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1、徒手切片的制作第1页，本讲稿共10页w徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。w优点：简单、方便；不需要复杂设备；不经化学药物处理，基本上保留了植物活体的状态。第2页，本讲稿共10页w用光学显微镜观察的样品必须是透明的薄片，因此待观察的植物材料只有被切成很薄的切片后，才能在显微镜下观察。显微镜的制片分永久制片和临时制片，永久制片的制作方法和步骤比较复杂，有兴趣者可查阅有关植物制片技术的书籍，在植物学实验教学过程中，指导教师已预先准备了所需用的永久制片。在教学过程中，要求同学做的主要是临时制片
2、。第3页，本讲稿共10页w临时制片种类很多，包括涂片、压片等等第4页，本讲稿共10页w作徒手切片不需要复杂的设备，只需要一把锋利的剃刀或双面刀片就可以进行，方法简单，而且易于保持细胞的生活状态。徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察。用剃刀切片，材料不能太大，一般以表面不超过3-5mm为宜。切片最要紧的是平而薄，无需很完整，比如茎的横切面，无需切片整圆形，只需一角就够了。所有切片前的准备工作，如截取材料、削平切面，都应使用解剖刀或用过的刀片，不可用剃刀，以保持剃刀的锋利。第5页，本讲稿共10页操作过程为了成功切片，应掌握正确的用刀方法。一般用左手的大拇指、食指和中指
3、3个手指拿住材料，使材料略突出在指尖之上，避免切片时割伤手指；用右手平稳地拿住刀片，把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间，轻轻地压住它，以均匀的动作，从刀片刀口下方起，斜着向后拉切。切时用臂力而不是腕力，且不必太用力，否则就不易切薄。在切的过程中，决不能以刀片直接挤压材料，或以刀片来回拉割材料，并且要始终保持材料与刀片在水平状态，否则会由于切面偏斜而影响观察。第6页，本讲稿共10页w切下的切片应该薄而透明，形状则不要求非常完整，可以用刀不同的部位一次作几个切片，然后用蘸水的毛笔取下切片，置于盛水的培养皿中。第7页，本讲稿共10页w有些较柔嫩的器官，例如幼叶，难以直接拿住进行切片，因而需借助一些
4、维持物，一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物，把要切的材料夹于其中，进行切片，以利于把握操作。第8页，本讲稿共10页w将切下的薄片放在载玻片上时，要先在玻片中央加一滴水，把材料放到水滴中，然后用镊子夹住盖玻片，将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴，然后用镊子顶住盖片的另一侧，慢慢放下，使盖玻片与载玻片之间充满水，如有气泡，要掀起盖片，重新放置。第9页，本讲稿共10页w徒手制作的切片可以直接在光镜下观察，也可以经过简易的组织化学染色，以使结构看得更清楚，同时可观察到细胞各部分的化学成分。w常用的染料有：0.1亚甲基蓝、0.51中性红或1番红水溶液等。w染色的方法是将切片放在载玻片上后，用吸水纸吸去多余的水分，滴上一滴染料，经过12min后，用水冲洗一下，盖上盖玻片，在显微镜下观察。第10页，本讲稿共10页