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1、第六章 食品中病原菌的检验第五节第五节 其他致病菌的检验其他致病菌的检验 食品中蜡样芽孢杆菌的检验食品中蜡样芽孢杆菌的检验一、生物学特性一、生物学特性（一）、形态与染色（一）、形态与染色 革兰氏阳性大杆菌革兰氏阳性大杆菌，芽胞不突出菌体，菌体两芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列端较平整，多数呈链状排列，周身鞭毛，有周身鞭毛，有动力动力。荧荧光光染染色色的的铜铜绿绿假假单单胞胞杆杆菌菌和和蜡蜡样样芽芽孢孢杆杆菌菌 用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢 用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢一、生物学特性一、生物学特性（二）、培养特性（二）
2、、培养特性 1 1、需氧，最适生长、需氧，最适生长3032.3032.2 2、在在肉肉汤汤中中混混浊浊生生长长，有有菌菌膜膜或或壁壁环环，振振摇摇易乳化。易乳化。3 3、在普通琼脂平板上，菌落灰白色、在普通琼脂平板上，菌落灰白色,不透明，不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。状。4 4、在在血血平平板板上上，菌菌落落呈呈浅浅灰灰色色，不不透透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。明，似白色毛玻璃状，有溶血环。5 5、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色（表示不发酵甘露醇）落呈粉红色（表示不发酵甘露醇）,周围有粉红色的
3、晕（表示产生卵磷周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）脂酶）一、生物学特性一、生物学特性（三）、生化反应（三）、生化反应1 1、能能分分解解GLUGLU，麦麦芽芽糖糖，蔗蔗糖糖，水水杨杨苷苷，产产酸不产气。酸不产气。2 2、不不分分解解乳乳糖糖，甘甘露露醇醇，阿阿拉拉伯伯糖糖，山山梨梨醇，木糖醇，木糖 3 3、H H2 2S S（-），尿尿素素酶酶试试验验（-）卵卵磷磷脂脂酶酶（+），VPVP试试验验（+），液液化化明明胶胶，胨胨化化中乳。中乳。（三）、生化反应（三）、生化反应麦芽糖：阳性（三）、生化反应（三）、生化反应甘露醇：阴性（三）、生化反应（三）、生化反应木糖：阴性（三）、生化反应（三）
4、、生化反应尿素酶试验：阴性未接种接种（四）、抵抗力（四）、抵抗力1 1、耐热；、耐热；2 2、对抗菌素的敏感性。抗菌素的敏感性。二、流行病学二、流行病学（一）、细菌分布（一）、细菌分布 蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品中常见。已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点等。在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因；在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。二、流行病学二、流行病学（一）、细菌分布（一）、细菌分布 以前调查各种食品514件，发
5、现本菌：日本1641件中有193件阳性，阳性率11.8%；国内480件中有221件阳性，阳性率46%；乳制品阳性率77%；水果、干果阳性率8.1%；肉制品阳性率26%。（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况1 1、季节性强：（、季节性强：（610610月）夏秋季为高峰期月）夏秋季为高峰期 2 2、中中毒毒发发病病率率高高：60%100%60%100%，集集团团中中爆爆发发，与葡萄球菌相似与葡萄球菌相似 3 3、中毒与性别、年龄无关：、中毒与性别、年龄无关：4 4、潜伏期长短与中毒症状相关：、潜伏期长短与中毒症状相关：呕吐症呕吐症 0.55h 0.55h，发
6、病，发病 腹泻腹泻 8h 8h后后 5 5、污污染染源源：主主要要泥泥土土，灰灰尘尘，通通过过昆昆虫虫，不不洁洁用具，工作人员传播，原料也有用具，工作人员传播，原料也有.6 6、常常见见中中毒毒食食品品：乳乳类类食食品品，肉肉类类，米米饭饭，淀淀粉类食品，甜点心，凉拌蔬菜，水果，色拉。粉类食品，甜点心，凉拌蔬菜，水果，色拉。国内：与淀粉质食品相关多，国内：与淀粉质食品相关多，7 7、临床症状：、临床症状：（1 1）呕吐型）呕吐型 （2 2）腹泻型）腹泻型（二）蜡样芽胞杆菌的（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况食物中毒的一般情况三、微生物检验三、微生物检验（一）检验程序（一）检验程序 检样检样
7、 稀释处理稀释处理镜检镜检 平板分离平板分离菌落计数菌落计数 培养特性观察培养特性观察 报告结果报告结果 生化试验生化试验 证实试验证实试验 三、微生物检验三、微生物检验（二）操作步骤：1、菌数测定 以无菌操作将检样25g(ml),用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-110-5的稀释液。取各稀释液，接种在两个选择性培养基甘露醇卵黄多孢菌素（MYP）琼脂培养基上，用L形涂棒涂布于整个表面，置36+-1恒温箱培养 12-20h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后从中选取5个此种菌落做证实试验。三、
8、微生物检验三、微生物检验 操操作步骤：2、分离试验 取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37度培养12-20h，挑取可疑的蜡状芽胞杆菌菌落接种于肉汤和营养琼脂作成纯培养，然后做证实试验。3、证实试验（1）镜检观察形态（2）培养特性（3）生化性状及分型 三、微生物检验三、微生物检验（三）结果报告 根据证实为蜡状芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘以稀释倍数，即得每g(ml)样品中所含蜡状芽孢杆菌数。如MYP平板上的可以菌落为25个，取5个鉴定，证实为四个，乘上稀释倍数（104），再乘上1g(ml)检样数（取的是样)，则N=25*4/5*104*10=2*106 报告
9、每个g(ml)检样中含蜡状芽胞杆菌的数量（个/个g(ml)结果报告或MYPMYP检样25克生化试验菌落计数镜检镜检挑可疑菌落血平板或血平板或营养琼脂营养琼脂或思考题思考题 1 1、引引起起蜡蜡样样芽芽胞胞杆杆菌菌食食物物中中毒毒的的常常见见食食物物有有哪哪些些，什什么么条条件件下下可可引引起起蜡蜡样样芽芽胞胞杆杆菌菌食食中中毒。毒。2 2、蜡样芽胞杆菌的形态与染色特性如何。、蜡样芽胞杆菌的形态与染色特性如何。3 3、蜡蜡样样芽芽胞胞杆杆菌菌在在普普通通营营养养琼琼脂脂和和甘甘露露醇醇卵黄多粘菌琼脂平板上生长的菌落特征如何？卵黄多粘菌琼脂平板上生长的菌落特征如何？4 4、写出蜡样芽胞杆菌检验的基本程序、写出蜡样芽胞杆菌检验的基本程序