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1、蛋白质沉淀本讲稿第一页，共十七页1、实验目的2、实验原理3、试剂4、实验步骤本讲稿第二页，共十七页实验目的通过实验了解蛋白质沉淀通过实验了解蛋白质沉淀的方法的方法本讲稿第三页，共十七页蛋白质的沉淀 l1、盐析 l2、有机溶剂沉淀 l3、重金属盐沉淀l4、生物碱试剂沉淀 本讲稿第四页，共十七页盐 析 l盐盐析析：蛋蛋白白质质溶溶液液中中加加入入高高浓浓度度的的中中性性盐盐（NHNH4 4）2 2SOSO4 4、NaNa2 2SO4SO4、NaClNaCl等等破破坏坏蛋蛋白白质质胶胶体体的的稳稳定定性性，使使蛋蛋白白质质从从溶溶液液中中沉沉淀淀出出来来，称称为为盐析盐析。本讲稿第五页，共十七页有机
2、溶剂沉淀 乙醇、丙酮能破坏蛋白质颗粒的水化膜。常温下能引起变性，低温下沉淀 本讲稿第六页，共十七页重金属盐沉淀PH PIPH PI本讲稿第七页，共十七页生物碱试剂沉淀 PH PIPH PI本讲稿第八页，共十七页操 作1、盐析、盐析2、有机溶剂沉淀、有机溶剂沉淀乙醇乙醇3、重金属盐沉淀、重金属盐沉淀本讲稿第九页，共十七页吸管的使用（1 1）选选择择大大小小合合适适的的，稍稍大大或或等等于于最最大大取液量；取液量；（2 2）执执管管，用用右右手手拇拇指指、中中指指（附附以以无无名名指指）拿拿住住吸吸管管上上部部，食食指指堵堵住住上上口口，刻刻度度对向自己；对向自己；（3 3）取取液液，左左手手压压
3、洗洗耳耳球球，将将吸吸管管插插入入液液面面下下约约1cm1cm处处，用用吸吸耳耳球球将将液液体体吸吸至至最最大大刻度上方刻度上方1-2cm1-2cm迅速用食指压住上口；迅速用食指压住上口；本讲稿第十页，共十七页（4 4）调调准准刻刻度度，将将移移液液管管移移出出液液面面，略略放放松松食食指指，用用食食指指控控制制液液面面，使使之之平平稳稳下下降降至至所所需需液液面面（此此时时，溶溶液液弯弯月月面面底底部部、视视线线、刻刻度度在在同同一一水水平平面面）立立即按紧即按紧（5 5）放放液液:放放松松食食指指，自自然然流流动动,垂垂直直、管管尖尖接接触触内内壁壁不不插插入入原原有有液液体体；（注注意有
4、无意有无“吹放吹放”字样）字样）（6 6）洗涤，立即清洗或根据实际情况）洗涤，立即清洗或根据实际情况而定。而定。本讲稿第十一页，共十七页取样器 1 1、装装“枪枪头头”装装在在杆杆上上，套套紧紧，保证气密性；调整取液量保证气密性；调整取液量2 2、轻按下推动按纽，到第一档、轻按下推动按纽，到第一档3 3、手手握握取取液液器器将将“枪枪头头”浸浸入入液液体中体中2-4mm2-4mm4 4、缓缓放开按扭完成吸液缓缓放开按扭完成吸液本讲稿第十二页，共十七页5 5、用滤纸擦拭外表面、用滤纸擦拭外表面6 6、放放液液，“枪枪头头”紧紧贴贴试试管管内内壁壁，按按下下按按扭扭到到最最低低档档（第第二二档档）
5、，液体全部排出；，液体全部排出；7 7、推掉、推掉“枪头枪头”，完成操作。，完成操作。本讲稿第十三页，共十七页分 段 盐 析（1 1）取取一一试试管管，加加入入3ml 3ml 5%5%蛋蛋白白质质溶溶液液及及3ml3ml饱饱和和硫硫酸酸铵铵溶溶液液，混混匀匀，此此时时溶溶液液成成为为半半饱饱和和硫硫酸酸铵铵溶溶液液。静静置置数数分分钟钟则则有有蛋蛋白白质质沉淀出现。（沉淀出现。（思考：是什么蛋白质？思考：是什么蛋白质？）（2 2）将将试试管管内内容容物物过过滤滤（或或将将上上清清液液倒倒出出），加加少少许许硫硫酸酸铵铵粉粉末末于于滤滤液液中中，使使达达饱饱和和状状态态，此此时时有有蛋蛋白白质质
6、析析出出；（思思考考：此此时时又又是是什什么么蛋白质？蛋白质？）（3 3）取上述浑浊液加等量蒸馏水，观察是否）取上述浑浊液加等量蒸馏水，观察是否复溶。复溶。本讲稿第十四页，共十七页乙醇沉淀蛋白质 试剂试管号12345%蛋 白 质 溶 液（ml）1111%乙酸（滴）1-295%乙醇（ml）2本讲稿第十五页，共十七页1 1、将第将第3 3及第及第4 4管置于管置于冰浴冰浴中，使之冷却中，使之冷却1010分钟，然后将第分钟，然后将第4 4管之冰乙醇倒入第管之冰乙醇倒入第3 3管中管中并混匀并混匀2 2、同时向第、同时向第1 1及第及第2 2管中各加入未冷却的乙醇管中各加入未冷却的乙醇2ml2ml混匀
7、。混匀。3 3、观察第、观察第1 1、2 2、3 3管中的沉淀情况（管中的沉淀情况（思考：思考：2 2号管中加入乙酸的作用是什么？号管中加入乙酸的作用是什么？）4 4、并立即向此三管中各加入蒸馏水、并立即向此三管中各加入蒸馏水10ml10ml，混匀，比较各管变化并解释之混匀，比较各管变化并解释之 本讲稿第十六页，共十七页重金属盐沉淀蛋白质 试管（滴）试管号12345%蛋 白 质 溶 液（ml）55551%乙酸溶液10101%硫酸铜溶液333%硝酸银溶液33混匀，比较各管的混浊程度，混匀，比较各管的混浊程度，并解释。并解释。在这里，加入乙酸的作用又是什么在这里，加入乙酸的作用又是什么?本讲稿第十七页，共十七页