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1、致病菌的检验革兰氏阳性产芽孢杆菌简要第1页，此课件共37页哦第一节第一节 芽胞杆菌属芽胞杆菌属（Bacillus）n一群需氧、能产芽胞的革兰氏阳性大杆菌。共一群需氧、能产芽胞的革兰氏阳性大杆菌。共40多种，其中对人多种，其中对人畜致病的较少，仅畜致病的较少，仅炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)具强烈致具强烈致病性，侵害草食动物及人，引起动物和人类炭疽病。病性，侵害草食动物及人，引起动物和人类炭疽病。n类炭疽杆菌类炭疽杆菌(形态与炭疽杆菌相似形态与炭疽杆菌相似)是实验室常见的污染菌，偶是实验室常见的污染菌，偶尔也能致病。尔也能致病。蜡状芽胞杆菌蜡状芽胞杆菌(S.ce
2、reus)的某些菌株可产肠毒素，的某些菌株可产肠毒素，引致食物中毒；其他多为腐生菌，主要存在于土壤、水和灰引致食物中毒；其他多为腐生菌，主要存在于土壤、水和灰尘中，如尘中，如枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。本节重点介绍。本节重点介绍炭疽芽胞杆炭疽芽胞杆菌菌。第2页，此课件共37页哦炭疽芽胞杆菌（炭疽芽胞杆菌（B.anthracisB.anthracis）该菌俗称该菌俗称炭疽杆菌炭疽杆菌，人畜共患病原体，在医学和兽，人畜共患病原体，在医学和兽医学上都相当重要医学上都相当重要，是引起人类、各种家畜和野生动，是引起人类、各种家畜和野生动物炭疽（物炭疽（AnthraxAnthrax）
3、的病原）的病原 。第3页，此课件共37页哦lG+大杆菌，长而粗大，菌体平直，两端平截。大杆菌，长而粗大，菌体平直，两端平截。长长3.08.0m，宽宽1.01.5m；无鞭毛。在组织和血液中单在或短链状，培无鞭毛。在组织和血液中单在或短链状，培养后形成养后形成竹节状长链竹节状长链。l该菌在组织或含血液培养基中可形成该菌在组织或含血液培养基中可形成荚膜荚膜。有氧条件下形成芽。有氧条件下形成芽孢，位于菌体中央，不膨出菌体。无鞭毛。孢，位于菌体中央，不膨出菌体。无鞭毛。一、形态及染色特性一、形态及染色特性第4页，此课件共37页哦体内外培养有较大形态差异。体内外培养有较大形态差异。（1）体内（即病料中，如
4、血液、组织）形态：）体内（即病料中，如血液、组织）形态：单在或短链状单在或短链状(一般约一般约25个个)，似竹节状；，似竹节状；形成荚膜；不形成芽胞；形成荚膜；不形成芽胞；相连的菌端平截或微凹，游离端钝圆，相连的菌端平截或微凹，游离端钝圆，本菌属的其他细菌接头钝圆本菌属的其他细菌接头钝圆，如，如蜡状芽胞杆菌。蜡状芽胞杆菌。第5页，此课件共37页哦（2）体外（培养基）形态：）体外（培养基）形态：长链状（几十或上百个）；长链状（几十或上百个）；形成椭圆形芽胞，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体；形成椭圆形芽胞，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体；普通培养基上不形成荚膜普通培养基上不形成荚膜。一、形
5、态及染色特性一、形态及染色特性第6页，此课件共37页哦（3）炭疽杆菌特征形态：）炭疽杆菌特征形态：慢性局部炭疽病料慢性局部炭疽病料:菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转的杆状；菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转的杆状；血琼脂、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，血琼脂、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，1020%CO2条件下条件下可形成荚膜可形成荚膜；病料腐败后，碳疽芽孢杆菌菌体分解，但荚膜抗腐败能力较强，荚膜病料腐败后，碳疽芽孢杆菌菌体分解，但荚膜抗腐败能力较强，荚膜仍可残留，称为仍可残留，称为“菌蜕菌蜕”。一、形态及染色特性一、形态及染色特性第7页，此课件共37页哦二、培养特性二、培养特性 1.需氧或兼性厌氧
6、，最适生长温度需氧或兼性厌氧，最适生长温度30-37，pH7.2-7.6，营养要求，营养要求不高，不高，普通培养基中生长良好普通培养基中生长良好。强毒株强毒株形成灰白色不透明、大而扁形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥；平、表面干燥；无毒或弱毒株无毒或弱毒株形成稍小而隆起、形成稍小而隆起、表面较为光滑湿润、边缘比较整表面较为光滑湿润、边缘比较整齐的光滑型菌落。齐的光滑型菌落。强毒株菌落强毒株菌落第8页，此课件共37页哦2.血琼脂：一般不溶血，个别菌株轻微溶血；而该属其他成员血琼脂：一般不溶血，个别菌株轻微溶血；而该属其他成员多有明显溶血；多有明显溶血；3.液体液体肉汤肉汤培养基培养基：24h呈
7、絮状沉淀生长，呈絮状沉淀生长，上清透明清朗上清透明清朗，不形成菌膜和菌环；不形成菌膜和菌环；第9页，此课件共37页哦4.4.明胶穿刺培养，呈倒松树状，表面液化呈漏斗状。明胶穿刺培养，呈倒松树状，表面液化呈漏斗状。明胶穿刺培养明胶穿刺培养第10页，此课件共37页哦5.在含在含0.5IU/ml青霉素的培养基中，可形成青霉素的培养基中，可形成串珠反应串珠反应，与其它需氧芽孢杆菌，与其它需氧芽孢杆菌区别。当青霉素加至区别。当青霉素加至10IU/mL时，炭疽杆菌生长受抑，不生长或微弱生长，时，炭疽杆菌生长受抑，不生长或微弱生长，而该属其他细菌一般不被抑制。而该属其他细菌一般不被抑制。串珠反应串珠反应：在
8、含青霉素在含青霉素0.5IU/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细胞壁的肽聚的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串。第11页，此课件共37页哦三、生化特性生化特性 生化试验不是炭疽杆菌的主要鉴定项目。可了解以下内容：生化试验不是炭疽杆菌的主要鉴定项目。可了解以下内容：分解葡萄糖，分解葡萄糖，V.P阳性，阳性，还原硝酸盐，还原硝酸盐，不产生吲哚、不产生吲哚、H2S，H2O2酶阳性。酶阳性。第12页，此课件共37页哦四、抵抗力抵抗力 1、繁殖体：抵抗力不强，同一般无芽孢杆菌。常用消、繁殖体：抵抗力不强，同一般无芽孢杆菌。常
9、用消毒剂均能于短时间内将其杀死。毒剂均能于短时间内将其杀死。2、芽胞体：抵抗力非常强，对热、干燥等具有较强的抵抗、芽胞体：抵抗力非常强，对热、干燥等具有较强的抵抗力；力；室温干燥可存活十年，干燥背光处可存活室温干燥可存活十年，干燥背光处可存活40年以上。在动年以上。在动物皮毛上能活数年，物皮毛上能活数年，混入泥土中可存活数年至数十年混入泥土中可存活数年至数十年，每到，每到春夏时期地面长出青草时，可将泥中的芽胞带至地面，春夏时期地面长出青草时，可将泥中的芽胞带至地面，牛羊食入牛羊食入而受感染而受感染。3、牧场一旦被芽胞感染，传染性可保持、牧场一旦被芽胞感染，传染性可保持20-30年。煮沸年。煮沸
10、1h或干热或干热1403h可杀灭芽孢。可杀灭芽孢。炭疽杆菌的芽胞对碘敏感炭疽杆菌的芽胞对碘敏感，1:2500碘液碘液10min即可杀死芽胞。即可杀死芽胞。第13页，此课件共37页哦1.结构抗原结构抗原 (1)(1)荚膜抗原：荚膜抗原：多肽，仅见于有毒菌株，多肽，仅见于有毒菌株，与毒力和抗吞噬有关。与毒力和抗吞噬有关。(2)(2)菌体抗原：菌体抗原：多糖，多糖，与细菌毒力无关与细菌毒力无关。性质稳定，加热煮沸甚至高。性质稳定，加热煮沸甚至高压蒸汽处理抗原性不被破坏。在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮压蒸汽处理抗原性不被破坏。在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸仍能与特异性抗体反应形成环状沉淀，称为沸
11、仍能与特异性抗体反应形成环状沉淀，称为Ascoli 反应反应。(3)(3)芽胞抗原芽胞抗原：由芽胞的外膜和皮质组成，具免疫原性。由芽胞的外膜和皮质组成，具免疫原性。2.保护性抗原（保护性抗原（PA）是炭疽毒素（是炭疽毒素（PAPA、LFLF、EFEF）的组成成分之一，具有免疫原性，能刺激机）的组成成分之一，具有免疫原性，能刺激机体产生体产生保护性抗体保护性抗体。五、抗原结构五、抗原结构 第14页，此课件共37页哦六、致病性六、致病性动物吃动物吃含本菌芽胞的饲料或青草含本菌芽胞的饲料或青草肠出芽增殖肠出芽增殖血血败血症，脾肿大发黑败血症，脾肿大发黑炭疽炭疽(病程短而急，数日死亡病程短而急，数日死
12、亡)。1、易感性、易感性（1）绵羊、牛、鹿最易感）绵羊、牛、鹿最易感急性败血性，尸僵不全、血急性败血性，尸僵不全、血凝不良、天然孔出血，臌气；凝不良、天然孔出血，臌气；脾急剧肿胀至脾急剧肿胀至34倍倍；（2）马属、骆驼、猪、山羊次之）马属、骆驼、猪、山羊次之多为慢性局部感染多为慢性局部感染,如咽部；如咽部；（3）狗、猫及食肉动物抵抗力强）狗、猫及食肉动物抵抗力强多表现肠炭疽；多表现肠炭疽；（4）禽类通常无易感性；）禽类通常无易感性；（5）人类：因侵入途径不同而出现不同症状。）人类：因侵入途径不同而出现不同症状。第15页，此课件共37页哦2、毒力因子、毒力因子（1）荚膜荚膜：炭疽杆菌的荚膜能：炭
13、疽杆菌的荚膜能抵抗宿主吞噬抵抗宿主吞噬细胞的吞噬，有利于在细胞的吞噬，有利于在机体内生存、繁殖和扩散。机体内生存、繁殖和扩散。（2）炭疽毒素：主要由）炭疽毒素：主要由3种成分构成。种成分构成。水肿因子水肿因子(edemafactor，EF):脂蛋白脂蛋白致死因子致死因子(lethalfactor，LF):蛋白质蛋白质保护性抗原保护性抗原(protectiveantigen，PA):一种辅酶。一种辅酶。此此3种成分单独对动物无毒性。前种成分单独对动物无毒性。前2种成分混合注射家兔或豚鼠皮种成分混合注射家兔或豚鼠皮下可致下可致皮肤水肿皮肤水肿；后；后2种混合注射可致种混合注射可致肺部出血水肿肺部出
14、血水肿，并使豚鼠致死；，并使豚鼠致死；3种混合注射可出现炭疽种混合注射可出现炭疽典型中毒症状典型中毒症状。炭疽毒素主要是炭疽毒素主要是增强微血管的通透性增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，改变血液循环动力学，血液呈高凝状态血液呈高凝状态，引起，引起DIC和感染性休克。和感染性休克。第16页，此课件共37页哦3、致病类型、致病类型可致人畜共患的急性、热性、败血性传染病。所致疾病分皮可致人畜共患的急性、热性、败血性传染病。所致疾病分皮肤、肺、肠和败血性炭疽四种。肤、肺、肠和败血性炭疽四种。（1）皮肤炭疽：皮肤炭疽：最常见。病菌经皮肤小伤口进入，经最常见。病菌经皮肤小伤口进入，经12-36h局部
15、出局部出现小疖，继之形成水泡，脓疱，最后中心形成现小疖，继之形成水泡，脓疱，最后中心形成炭色坏死焦痂炭色坏死焦痂，炭疽炭疽之之名由此而得。名由此而得。患者有高热、寒战患者有高热、寒战。轻症。轻症2-3周治愈，重症发展成败血症周治愈，重症发展成败血症而死亡。而死亡。（2）肺炭疽：肺炭疽：由于吸入炭疽芽胞所致。病初似感冒症状，进而呈由于吸入炭疽芽胞所致。病初似感冒症状，进而呈严重的支气管肺炎，痰中带血并伴有全身中毒等症状，严重的支气管肺炎，痰中带血并伴有全身中毒等症状，2-3天内可死于天内可死于中毒性休克。中毒性休克。（3）肠炭疽：肠炭疽：因食入未煮透的病畜肉制品所致。有连续性呕吐和因食入未煮透的
16、病畜肉制品所致。有连续性呕吐和便血，全身中毒症状严重，便血，全身中毒症状严重，2-3天内死于毒血症。天内死于毒血症。第17页，此课件共37页哦七、微生物学诊断七、微生物学诊断 1、标本采集、标本采集按不同病型采取标本，动物尸体仅能割尾、耳或舌尖。一般常取按不同病型采取标本，动物尸体仅能割尾、耳或舌尖。一般常取水泡、脓疱内容物、焦痂、咯痰、粪及血液、脑脊液等。水泡、脓疱内容物、焦痂、咯痰、粪及血液、脑脊液等。检验时必须注意：检验时必须注意：（1）病料镜检时一般有）病料镜检时一般有荚膜荚膜，如无荚膜则分离培养后接种实验动物，如无荚膜则分离培养后接种实验动物再进行形态检查。再进行形态检查。（2）注意
17、与类似的细菌鉴别，如）注意与类似的细菌鉴别，如蜡状芽胞杆菌蜡状芽胞杆菌等。等。（3）对疑似炭疽死亡的家畜严禁剖检，）对疑似炭疽死亡的家畜严禁剖检，因其血液不凝因其血液不凝，血溅流，血溅流地面，血中细菌遇空气即生成芽胞，芽胞在土壤中可存活数十年，地面，血中细菌遇空气即生成芽胞，芽胞在土壤中可存活数十年，造成造成该地区长期的疫源该地区长期的疫源。如必须检验时，只可取兽耳或尾，密封送检，。如必须检验时，只可取兽耳或尾，密封送检，死兽焚毁或深埋。死兽焚毁或深埋。第18页，此课件共37页哦2.细菌学检查细菌学检查（）镜检：大杆菌，两端平截，竹节状（）镜检：大杆菌，两端平截，竹节状（）分离培养：用普通琼脂
18、或血琼脂（）分离培养：用普通琼脂或血琼脂（）纯培养（）纯培养:镜检、串珠试验、生化试验镜检、串珠试验、生化试验（）动物试验：将检验材料制成悬液或纯培养物给（）动物试验：将检验材料制成悬液或纯培养物给小鼠注射，小鼠注射，24-36h小鼠死于败血症。小鼠死于败血症。第19页，此课件共37页哦3.血清学检查血清学检查 抗原检测抗原检测（）（）Ascoli沉淀反应沉淀反应将病兽皮革或尸体组织切碎，加水煮沸过滤，取滤液滴加于小管内将病兽皮革或尸体组织切碎，加水煮沸过滤，取滤液滴加于小管内的免疫血清，室温或的免疫血清，室温或37放置放置10min，如见两液接触面出现，如见两液接触面出现白色沉淀环白色沉淀环
19、即为阳性，表明滤液中有该菌的多糖抗原。此法可对腐败尸体及皮革进行即为阳性，表明滤液中有该菌的多糖抗原。此法可对腐败尸体及皮革进行追补诊断，但特异性不高，可出现假阳性。追补诊断，但特异性不高，可出现假阳性。第20页，此课件共37页哦3.血清学检查血清学检查（）间接血凝试验（）间接血凝试验（）协同凝集试验（）协同凝集试验（）串珠荧光抗体检查（）串珠荧光抗体检查（）琼脂扩散试验（）琼脂扩散试验抗体检查抗体检查比较恢复期和急性期血清特异性抗体升高情况，确诊或流行病比较恢复期和急性期血清特异性抗体升高情况，确诊或流行病学调查。学调查。第21页，此课件共37页哦1、防、防病畜尸体应焚烧或深埋于病畜尸体应焚
20、烧或深埋于2米以下。毛、革必须消毒处米以下。毛、革必须消毒处理。理。对易感染家畜进行对易感染家畜进行号炭疽芽胞苗、无毒炭疽芽胞苗预号炭疽芽胞苗、无毒炭疽芽胞苗预防接种防接种。对疫区牧民、屠宰员、兽医和皮毛等加工人员以。对疫区牧民、屠宰员、兽医和皮毛等加工人员以及接触牲畜的其他有关人员，应预防接种人用炭疽减毒活及接触牲畜的其他有关人员，应预防接种人用炭疽减毒活疫苗。疫苗。2、治、治青霉素青霉素等抗生素作为首选药物，必要时可用等抗生素作为首选药物，必要时可用特异性高免特异性高免血清血清进行紧急预防接种。炭疽痊愈动物可获得坚强免疫，再次进行紧急预防接种。炭疽痊愈动物可获得坚强免疫，再次感染者很少。感
21、染者很少。八、免疫防治八、免疫防治第22页，此课件共37页哦第二节第二节 梭菌属（梭菌属（ClostridiumClostridium）n该属细菌多数严格厌氧，革兰氏染色阳性，形成芽孢，该属细菌多数严格厌氧，革兰氏染色阳性，形成芽孢，芽芽孢直径往往比菌体粗孢直径往往比菌体粗，使菌体膨胀成梭状，但并非梭菌，使菌体膨胀成梭状，但并非梭菌属的细菌均为梭状，如属的细菌均为梭状，如破伤风梭菌，芽孢位于菌体顶破伤风梭菌，芽孢位于菌体顶端，菌体呈鼓槌状端，菌体呈鼓槌状。n该属细菌能产生多种该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶外毒素和侵袭性酶，致病性强，包括，致病性强，包括产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌、腐败梭菌、诺
22、维梭菌、肉毒梭菌和、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和破伤风梭破伤风梭菌菌等。等。第23页，此课件共37页哦一一 产气荚膜梭菌（产气荚膜梭菌（Cl.perfringensCl.perfringens）旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。一定条件下，可引起多旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。一定条件下，可引起多种严重疾患，局部组织出现坏死、水肿、产气。种严重疾患，局部组织出现坏死、水肿、产气。第24页，此课件共37页哦革兰氏阳性粗大梭菌，革兰氏阳性粗大梭菌，3-41-1.5m。单独或成双排列，有时成短链。单独或成双排列，有时成短链。芽胞卵圆形，宽度不比菌体大，位于中央或末端。芽胞卵圆形，宽度不比菌体大，位
23、于中央或末端。培养时芽胞少见，培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞须在无糖培养基中才能生成芽胞。在脓汁、坏死。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器涂片可见明显组织或感染动物脏器涂片可见明显荚膜荚膜，无鞭毛，不能运动。，无鞭毛，不能运动。无芽孢无芽孢 有芽孢有芽孢 有荚膜有荚膜1、形态及染色特征、形态及染色特征 第25页，此课件共37页哦厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。(1)血液琼脂平板血液琼脂平板:菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，状，多数菌株有双层溶血环，内环是多数菌株有双层溶血环，内环是毒素的作用，而外环不完毒素的作用
24、，而外环不完全溶血是全溶血是a毒素所致。毒素所致。(2)疱肉培养基疱肉培养基:肉渣不被消化，有时呈肉红色。肉渣不被消化，有时呈肉红色。2 2、培养特性、培养特性第26页，此课件共37页哦(3)牛乳培养基牛乳培养基:分解乳糖产分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体大量气体，将凝固的酪蛋白冲成，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为现象称为“暴烈发酵暴烈发酵”，是本菌，是本菌的特点之一。的特点之一。2 2、培养特性、培养特性第27页，此课件共37页哦n血平板上
25、，多数菌株有血平板上，多数菌株有双层溶血环双层溶血环，内环完全溶血，内环完全溶血，外环不完全溶血。外环不完全溶血。第28页，此课件共37页哦3、生化特性生化特性 能分解多种糖类，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、能分解多种糖类，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖，产酸产气。蔗糖，产酸产气。分解水杨苷不稳定，不发酵甘露糖分解水杨苷不稳定，不发酵甘露糖;能液化明胶，还原硝酸盐，产生硫化氢；能液化明胶，还原硝酸盐，产生硫化氢；不产生吲哚，不能消化已凝固的蛋白质和血清。不产生吲哚，不能消化已凝固的蛋白质和血清。第29页，此课件共37页哦产气荚膜梭菌既能产生强烈的产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素外毒
26、素，又有多种，又有多种侵袭性酶侵袭性酶，并有，并有荚膜荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染性疾病。，构成其强大的侵袭力，引起感染性疾病。毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强，但种类多，有毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强，但种类多，有12种种外毒素外毒素()和具有毒性作用的多种和具有毒性作用的多种侵袭性侵袭性酶酶(卵磷脂酶、纤维蛋卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶和白酶、透明质酸酶、胶原酶和DNA酶酶)，构成强大的侵袭力构成强大的侵袭力。在各种毒素和酶中，在各种毒素和酶中，以以毒素最为重要毒素最为重要，毒素是一种卵磷脂酶，能分毒素是一种卵磷脂酶，能分解卵磷脂，损伤多种细胞的细胞膜，引
27、起溶血、组织坏死，血管内皮细胞损伤，解卵磷脂，损伤多种细胞的细胞膜，引起溶血、组织坏死，血管内皮细胞损伤，使血管通透性增高，造成水肿。使血管通透性增高，造成水肿。毒素毒素有溶血和破坏白细胞的作用，有溶血和破坏白细胞的作用，胶原酶胶原酶能分解肌肉和皮下的胶原能分解肌肉和皮下的胶原组织，使组织崩解，组织，使组织崩解，透明质酸酶透明质酸酶能分解细胞间质透明质酸，有利于病变扩能分解细胞间质透明质酸，有利于病变扩散。散。4、致病因子与致病性致病因子与致病性 第30页，此课件共37页哦本菌能由消化道或创伤侵入机体内，引起人类和动物的本菌能由消化道或创伤侵入机体内，引起人类和动物的多种疾病，其中最重要的是多
28、种疾病，其中最重要的是气性坏疽气性坏疽。根据细菌产生外毒。根据细菌产生外毒素的种类差别，可将产气荚膜梭菌分成素的种类差别，可将产气荚膜梭菌分成A、B、C、D、E、F 6个型。个型。nA型：人气性坏疽和食物中毒；型：人气性坏疽和食物中毒；nB型：羔羊痢疾；型：羔羊痢疾；nC型：绵羊猝死，人型：绵羊猝死，人坏死性肠炎坏死性肠炎nD型：牛肠毒血症；型：牛肠毒血症；nE型：犊牛、羔羊肠毒血症。型：犊牛、羔羊肠毒血症。第31页，此课件共37页哦(1)直接涂片镜检：直接涂片镜检：G+大杆菌，并有荚膜大杆菌，并有荚膜;(2)分离培养：接种血平板，有双层溶血环分离培养：接种血平板，有双层溶血环;(3)纯培养：
29、引起牛奶暴烈发酵纯培养：引起牛奶暴烈发酵;(4)动物试验：小鼠、家兔或鸽，出现动物试验：小鼠、家兔或鸽，出现“泡沫肝泡沫肝”;(5)肠毒素检查肠毒素检查：取取回肠内容物回肠内容物，加适量灭菌生理盐水稀释，加适量灭菌生理盐水稀释，经离心沉淀后取上清液分成两份，一份不加热，一份经离心沉淀后取上清液分成两份，一份不加热，一份加热，分别静脉注射家兔或小鼠。加热，分别静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在如有毒素存在，不加，不加热组动物常于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死热组动物常于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死亡。亡。5、微生物学诊断微生物学诊断第32页，此课件共37页哦二二 破伤风梭菌（破伤
30、风梭菌（Cl.tetaniCl.tetani）破伤风梭菌破伤风梭菌大量存在于人和动物肠道中，大量存在于人和动物肠道中，由粪便污染土壤，由粪便污染土壤，是引起人畜破伤风的是引起人畜破伤风的病原病原,经伤口感染引起疾病。经伤口感染引起疾病。具有芽孢，其芽孢广泛存在于各类土壤具有芽孢，其芽孢广泛存在于各类土壤中。本病以中。本病以骨骼肌发生强直性痉挛骨骼肌发生强直性痉挛的症的症状为特征，此菌也称为强直梭菌。状为特征，此菌也称为强直梭菌。第33页，此课件共37页哦破伤风梭菌菌体细长，长破伤风梭菌菌体细长，长4-8m，宽，宽0.3-0.5m，周身鞭毛，芽胞呈圆，周身鞭毛，芽胞呈圆形，形，在动物体内外均能形
31、成，在动物体内外均能形成，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状鼓槌状，是本菌形态上的特征。是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，形成芽胞的菌体易转为革兰氏繁殖体为革兰氏阳性，形成芽胞的菌体易转为革兰氏阴性阴性。1、形态学特性、形态学特性 第34页，此课件共37页哦 2、培养特性培养特性破伤风梭菌专性厌氧，最适生长温度为破伤风梭菌专性厌氧，最适生长温度为37pH7.07.5；普通琼脂平板普通琼脂平板：24-48h形成直径形成直径1mm以上的不以上的不规则菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状，易在规则菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状，易在培养基表面迁徒扩散培养基
32、表面迁徒扩散;血液琼脂平板血液琼脂平板：明显溶血环；：明显溶血环；疱肉培养基疱肉培养基：肉汤浑浊，：肉汤浑浊，肉渣部分被消化肉渣部分被消化，微变，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。及硫化氢。第35页，此课件共37页哦3、生化特性与抵抗力生化特性与抵抗力生化特性生化特性一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。不能还原硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。抵抗力抵抗力本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似
33、，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40-50min。对青霉素敏感对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。磺胺类有抑菌作用。第36页，此课件共37页哦破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中；自然条件下，其易感性为：破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中；自然条件下，其易感性为：马猪、牛、羊、犬，人也易感，禽类及变温动物不易感。此马猪、牛、羊、犬，人也易感，禽类及变温动物不易感。此菌产生两种毒素菌产生两种毒素破伤风痉挛毒素破伤风痉挛毒素：引起神经兴奋性异常增高和骨骼肌痉挛。引起神经兴奋性异常增高和骨骼肌痉挛。是一种神经是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成，不耐热，分子量毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成，不耐热，分子量15万，万，可被肠可被肠道蛋白酶破坏道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。破伤风毒素的毒性非常强，故口服毒素不起作用。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素。烈，仅次于肉毒毒素。破伤风溶血素破伤风溶血素：不耐热，对氧敏感，可溶解马及家兔的红细胞，与：不耐热，对氧敏感，可溶解马及家兔的红细胞，与致病性无关。致病性无关。4、致病性、致病性第37页，此课件共37页哦