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1、 第九次实验第九次实验 方法比较试验方法比较试验 方法比较试验是将候选方法与准确度方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法做对比，以评价候选方法的已知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。误差和比例误差的大小。教学目的与要求教学目的与要求1.掌握方法比较试验的原理和评价。掌握方法比较试验的原理和评价。2 2.掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。测血糖的测定原理。3 3.熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。清血糖的操作过程。一、试
2、剂与材料一、试剂与材料1.己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂试剂A、试剂、试剂B按按2：1混合）混合）。2.氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂试剂A、试剂、试剂B按按2：1混合混合）。）。3.半自动生化分析仪。半自动生化分析仪。4.实验血清。实验血清。三、血糖的测定（三、血糖的测定（己糖激酶法已讲己糖激酶法已讲）（一）实验原理（一）实验原理TrinderTrinder反应反应:GOD葡萄糖酸葡萄糖酸2H2H2 2O O2 2氧化酶法氧化酶法葡萄糖葡萄糖2H2O O2 H H2 2O O2 2 4-AAP 4-AAP 酚酚
3、POD苯醌亚胺苯醌亚胺2H2O HCl2.2.混匀，混匀，3737水浴水浴7 7分钟，波长分钟，波长 500nm 500nm比色。比色。（二）操作方法（二）操作方法 工工作作液液1ml蒸蒸馏馏水水1010ul ul 葡萄糖葡萄糖标准标准10ul血清血清10ul 1.空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管 工工作作液液1ml混合混合混合混合3.3.结果计算结果计算测定管吸光度测定管吸光度GLUGLU（mmol/L)mmol/L)标准管吸光度标准管吸光度GLUGLU（mmol/L)mmol/L)GLUGLU（mmol/L)mmol/L)GLUGLU（mmol/L)mmol/L)4.注意事项注意事
4、项1.1.新配制的葡萄糖标准液须放置新配制的葡萄糖标准液须放置2h2h以上以上(最好过夜最好过夜)，待变旋平衡后方可应用，待变旋平衡后方可应用.2.尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。3.还原性物质可竞争还原性物质可竞争H2O2,使结果偏低。使结果偏低。4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。四、方法比较四、方法比较 以葡萄糖已糖激酶法作为参比方以葡萄糖已糖激酶法作为参比方法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进行比较。行比
5、较。1.收集标本收集标本 每天收集高、中、低不同浓每天收集高、中、低不同浓度标本度标本8份，份，5天共天共40份。份。2.测定测定 将标本编号，分别用两种方法先将标本编号，分别用两种方法先从从1-8顺序测定，再从顺序测定，再从8-1顺序测定，记顺序测定，记录测定结果录测定结果。重复重复5天。天。以对比方法以对比方法的结果为横坐标的结果为横坐标被评价方法的结被评价方法的结果为纵坐标绘制果为纵坐标绘制散点图。散点图。3.3.绘制散点图绘制散点图YX4.4.检查散点图有无明显离群点检查散点图有无明显离群点（1 1）分别计算每对结果差值，如：）分别计算每对结果差值，如：X1-Y1 X1-Y1、X2-Y
6、2.X2-Y2.（2 2）计算所有差值的平均差值。）计算所有差值的平均差值。（3 3）离群判断）离群判断 以以4 4倍平均差值作判断限。倍平均差值作判断限。某对差值超出某对差值超出4 4倍平均差值则视为离群倍平均差值则视为离群点，剔除，若有两个离群点，则另做标点，剔除，若有两个离群点，则另做标本补充本补充8 8分结果。分结果。5.5.回归及相关分析回归及相关分析 根据直线回归分析，求出回归方程根据直线回归分析，求出回归方程y=a+bx及相及相关系数关系数r。截距。截距a反映恒定系统误差的大小，斜反映恒定系统误差的大小，斜率率b反映比例系统误差的大小，相关系数反映两反映比例系统误差的大小，相关系
7、数反映两种方法相关性的密切程度，种方法相关性的密切程度，r或或r，可接受，可接受。6.6.计算系统误差计算系统误差 根据回归方程的根据回归方程的a a、b b值，可以计算候选值，可以计算候选方法的系统误差（方法的系统误差（SESE）；并与不同医学决）；并与不同医学决定水平（定水平（XcXc）的允许误差（）的允许误差（TEaTEa）作比较。）作比较。要求要求SE=SE=（a+bXca+bXc）-Xc 1/2TEa-Xc 1/2TEa7.7.配对配对t t检验检验 通过统计软件进行配对通过统计软件进行配对t t检验，检验，t t值是方法值是方法比较实验中系统误差和随机误差的比值，若比较实验中系统误差和随机误差的比值，若tttt0.05(v)0.05(v)，表明两种方法间的系统误差和随，表明两种方法间的系统误差和随机误差量相比相差不大，尽管有偏差，但可机误差量相比相差不大，尽管有偏差，但可能由随机误差为主所致，不一定确实存在方能由随机误差为主所致，不一定确实存在方法间的系统误差。法间的系统误差。请预习：请预习：甘油三脂测定甘油三脂测定吸收曲线检测吸收曲线检测