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1、第十章 色谱分离过程本讲稿第一页，共四十二页 第一节 概 述 一、色谱法的由来一、色谱法的由来 1 119061906年由俄国植物学家年由俄国植物学家TsweetTsweet创立创立 植物色素分离植物色素分离见图示见图示 40 40年代年代 TLC TLC，纸色谱，纸色谱 50 50年代年代 GC GC出现使色谱具备分离和在线分析功能出现使色谱具备分离和在线分析功能 60 60年代末年代末 HPLC HPLC出现，使色谱分析范围进一步扩大出现，使色谱分析范围进一步扩大 2 2现在：一种重要的分离、分析技术现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析分离混合物各组分并加以分析本讲稿
2、第二页，共四十二页图示固定相固定相CaCO3颗粒颗粒流动相流动相石油醚石油醚 色带色带本讲稿第三页，共四十二页二、色谱法定义、实质和目的二、色谱法定义、实质和目的n定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析 方法方法n实质：分离实质：分离n目的：定性分析或定量分析目的：定性分析或定量分析 其中的一相固定不动，称为其中的一相固定不动，称为固定相固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为或液体），称为流动相流动相。固定相固定相除了固体，还可以是液体除了固体，还可以是液体 流动相流动
3、相液体或气体液体或气体 色谱柱色谱柱各种材质和尺寸各种材质和尺寸 被分离组分被分离组分不再仅局限于有色物质不再仅局限于有色物质本讲稿第四页，共四十二页 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的之间产生的作用力的大小、强弱不同作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同
4、，从而按一定次序由固定相中流出。留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。n 与适当的与适当的柱后检测方法柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离结合，实现混合物中各组分的分离与检测。与检测。n 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础本讲稿第五页，共四十二页三三.色谱法的特点色谱法的特点（1 1）分离效率高）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。（2 2）灵敏度高灵敏度高 可以检测出可以检测出g.gg.g-1-1(10(10-6-6)级甚至级甚至ng.gng.g-1-1(10(10-9-9)
5、级的物质量。级的物质量。（3 3）分析速度快分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。（4 4）应用范围广应用范围广 气相色谱：沸点低于气相色谱：沸点低于400400的各种有机或无机试样的分析。的各种有机或无机试样的分析。液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。不足之处不足之处：被分离组分的定性较为困难。被分离组分的定性较为困难。本讲稿第六页，共四十二页第二节 色谱分离过程的基本原理一、分离原理一、分离原理 色谱分离过程的实质是溶质在不互溶的固定相和流动相色谱分离过程的实质
6、是溶质在不互溶的固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在亮相间之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在亮相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。分配行为的差别而使不同的溶质分离。n以吸附色谱为例以吸附色谱为例 吸吸附附 解解吸吸再再吸吸附附 再再解解吸吸 反反复复多多次次洗洗脱脱被被测组分分配系数不同测组分分配系数不同 差速迁移差速迁移 分离分离本讲稿第七页，共四十二页n分配系数的微小差异分配系数的微小差异吸附能力的微小差异吸附能力的微小差异n微小差异积累微小差异积累较大差异较大差异吸附能力弱的组分先流出；吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出吸附能力强的组分后
7、流出本讲稿第八页，共四十二页二、固定相（色谱柱填料）二、固定相（色谱柱填料）1.1.固体固定相固体固定相a a 常用的固体吸附剂：活性炭，硅胶，氧化铝，分子筛等常用的固体吸附剂：活性炭，硅胶，氧化铝，分子筛等 作用机理：吸附占主导地位作用机理：吸附占主导地位b b 新型的固体固定相：高分子多孔微球新型的固体固定相：高分子多孔微球 低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位c c 化学键合固定相：分配占主导地位化学键合固定相：分配占主导地位 主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧化主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧化碳、二氧化
8、碳、氮氧化物、硫化氢等。碳、二氧化碳、氮氧化物、硫化氢等。本讲稿第九页，共四十二页2.2.液体固定相液体固定相 组成结构：组成结构：担体担体+固定液固定液，前者是具有较大比表面、化，前者是具有较大比表面、化学呈惰性的一类物质，后者在色谱使用温度下呈液体膜学呈惰性的一类物质，后者在色谱使用温度下呈液体膜状态，化学性质稳定，不流失或挥发，主要用于分析较状态，化学性质稳定，不流失或挥发，主要用于分析较高沸点的有机物。高沸点的有机物。对固定液的基本要求：对固定液的基本要求：a a 蒸汽压要低，使用温度下为液体蒸汽压要低，使用温度下为液体 b b 热稳定要好，不挥发热稳定要好，不挥发 c c 惰性，与分
9、析物质不产生化学反应。惰性，与分析物质不产生化学反应。本讲稿第十页，共四十二页固定液的选择原则：固定液的选择原则：“相似相溶相似相溶”，选择与试样性质相近的固定相。，选择与试样性质相近的固定相。A A 非极性样品选用非极性固定液（主要作用力为色散力）非极性样品选用非极性固定液（主要作用力为色散力）流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性组分先流出流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性组分先流出B B 中等极性样品选用中等极性固定液（主要作用力为静电力）中等极性样品选用中等极性固定液（主要作用力为静电力）流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性小的组分先流出流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性小的
10、组分先流出C C 强极性样品选用强极性固定液（主要作用力为静电力）强极性样品选用强极性固定液（主要作用力为静电力）流出顺序：极性低的先流出流出顺序：极性低的先流出本讲稿第十一页，共四十二页三、色谱柱及柱技术三、色谱柱及柱技术 色谱柱的性能依赖于三个因素：色谱柱填充技术、柱设计色谱柱的性能依赖于三个因素：色谱柱填充技术、柱设计和生产和生产1.1.色谱柱装填方法色谱柱装填方法 高压匀浆填充高压匀浆填充 干法填充干法填充 径向压缩法径向压缩法 轴向压缩法轴向压缩法 环形压缩技术环形压缩技术2.2.色谱柱的设计色谱柱的设计 多采用大直径、短柱长的多采用大直径、短柱长的“饼式饼式”柱柱本讲稿第十二页，共
11、四十二页第三节第三节 色谱的分类色谱的分类1.1.按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气相色谱气相色谱2.2.按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱薄层色谱本讲稿第十三页，共四十二页3.3.按色谱过程的机理分类：按色谱过程的机理分类：吸附色谱吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂上：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂上吸附力的不同吸附力的不同，因而吸附平衡常数不同而将组分分离因而吸附平衡常数不同而将组分分离分配色谱分配色谱：用液体作固定相，利用组分在：用液体作固定相，利用组分在液相中的溶解度液相
12、中的溶解度不同，因而分不同，因而分配系数不同进行分离配系数不同进行分离离子交换色谱离子交换色谱：利用离子交换原理：利用离子交换原理排阻色谱排阻色谱：利用：利用分子大小分子大小不同不同电色谱电色谱：利用带电物质：利用带电物质在电场作用下移动速度在电场作用下移动速度不同进行分离不同进行分离本讲稿第十四页，共四十二页4.4.可按仪器分可按仪器分:a a 气相色谱气相色谱(Gas chromatography)(Gas chromatography)填充柱气相色谱（填充柱气相色谱（Packed column gas chromatographyPacked column gas chromatogra
13、phy）毛细管气相色谱毛细管气相色谱(Capillary column gas chromatography)(Capillary column gas chromatography)裂解气相色谱裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography)(Pyrolysis gas chromatography)顶空气相色谱顶空气相色谱(Headspace gas chromatography)(Headspace gas chromatography)气相质谱联用技术（气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometryGas chroma
14、tography-Mass spectrometry）b b 液相色谱仪液相色谱仪(Liquid chromatography)(Liquid chromatography)高效液相色谱高效液相色谱(High performance liquid chromatography)(High performance liquid chromatography)超临界流体色谱超临界流体色谱(Supercritical fluid chromatography)(Supercritical fluid chromatography)高效毛细管电泳高效毛细管电泳(High performance cap
15、illary electrophoresis)(High performance capillary electrophoresis)毛细管电色谱毛细管电色谱(Capillary electrochromatography)(Capillary electrochromatography)液相质谱联用技术（液相质谱联用技术（Liquid chromatography-Mass spectrometryLiquid chromatography-Mass spectrometryc c 平面色谱法（平面色谱法（Planar chromatographyPlanar chromatography）
16、薄层色谱薄层色谱(Thin layer chromatography)(Thin layer chromatography)薄层电泳色谱薄层电泳色谱(Thin layer electrophoresis)(Thin layer electrophoresis)纸色谱纸色谱(Paper chromatography)(Paper chromatography)本讲稿第十五页，共四十二页(1)(1)色谱过程热力学色谱过程热力学高选择性色谱分离的理论基础；高选择性色谱分离的理论基础；色谱过程动力学色谱过程动力学高效色谱分离的理论基础；高效色谱分离的理论基础；色谱分离条件的选择色谱分离条件的选择多元混
17、合物分离最优化理论。多元混合物分离最优化理论。色谱理论研究色谱过程中分子运动的规律，探讨微观色谱理论研究色谱过程中分子运动的规律，探讨微观分子运动与色谱分离的内在联系。它包括三个基本理论分子运动与色谱分离的内在联系。它包括三个基本理论问题：问题：第四节第四节 色谱分离过程基础理论色谱分离过程基础理论本讲稿第十六页，共四十二页一、色谱过程色谱柱色谱柱 检测器检测器 色谱图色谱图 组组分分在在色色谱谱柱柱内内运运动动溶质浓度分布溶质浓度分布 柱内：谱带柱内：谱带 柱后：色谱峰柱后：色谱峰色谱仪色谱仪本讲稿第十七页，共四十二页 差差速速迁迁移移指指不不同同组组分分通通过过色色谱谱柱柱时时的的移移动动
18、速速度度不不同同。样样品品注注入入色色谱谱柱柱时时，由由于于流流动动相相以以一一定定速速度度通通过过固固定定相相，使使样样品品中中各各组组分分在在两两相相之之间进行连续多次的分配。间进行连续多次的分配。由由于于组组分分与与固固定定相相和和流流动动相相作作用用力力的的差差别别，在在两两相相中中的的分分配配系系数数不同。不同。在固定相溶解或吸附大的，即分配系数大的组分，迁移速度在固定相溶解或吸附大的，即分配系数大的组分，迁移速度？慢慢 在固定相溶解或吸附小，即分配系数小的组分，迁移速度在固定相溶解或吸附小，即分配系数小的组分，迁移速度？快快本讲稿第十八页，共四十二页结结果果是是样样品品各各组组分分
19、同同时时进进入入色色谱谱柱柱，而而以以不不同同的的速速度度在在色色谱谱柱柱内内迁迁移移，导导致致各各组组分分分分离离。组组分分通通过过色色谱谱柱柱的的速速度度，取取决决于于各各组组分分在在色色谱谱体体系系中中的的平平衡衡分分布布。因因此此，影影响响平平衡衡分分布布的的因因素素，即即流流动动相相和和固固定定相相的的性性质质、色色谱谱柱柱柱柱温温等等影影响组分的迁移速度。响组分的迁移速度。本讲稿第十九页，共四十二页二、保留值、分离度和柱效率二、保留值、分离度和柱效率1.1.保留值保留值 通常以保留时间通常以保留时间t tR R及容量因及容量因子子k k表示表示保留时间保留时间t tR R：从进样开
20、始到某组：从进样开始到某组分色谱峰顶（浓度极大点）的分色谱峰顶（浓度极大点）的时间，即组分在色谱柱中的时间，即组分在色谱柱中的停停留时间留时间或组分流经色谱柱所需或组分流经色谱柱所需要的时间。要的时间。本讲稿第二十页，共四十二页容量因子容量因子(新定义为保留因子，新定义为保留因子，Retention factor)Retention factor)在在色色谱谱法法中中，保保留留值值是是表表示示组组分分在在色色谱谱柱柱内内滞滞留留状状况况的的一一个个指指标标。而而容容量量因因子子（k k）是是一一个个具具有有普普遍遍意意义义的的色色谱谱保保留留值值，它它指指在在一一定定柱柱温温下下,溶质在两相间
21、达到分配平衡时溶质在两相间达到分配平衡时,分配在固定相和流动相中的总量之比分配在固定相和流动相中的总量之比。k k=w=ws s/w/wm m=K=KV Vs s/V/Vm m=K/=K/可可见见，k k与与组组分分的的分分配配系系数数K K和和相相比比 有有关关，但但与与流流动动相相流流速速无无关关。k k值大小可直接从色谱图上测量。有关计算式如下：值大小可直接从色谱图上测量。有关计算式如下：tr=t0(1k)Vr=F tr 基本保留方程基本保留方程分离因子分离因子恒流速恒流速t t0 0 的测定的测定本讲稿第二十一页，共四十二页2.2.分离度分离度分离条件的选择主要是提高分离条件的选择主要
22、是提高“难分离物质对难分离物质对”的分离度的分离度峰宽分离度峰宽分离度R R 国家标准分离度国家标准分离度当两峰高相差不大当两峰高相差不大,且峰型接近时且峰型接近时可以认为可以认为W W1 1=W=W2 2=W=W当当R=1R=1时，分离程度达到时，分离程度达到94%94%当当R=1.5R=1.5时，分离程度达到时，分离程度达到100%100%本讲稿第二十二页，共四十二页3.3.柱效应柱效应 色谱柱的理论塔板数、塔板高度色谱柱的理论塔板数、塔板高度 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系n理论塔板数的计算方法：理论塔
23、板数的计算方法：nN-N-理论塔板数理论塔板数 tR-tR-保留时间保留时间nW W1/21/2-半峰宽半峰宽 Wb-Wb-峰底宽度峰底宽度n理论塔板高度：理论塔板高度：L-L-柱长柱长本讲稿第二十三页，共四十二页三、平衡色谱理论三、平衡色谱理论 WilsonWilson等人提出的平衡色谱理论的三个基本假设：等人提出的平衡色谱理论的三个基本假设：l.l.溶溶质质在在流流动动相相和和固固定定相相之之间间的的分分配配平平衡衡在在整整个个色色谱谱过过程中都能程中都能瞬间实现瞬间实现；2.2.传质阻力，传质阻力，纵向扩散对平衡的影响可以忽略纵向扩散对平衡的影响可以忽略；3.3.溶溶质质在在色色谱谱柱柱
24、迁迁移移过过程程中中，在在一一定定时时间间内内，色色谱谱柱柱每每一一小段溶质量的小段溶质量的变化符合物料平衡原理变化符合物料平衡原理。本讲稿第二十四页，共四十二页流动相固定相平衡色谱理论物料平衡示意图平衡色谱理论物料平衡示意图 根据物料平衡：根据物料平衡：溶质在两相间的分配或吸附平衡常数：溶质在两相间的分配或吸附平衡常数：本讲稿第二十五页，共四十二页 通过数学处理，通过数学处理，组分的保留值为：组分的保留值为：从平衡色谱理论导出的溶质谱带迁移速率方程及相应的保留从平衡色谱理论导出的溶质谱带迁移速率方程及相应的保留时间、保留体积表达式，初步揭示了物质在色谱柱的差速迁移过时间、保留体积表达式，初步
25、揭示了物质在色谱柱的差速迁移过程。非线性等温线比较好地解释了不对称色谱峰，特别是拖尾峰程。非线性等温线比较好地解释了不对称色谱峰，特别是拖尾峰的成因。的成因。但它未能阐明色谱流出曲线，实际应用比较有限。但它未能阐明色谱流出曲线，实际应用比较有限。根据平衡色谱理论，当分布等温线呈线性时，溶质的根据平衡色谱理论，当分布等温线呈线性时，溶质的K K为常数，为常数，谱带迁移速率不变，不产生色谱谱带扩张。若分布等温线为非线性，谱带迁移速率不变，不产生色谱谱带扩张。若分布等温线为非线性，则则K K随随C Cm m变化溶质迁移速度亦变化，引起色谱峰扩张，形成不对称色谱变化溶质迁移速度亦变化，引起色谱峰扩张，
26、形成不对称色谱峰。峰。本讲稿第二十六页，共四十二页四、塔板理论(the plate model)19411941年年，MartinMartin和和SyngeSynge阐阐明明了了色色谱谱、蒸蒸馏馏和和萃萃取取之之间间的的相相似似性性，将将色色谱谱柱柱设设想想成成由由许许多多液液液液萃萃取取单单元元或或理理论论塔塔板板组组成成；与与精精馏馏相相似似，色色谱谱分分离离也也是是一一个个分分配配平平衡衡过过程程。这这就就是是MartinMartin等等人人提提出出的塔板理论的塔板理论。掌握这一理论的要点是：掌握这一理论的要点是：假设假设二项式分布（概率密度函数）二项式分布（概率密度函数）流出曲线流出曲
27、线实验事实实验事实本讲稿第二十七页，共四十二页塔板理论基本假设塔板理论基本假设固定相，流固定相，流动相，动相，H,vm，v3l l色谱柱由一系列塔板组成色谱柱由一系列塔板组成l l塔塔板板内内，组组分分在在两两相相间间迅迅速速达达到到平平衡衡（理想色谱）（理想色谱）l l组组分分的的分分配配系系数数不不随随它它的的浓浓度度变变化化而变化而变化（线性分布等温线）（线性分布等温线）l l组分的组分的轴向扩散为零轴向扩散为零l l流动相的流动是流动相的流动是跳跃过程跳跃过程本讲稿第二十八页，共四十二页流动相流动相固定相固定相塔板号0123r-1r 塔板理论示意图塔板理论示意图 如果把上述错流萃取过程
28、继续下去，即如果把上述错流萃取过程继续下去，即“平衡平衡转移转移再平衡再平衡再转移再转移。”本讲稿第二十九页，共四十二页0加样加样0平衡平衡流动流动0101再平衡再平衡流动流动012塔板理论示意图塔板理论示意图本讲稿第三十页，共四十二页第五节第五节 典型制备色谱工艺及应用典型制备色谱工艺及应用一、模拟移动床色谱（一、模拟移动床色谱（simulated moving bed,SMD）SMB SMB 色谱分离技术是色谱分离技术是20世纪世纪60年代发展起来的一种现代化年代发展起来的一种现代化分离技术分离技术,具有分离能力强具有分离能力强,设备体积小设备体积小,投资成本低投资成本低,便于实便于实现自
29、动控制并特别有利于分离现自动控制并特别有利于分离热敏性及难以分离的物系热敏性及难以分离的物系等优点等优点,在制备色谱技术中最适用于进行在制备色谱技术中最适用于进行连续性大规模工业化生产连续性大规模工业化生产。本讲稿第三十一页，共四十二页1.1.模拟移动床色谱的原理模拟移动床色谱的原理 SMB SMB色谱由多根色谱柱（大多为色谱由多根色谱柱（大多为5-125-12根）组根）组成。每根柱子之间用成。每根柱子之间用多位阀多位阀和管子连接在一和管子连接在一起，每根柱子均设有样品的进出口，并通过起，每根柱子均设有样品的进出口，并通过多位阀沿着流动相的流动方向，周期性地改多位阀沿着流动相的流动方向，周期性
30、地改变样品进出口位置，以此变样品进出口位置，以此模拟固定相与流动模拟固定相与流动相之间的逆流移动相之间的逆流移动，实现组分的连续分离，实现组分的连续分离本讲稿第三十二页，共四十二页2.2.建立建立SMBSMB色谱分离工艺的步骤色谱分离工艺的步骤（1 1）设置工艺要求）设置工艺要求（2 2）确定溶解度）确定溶解度（3 3）选择固定相）选择固定相（4 4）优化分离条件）优化分离条件（5 5）工艺参数模拟）工艺参数模拟（6 6）中试研究）中试研究本讲稿第三十三页，共四十二页3.SMB3.SMB色谱的应用色谱的应用 2020世纪世纪9090年代以来，年代以来，SMBSMB色谱开始用于药物尤其是手性药物
31、的色谱开始用于药物尤其是手性药物的分离，到现在分离，到现在SMBSMB已发展到吨级工艺。已发展到吨级工艺。SMB SMB色谱技术在生物分离领域也有较广泛的应用。色谱技术在生物分离领域也有较广泛的应用。SMB SMB色谱正逐步地取代色谱正逐步地取代cyclosporin Acyclosporin A的传统间歇色谱纯化工艺。的传统间歇色谱纯化工艺。一般地，一般地，SMBSMB色谱技术应用于两组分分离系统。在制药工业中，色谱技术应用于两组分分离系统。在制药工业中，作为结晶、选择性手性合成等拆分手性药物技术的取代技术。作为结晶、选择性手性合成等拆分手性药物技术的取代技术。本讲稿第三十四页，共四十二页4
32、.SMB4.SMB色谱技术的优势色谱技术的优势（1 1）SMBSMB色谱是一个连续色谱分离过程色谱是一个连续色谱分离过程（2 2）SMBSMB色谱技术比其他制备色谱的分离效率高色谱技术比其他制备色谱的分离效率高（3 3）SMBSMB色谱技术可以实现旋光异构物分离过程从分色谱技术可以实现旋光异构物分离过程从分析型色谱条件快速、可靠的放大至生产规模析型色谱条件快速、可靠的放大至生产规模（4 4）SMBSMB色谱装置可以适合不同规模的色谱分离过程色谱装置可以适合不同规模的色谱分离过程本讲稿第三十五页，共四十二页二、扩展床吸附色谱二、扩展床吸附色谱(expandedbedabsorption,EBA)
33、1.EBA1.EBA色谱的基本原理和特点色谱的基本原理和特点 使用特殊设计的扩张床介质在床层中适度膨胀，使用特殊设计的扩张床介质在床层中适度膨胀，介质与介质间的空隙能让发酵液中的不吸附的固体介质与介质间的空隙能让发酵液中的不吸附的固体颗粒直接穿过扩张床；同时，特殊设计的颗粒直接穿过扩张床；同时，特殊设计的扩张床介扩张床介质质能够形成稳定分级的床层结构，在经过优化的条件能够形成稳定分级的床层结构，在经过优化的条件下，从混浊的样品中直接吸附目标产品。下，从混浊的样品中直接吸附目标产品。本讲稿第三十六页，共四十二页nStreamline介质是一系列不同比重、包裹着侍应芯或不锈钢介质是一系列不同比重、
34、包裹着侍应芯或不锈钢芯，以琼脂糖为基架的介质。芯，以琼脂糖为基架的介质。本讲稿第三十七页，共四十二页本讲稿第三十八页，共四十二页2.EBA2.EBA色谱常用固定相（凝胶）及选择原则色谱常用固定相（凝胶）及选择原则（1 1）常用）常用EBAEBA凝胶凝胶 Streamline系列凝胶、系列凝胶、CetamicHypetD系列、系列、Fractosil系列系列、Biotran系列系列（2 2）EBAEBA色谱的凝胶选择原则色谱的凝胶选择原则 凝胶介质的颗粒大小和密度能使原材料的生物体和吸附剂颗粒间的临界沉积凝胶介质的颗粒大小和密度能使原材料的生物体和吸附剂颗粒间的临界沉积流速产生明显的区别；流速产
35、生明显的区别；凝胶介质的颗粒大小和你度分布应使凝胶介质的颗粒大小和你度分布应使EBAEBA扩展过量尽量小的固液轴向扩展过量尽量小的固液轴向混合；混合；吸附剂应能耐受培养基中生物体、核酸、脂类物质等的污染；吸附剂应能耐受培养基中生物体、核酸、脂类物质等的污染；连接到吸附剂上的配基应足够稳定；连接到吸附剂上的配基应足够稳定；吸附剂的物质转移能力在吸附剂的物质转移能力在EBAEBA色谱应用中足够有效。色谱应用中足够有效。本讲稿第三十九页，共四十二页3.EBA3.EBA色谱的应用色谱的应用（1 1）细胞匀浆液中提取酶）细胞匀浆液中提取酶（2 2）大规模质粒）大规模质粒DNADNA的提取的提取本讲稿第四
36、十页，共四十二页三、制备型超临界流体色谱三、制备型超临界流体色谱（Pre-SFC)1.1.超临界流体色谱的原理及特点超临界流体色谱的原理及特点（1 1）可以用于多种用途的分离，而无需为柱平衡耗费时间）可以用于多种用途的分离，而无需为柱平衡耗费时间（2 2）收集的馏分中的流动相容易去除）收集的馏分中的流动相容易去除（3 3）流动相回收简便）流动相回收简便（4 4）技术昂贵）技术昂贵（5 5）不能溶解所有物质，需加入改良剂）不能溶解所有物质，需加入改良剂本讲稿第四十一页，共四十二页2.Pre-SFC2.Pre-SFC的应用的应用（1 1）分离纯化）分离纯化EPA-EEEPA-EE（2 2）分离极性化合物）分离极性化合物 黄酮类化合物、生物碱混合体系黄酮类化合物、生物碱混合体系本讲稿第四十二页，共四十二页