要求满足检测器的要求。当使用紫外检测器。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。时，流动相不应有紫外吸收。返回2022/12/9第十三页，本课件共有14页应用领域应用领域分析对象举例分析对象举例环境环境常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害常见无机阴阳离子、多
10、环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分。重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分。农业农业土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有机成分。机成分。化工化工无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料化妆品、染料。食品食品无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃。烃。生物生物氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然高分子化合物。高分子化合物。医药医药人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物化学成分。化学成分。返回液相色谱的应用液相色谱的应用2022/12/9第十四页，本课件共有14页