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1、提高常规切片质量的几个关键第1页，本讲稿共23页常规切片技术在病理技术中是一项既普通常规切片技术在病理技术中是一项既普通又非常重要的技术，制片质量的好坏，直接关又非常重要的技术，制片质量的好坏，直接关系到临床病理的正确诊断，高质量的切片可以系到临床病理的正确诊断，高质量的切片可以给病理诊断带来极大的方便，否则，病理诊断给病理诊断带来极大的方便，否则，病理诊断困难，甚至给病人造成极大的痛苦，因此，常困难，甚至给病人造成极大的痛苦，因此，常规制片的质量在病理诊断中显得尤为重要。规制片的质量在病理诊断中显得尤为重要。高质量的制片技术关键在于组织的固定、高质量的制片技术关键在于组织的固定、脱水、浸蜡与
2、包埋等步骤，但是对于切片刀的脱水、浸蜡与包埋等步骤，但是对于切片刀的研磨也不能忽视。研磨也不能忽视。第2页，本讲稿共23页一、组织固定：组织固定：组织固定是常规制片致关重要的一环，作组织固定是常规制片致关重要的一环，作好组织固定将是高质量切片的开端，往往由于好组织固定将是高质量切片的开端，往往由于组织固定不当，而影响制片的整个过程。首先，组织固定不当，而影响制片的整个过程。首先，我们必须了解固定的目的、固定剂的种类及其我们必须了解固定的目的、固定剂的种类及其性质、优缺点。性质、优缺点。第3页，本讲稿共23页1.固定的目的：固定的目的：（1）防止组织溶解及腐败。防止组织溶解及腐败。（2）使细胞内
3、的蛋白质、脂肪、糖、酶等各使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分沉淀下来，保持原有的组织结构种成分沉淀下来，保持原有的组织结构与生活时相仿。与生活时相仿。（3）沉淀及凝固使细胞内成份产生不同的折沉淀及凝固使细胞内成份产生不同的折射率，造成光学上差异，使得在生活情射率，造成光学上差异，使得在生活情况下原来看不清楚的结构变得清晰起来，况下原来看不清楚的结构变得清晰起来，并使得细胞各部分容易染色。并使得细胞各部分容易染色。（4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度使组织不易变形，有利于固加
4、组织硬度使组织不易变形，有利于固加组织硬度使组织不易变形，有利于固加组织硬度使组织不易变形，有利于固定以后的处理。定以后的处理。定以后的处理。定以后的处理。因此固定是制片过程中因此固定是制片过程中因此固定是制片过程中因此固定是制片过程中重要一环节，也是高质量切片的基础。重要一环节，也是高质量切片的基础。重要一环节，也是高质量切片的基础。重要一环节，也是高质量切片的基础。第4页，本讲稿共23页2.固定剂具备的性质：固定剂具备的性质：（1 1）迅速渗入组织杀死原生质，在杀死的短期内，迅速渗入组织杀死原生质，在杀死的短期内，迅速渗入组织杀死原生质，在杀死的短期内，迅速渗入组织杀死原生质，在杀死的短期
5、内，细胞形态不至所变化，使组织可以久存。细胞形态不至所变化，使组织可以久存。细胞形态不至所变化，使组织可以久存。细胞形态不至所变化，使组织可以久存。（2 2）必须具有相当的渗透力，对组织各部分的渗必须具有相当的渗透力，对组织各部分的渗必须具有相当的渗透力，对组织各部分的渗必须具有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定，使细胞透力相等，可使组织内外完全固定，使细胞透力相等，可使组织内外完全固定，使细胞透力相等，可使组织内外完全固定，使细胞不至于因固定引起人为的改变。不至于因固定引起人为的改变。不至于因固定引起人为的改变。不至于因固定引起人为的改变。（3 3）固定后增加细胞对
6、各种穿透力的抵抗力，不固定后增加细胞对各种穿透力的抵抗力，不固定后增加细胞对各种穿透力的抵抗力，不固定后增加细胞对各种穿透力的抵抗力，不 至于因以后的处理使固定的组织变形。至于因以后的处理使固定的组织变形。至于因以后的处理使固定的组织变形。至于因以后的处理使固定的组织变形。（4 4）尽可能避免组织膨胀或收缩。尽可能避免组织膨胀或收缩。尽可能避免组织膨胀或收缩。尽可能避免组织膨胀或收缩。（5 5）使组织内的成份（蛋白质）凝固或沉淀，组使组织内的成份（蛋白质）凝固或沉淀，组使组织内的成份（蛋白质）凝固或沉淀，组使组织内的成份（蛋白质）凝固或沉淀，组 织变硬适于切片。织变硬适于切片。织变硬适于切片。
7、织变硬适于切片。（6 6）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，增增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，增增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，增增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，增 加媒染作用和染色能力加媒染作用和染色能力加媒染作用和染色能力加媒染作用和染色能力第5页，本讲稿共23页3.常用固定剂及其优缺点：常用固定剂及其优缺点：福尔马林福尔马林（1）固定组织渗透力强，组织收缩少，固固定组织渗透力强，组织收缩少，固固定组织渗透力强，组织收缩少，固固定组织渗透力强，组织收缩少，固定厚度适当的组织较为均匀。定厚度适当的组织较为均匀。定厚度适当的组织较为均匀。定厚度适当的组织较为均匀。（2）非沉淀性固
8、定剂，不能使白蛋白及核非沉淀性固定剂，不能使白蛋白及核蛋白沉淀，可与蛋白质化合，脂肪、蛋白沉淀，可与蛋白质化合，脂肪、神经及髓鞘的固定效果很好，也可固神经及髓鞘的固定效果很好，也可固定高尔基体、线粒体。定高尔基体、线粒体。（3）经固定的组织、核的染色较好，胞浆经固定的组织、核的染色较好，胞浆经固定的组织、核的染色较好，胞浆经固定的组织、核的染色较好，胞浆染色稍差，一般染料都可以染，以碱染色稍差，一般染料都可以染，以碱染色稍差，一般染料都可以染，以碱染色稍差，一般染料都可以染，以碱性染料更好。性染料更好。性染料更好。性染料更好。第6页，本讲稿共23页乙醇：乙醇：（1 1）可沉淀白蛋白、核蛋白、球
9、蛋白、肝糖。可沉淀白蛋白、核蛋白、球蛋白、肝糖。可沉淀白蛋白、核蛋白、球蛋白、肝糖。可沉淀白蛋白、核蛋白、球蛋白、肝糖。（2）穿透组织速度很好，使组织硬化显著，穿透组织速度很好，使组织硬化显著，在高浓度酒精中留置过久，组织发脆，在高浓度酒精中留置过久，组织发脆，组织收缩厉害，约可缩小组织收缩厉害，约可缩小20%20%体积，仅体积，仅可在可在70%酒精内久存。酒精内久存。50%50%以上浓度可以上浓度可溶解脂肪及类脂体，能溶解血色素及损溶解脂肪及类脂体，能溶解血色素及损害多数其它色素。害多数其它色素。第7页，本讲稿共23页醋酸：醋酸：（1 1）穿透组织速度很快，不能沉淀细胞质）穿透组织速度很快，
10、不能沉淀细胞质）穿透组织速度很快，不能沉淀细胞质）穿透组织速度很快，不能沉淀细胞质的蛋白质，所以组织不会硬化。的蛋白质，所以组织不会硬化。的蛋白质，所以组织不会硬化。的蛋白质，所以组织不会硬化。（2）对染色体的保存非常好。）对染色体的保存非常好。（3）醋酸能使组织膨胀，特别对于胶原纤维）醋酸能使组织膨胀，特别对于胶原纤维及原浆中的纤维蛋白，故单独使用只能及原浆中的纤维蛋白，故单独使用只能短时固定，一般与其它固定剂混合使用。短时固定，一般与其它固定剂混合使用。Zenker、BouinBouin、Carnoy等混合等混合固定液中均含冰醋酸，固定液中均含冰醋酸，Carnoy可达可达10%。第8页，本
11、讲稿共23页4、固定液的用量及固定时间：固定液的用量及固定时间：固定液的用量固定液的用量固定剂的量要充足，至少为组织体积固定剂的量要充足，至少为组织体积的的4 4倍以上，一般为倍以上，一般为倍以上，一般为倍以上，一般为10-15倍。容器勿倍。容器勿过小，避免组织内水分在固定时渗出，过小，避免组织内水分在固定时渗出，影响固定剂的浓度，勿使组织贴于瓶影响固定剂的浓度，勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。第9页，本讲稿共23页固定时间固定时间视标本的种类、性质、大小、固定剂视标本的种类、性质、大小、固定剂视标本的种类、性质、大小、固定剂视标本的种类、性质、大
12、小、固定剂的种类、性质、渗透力的强弱而定，的种类、性质、渗透力的强弱而定，的种类、性质、渗透力的强弱而定，的种类、性质、渗透力的强弱而定，可以可以可以可以1-21-2小时至十几小时或更长，一小时至十几小时或更长，一小时至十几小时或更长，一小时至十几小时或更长，一 些小组织仅须几十分钟。如些小组织仅须几十分钟。如些小组织仅须几十分钟。如些小组织仅须几十分钟。如Carnoy对组织硬化作用较强，不宜时间过长，对组织硬化作用较强，不宜时间过长，而而Bouin固定时间可较长，一般为固定时间可较长，一般为24小时左右。小时左右。第10页，本讲稿共23页二、二、组织脱水：组织脱水：水在组织内能使组织分解，水
13、份与石蜡等水在组织内能使组织分解，水份与石蜡等包埋剂不能相溶，因此，在制片过程中，脱水包埋剂不能相溶，因此，在制片过程中，脱水是否彻底直接影响着组织的透明与浸蜡。组织是否彻底直接影响着组织的透明与浸蜡。组织内的水份必须通过脱水剂将内的水份必须通过脱水剂将其完全脱出，才有利于组织的透明与浸蜡，也其完全脱出，才有利于组织的透明与浸蜡，也有利于组织的永久保存。否则，即便是延长透有利于组织的永久保存。否则，即便是延长透明与浸蜡时间，包埋后也难以切出高质量的切明与浸蜡时间，包埋后也难以切出高质量的切片。片。第11页，本讲稿共23页1、常用脱水剂及使用方法：常用脱水剂及使用方法：乙醇：乙醇：（1）与水可任
14、何比例混合，能硬化组织、价廉。与水可任何比例混合，能硬化组织、价廉。（2 2）非石蜡溶剂，必须二甲苯透明后才能浸蜡。非石蜡溶剂，必须二甲苯透明后才能浸蜡。（3 3）95%以上酒精对组织有强烈的收缩及脆化。以上酒精对组织有强烈的收缩及脆化。以上酒精对组织有强烈的收缩及脆化。以上酒精对组织有强烈的收缩及脆化。一般组织从一般组织从一般组织从一般组织从70%70%酒精开始脱水，经酒精开始脱水，经80%80%、95%、无水逐步进行，柔软组织如胚胎、无水逐步进行，柔软组织如胚胎、无水逐步进行，柔软组织如胚胎、无水逐步进行，柔软组织如胚胎、眼球等组织须从眼球等组织须从眼球等组织须从眼球等组织须从50%50%
15、或或30%开始，否则组开始，否则组织收缩较大。织收缩较大。第12页，本讲稿共23页正丁醇：正丁醇：（1）脱水能力弱，但组织收缩小，可与脱水能力弱，但组织收缩小，可与水及酒精混合。水及酒精混合。（2 2）能溶解石蜡，可不经透明直接浸蜡。能溶解石蜡，可不经透明直接浸蜡。脱水程序：经过各级酒精换入纯正脱水程序：经过各级酒精换入纯正丁醇中，更换一次新液，最后投入丁醇中，更换一次新液，最后投入石蜡中。石蜡中。第13页，本讲稿共23页三、透明与浸蜡：、透明与浸蜡：透明透明：当组织完成脱水后，即可进入透明，透明：当组织完成脱水后，即可进入透明，透明剂是蜡浸入组织的媒剂或桥梁。常用透明剂为二甲苯，剂是蜡浸入组
16、织的媒剂或桥梁。常用透明剂为二甲苯，其透明力强，作用快，但易使组织收缩变硬变脆，因其透明力强，作用快，但易使组织收缩变硬变脆，因此，组织不能在其内久留。此，组织不能在其内久留。浸蜡浸蜡：将石蜡作为支持剂透入组织内部，使之变硬，：将石蜡作为支持剂透入组织内部，使之变硬，：将石蜡作为支持剂透入组织内部，使之变硬，：将石蜡作为支持剂透入组织内部，使之变硬，经包埋后以利于切片。石蜡通过有机溶剂而渗透于组织经包埋后以利于切片。石蜡通过有机溶剂而渗透于组织经包埋后以利于切片。石蜡通过有机溶剂而渗透于组织经包埋后以利于切片。石蜡通过有机溶剂而渗透于组织细胞及其间质，应用石蜡与组织相应的硬度，石蜡度数细胞及其
17、间质，应用石蜡与组织相应的硬度，石蜡度数细胞及其间质，应用石蜡与组织相应的硬度，石蜡度数细胞及其间质，应用石蜡与组织相应的硬度，石蜡度数越低则越软，越硬则度数越高。夏季气温较高，选择硬越低则越软，越硬则度数越高。夏季气温较高，选择硬越低则越软，越硬则度数越高。夏季气温较高，选择硬越低则越软，越硬则度数越高。夏季气温较高，选择硬度好的石蜡，使用其与组织的硬度相匹配，一般常用度好的石蜡，使用其与组织的硬度相匹配，一般常用度好的石蜡，使用其与组织的硬度相匹配，一般常用度好的石蜡，使用其与组织的硬度相匹配，一般常用60-62的石蜡进行包埋。的石蜡进行包埋。第14页，本讲稿共23页四、四、切片过程中常见
18、问题及其解切片过程中常见问题及其解 决的办法：决的办法：切片是常规制片技术中技术最强的环节，这切片是常规制片技术中技术最强的环节，这切片是常规制片技术中技术最强的环节，这切片是常规制片技术中技术最强的环节，这项技术的经验，也是靠平时工作中日积月累，不项技术的经验，也是靠平时工作中日积月累，不项技术的经验，也是靠平时工作中日积月累，不项技术的经验，也是靠平时工作中日积月累，不断摸索的提高的。高质量的切片既与组织固定、断摸索的提高的。高质量的切片既与组织固定、断摸索的提高的。高质量的切片既与组织固定、断摸索的提高的。高质量的切片既与组织固定、脱水、浸蜡包埋密切相关，又与切片的锋利与否脱水、浸蜡包埋
19、密切相关，又与切片的锋利与否脱水、浸蜡包埋密切相关，又与切片的锋利与否脱水、浸蜡包埋密切相关，又与切片的锋利与否分不开，作好以上各步操作过程，解决好切片中分不开，作好以上各步操作过程，解决好切片中分不开，作好以上各步操作过程，解决好切片中分不开，作好以上各步操作过程，解决好切片中遇到的问题，即可作出高质量的切片。遇到的问题，即可作出高质量的切片。遇到的问题，即可作出高质量的切片。遇到的问题，即可作出高质量的切片。第15页，本讲稿共23页1、切片与组织块切面的夹角应在切片与组织块切面的夹角应在切片与组织块切面的夹角应在切片与组织块切面的夹角应在3度度8度之间，平时常用度之间，平时常用度之间，平时
20、常用度之间，平时常用55角，不可过大或角，不可过大或过小。过小。2、切片时蜡块有一定的硬度才能使切片切片时蜡块有一定的硬度才能使切片顺利顺利进行，因此视气温高低适当处进行，因此视气温高低适当处理蜡块，冷冻或给予适当温度。理蜡块，冷冻或给予适当温度。3、常见问题及其解决办法：常见问题及其解决办法：常见问题及其解决办法：常见问题及其解决办法：第16页，本讲稿共23页常见问题及其解决办法常见问题及其解决办法：常见问题常见问题 原因原因 解决办法解决办法（1）组织切）组织切面呈灰白色面呈灰白色 、切片呈碎切片呈碎屑状或空洞屑状或空洞固定不足固定不足脱水不彻底脱水不彻底透明不好透明不好浸蜡不够浸蜡不够凡
21、送检标本必须充分固定凡送检标本必须充分固定注意脱水时间注意脱水时间彻底脱水后再入二甲苯透明彻底脱水后再入二甲苯透明适当延长透明时间适当延长透明时间适当延长浸蜡时间适当延长浸蜡时间（2）切片呈）切片呈碎屑或粉沫状碎屑或粉沫状二甲苯或浸蜡时二甲苯或浸蜡时间过长间过长浸蜡或包埋温度浸蜡或包埋温度过高过高适当给予冷处理、尽量薄切适当给予冷处理、尽量薄切注意浸蜡及包埋温度注意浸蜡及包埋温度第17页，本讲稿共23页（3）切片呈）切片呈蜂窝状蜂窝状粗切时推进器用粗切时推进器用力过猛力过猛切的过厚切的过厚粗切时尽量薄削粗切时尽量薄削切去组织块表面过切部分切去组织块表面过切部分（4）切片呈）切片呈皲裂状皲裂状组
22、织透明或浸蜡组织透明或浸蜡时间过长，组织时间过长，组织变脆变脆浸蜡、包埋时蜡浸蜡、包埋时蜡温过高温过高注意透明及浸蜡时间注意透明及浸蜡时间控制好浸蜡包埋温度控制好浸蜡包埋温度第18页，本讲稿共23页（5）蜡带易）蜡带易向一侧弯曲向一侧弯曲组织最大面末切组织最大面末切全组织全组织组织块两侧宽窄组织块两侧宽窄不一不一调整持蜡器，切全组织调整持蜡器，切全组织窄的一边多留一些蜡窄的一边多留一些蜡（6）蜡片难）蜡片难以连成带或卷以连成带或卷曲曲刀不锋利刀不锋利刀与蜡块角度不刀与蜡块角度不当当切片蜡过硬、粘切片蜡过硬、粘度不够度不够鐾刀或磨刀鐾刀或磨刀调整刀的角度调整刀的角度适当加些蜂蜡或用稍低温蜡包适当
23、加些蜂蜡或用稍低温蜡包埋埋第19页，本讲稿共23页（7）切片易）切片易粘附于蜡块上粘附于蜡块上切片刀不锋利切片刀不锋利切片刀背侧有蜡切片刀背侧有蜡移动刀至锋利处，鐾刀或磨刀移动刀至锋利处，鐾刀或磨刀去除粘附于刀上的蜡去除粘附于刀上的蜡（8）蜡片易）蜡片易起皱，不易展起皱，不易展平平组织块两侧有蜡组织块两侧有蜡水温过高或过低水温过高或过低碎小组织之间有碎小组织之间有蜡蜡尽量削净左右两侧多余蜡尽量削净左右两侧多余蜡调整水温调整水温注意包埋方位，尽量组织间贴注意包埋方位，尽量组织间贴紧紧借助酒精张力使组织摊平借助酒精张力使组织摊平第20页，本讲稿共23页（9）切片薄）切片薄厚不均或呈厚不均或呈搓板状
24、搓板状刀或组织块没有刀或组织块没有夹紧夹紧切片机零部件松切片机零部件松动动切片机微调不灵切片机微调不灵敏敏旋紧持蜡器或持刀器旋紧持蜡器或持刀器请专业技术人员调整切片机请专业技术人员调整切片机平时注意切片机的保养平时注意切片机的保养（10）摊片）摊片时切片炸裂时切片炸裂水温过高水温过高组织含脂量高组织含脂量高透明二甲苯使用透明二甲苯使用过久过久浸用组织蜡使用浸用组织蜡使用过久过久组织处理不当，组织处理不当，固定不好固定不好降低水温降低水温适当延长透明时间适当延长透明时间更换二甲苯更换二甲苯更换新蜡更换新蜡重新取材，注意固定重新取材，注意固定第21页，本讲稿共23页（11）切片）切片总在一处出总在
25、一处出现纵向裂痕现纵向裂痕(12)切片压切片压缩厉害缩厉害刀刃有缺口刀刃有缺口刀刃有纤维刀刃有纤维组织内有异物组织内有异物钙化组织钙化组织组织富含纤维结组织富含纤维结缔组织缔组织切片刀不锋利切片刀不锋利切片与组织块夹切片与组织块夹角不当角不当切片蜡硬度不够切片蜡硬度不够切片过薄切片过薄避开缺口处，鐾刀或磨刀避开缺口处，鐾刀或磨刀擦净切片刀刃上的纤维擦净切片刀刃上的纤维取材、包埋时注意取材、包埋时注意适当脱钙适当脱钙适当处理组织，注脱水时间适当处理组织，注脱水时间更换刀至锋利处鐾刀或磨刀更换刀至锋利处鐾刀或磨刀调整刀的角度调整刀的角度冷冻使蜡块有一定的硬度冷冻使蜡块有一定的硬度适当厚切适当厚切第22页，本讲稿共23页 总之，提高常规切片质量须注意制片过总之，提高常规切片质量须注意制片过程中的每一个环节，特别是组织固定，可以程中的每一个环节，特别是组织固定，可以说固定是高质量制片的基础，脱水更关键，说固定是高质量制片的基础，脱水更关键，只有充分的固定组织，才不会影响整个脱水、只有充分的固定组织，才不会影响整个脱水、透明、浸蜡以及切片、甚至包括染色的全过透明、浸蜡以及切片、甚至包括染色的全过程，才能制作出合格的高质量的切片。程，才能制作出合格的高质量的切片。第23页，本讲稿共23页