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1、实验一生物组织中还原糖脂肪蛋白质的鉴定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望教学内容：教学内容：知识点知识点可溶性还原可溶性还原糖糖 脂肪脂肪 蛋白质蛋白质实验原理实验原理 幻灯片幻灯片实验步骤实验步骤 幻灯片幻灯片7 幻灯片幻灯片8 幻灯片幻灯片9成功关键成功关键注意事项注意事项 幻灯片幻灯片10 幻灯片幻灯片11 幻灯片幻灯片12 幻灯片幻灯片13讨论练习讨论练习 幻灯片幻灯片14幻灯片幻灯片16作业作业 幻灯片幻灯片19一、实验原理一、实验原理1.
2、可溶性还原糖可溶性还原糖 生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖及不能溶解的糖。斐林试剂为及不能溶解的糖。斐林试剂为0.1g/mL的的NaOH和和 0.05g/m
3、L的的CuSO配制而成的淡蓝色配制而成的淡蓝色Cu(OH)2沉沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件下件下Cu(OH)2被还原为砖红色的被还原为砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为:-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O砖红色砖红色2.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 苏丹苏丹(苏丹苏丹)为一种脂肪染色剂为一种脂肪染色剂(易溶解于易溶解于酒精，不溶解于水酒精，不溶解于水)。苏丹。苏丹染液遇脂肪的颜色反染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹应为橘黄色，苏丹染液遇脂肪的颜色反应为红染液遇
4、脂肪的颜色反应为红色。其反应式为色。其反应式为:脂肪脂肪苏丹苏丹（苏丹（苏丹）橘黄色橘黄色（红色红色）3.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为缩脲。反应式为:双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相络化物。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应：似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应：-CONH-（类似双缩尿（类似双缩尿H2NOC-NH-CONH2结构）结构）酸性条
5、件下与酸性条件下与Cu2+作用形成作用形成紫色络合物紫色络合物双缩尿反应双缩尿反应选材：含糖量较高的选材：含糖量较高的白色或近于白色白色或近于白色，苹果、梨最好，苹果、梨最好。二、实验步骤与现象二、实验步骤与现象1.可溶性还原糖可溶性还原糖 制备组织样液：制备组织样液：制浆：去皮、切块、研磨制浆：去皮、切块、研磨过滤：（用单层纱布）过滤：（用单层纱布）取液：取液：（mL）显色反应显色反应现象：现象：2.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡取材：花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片），去皮，将子叶削成薄片制片：制片：选取最薄的薄片移至载玻片中央选取最薄的薄片移至载玻片中央在薄片上滴加苏
6、丹在薄片上滴加苏丹染液染液23滴，染色滴，染色min滴加体积分数为滴加体积分数为50%的酒精溶液的酒精溶液12滴，洗去浮色滴，洗去浮色吸去余液，滴吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片观察：观察：先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察结果：结果：有被染成有被染成橘黄色橘黄色的脂肪微粒的脂肪微粒3.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定选材与制备选材与制备组织样液：组织样液：黄豆组织样液（或鸡蛋白稀释液）黄豆组织样液（或鸡蛋白稀释液）黄豆浸泡黄豆浸泡去皮去皮切片切片研磨研磨过滤过滤滤液滤液 显显色色反反应应现象：现象：无色无色紫色或紫红色紫
7、色或紫红色三、实验成功的关键与注意事项：三、实验成功的关键与注意事项：1.实验成功的关键在于实验材料的选择：实验成功的关键在于实验材料的选择：在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织材料是含糖量较高的生物组织(或器官或器官)，而且组织的颜色，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。反应的明显程度依次为苹果
8、、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜
9、色做比较，这样可增强说服力。液的颜色做比较，这样可增强说服力。(1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)和乙液和乙液(0.05g/mL的的CuSO溶液溶液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，分别配制、储存，使用时，再临时配制，将将45滴乙液滴入滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。将甲液和乙液分别加入组织样液中。(2)鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意
10、试管底部夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。溶液溢出。A.可溶性还原糖可溶性还原糖 2.注意事项：注意事项：(3)在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡料，必须提前浸泡34小时，浸泡时间短了，不容易小时，浸泡时间短了，
11、不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。成形，切片要尽可能的薄。(4)染色后一定要用染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影响实验效果），观察时找最薄处最好只有响实验效果），观察时找最薄处最好只有12层细胞。层细胞。B.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 (5)在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发材料，必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲
12、试剂发生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。试管不易洗刷干净。(6)双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂A(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)，造成碱性的反应环境，造成碱性的反应环境，再加试剂再加试剂B(0.01g/mL的的CuSO溶液溶液)。C.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定例1将小麦种子分别置于20和30培养箱中培养4天，依次取等量的萌发种子分别制成提取液和提取液。取3支试管甲、乙、丙，分别加入等量的淀粉液，然后按下图加入等量的提取液和蒸馏水，45水浴保温5分钟，立即在3支试管中加入等量斐林试剂
13、并煮沸2分钟，摇匀观察试管中颜色。结果是()A甲呈蓝色，乙呈砖红色，丙呈无色B甲呈无色，乙呈砖红色，丙呈蓝色C甲、乙皆呈蓝色，丙呈砖红色D甲呈浅砖红色，乙呈砖红色，丙呈蓝色 各种可供实验的材料各种可供实验的材料梨梨 黄桃黄桃 胡萝卜胡萝卜 黄豆黄豆 花生种子花生种子 小麦种子小麦种子 其中适合于鉴定糖的是其中适合于鉴定糖的是 ，理由是梨的组织，理由是梨的组织细胞细胞 ，你打算，你打算用什么试剂鉴定用什么试剂鉴定?。小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这是因为是因为 ，你打算用什么试剂鉴定你打算用什么试剂鉴定?.适合于鉴定蛋白质的是适合于鉴定蛋白质的
14、是 ，理由是，理由是 ，鉴定所用的试剂是，鉴定所用的试剂是 。3.讨论讨论:做生物组织中可溶性还原糖、脂肪、做生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验时，需要根据实验需要选择不同蛋白质的鉴定实验时，需要根据实验需要选择不同的实验材料。清根据下表所列各种材料回答问题：的实验材料。清根据下表所列各种材料回答问题：梨梨 颜色为白色，并且糖含量较高颜色为白色，并且糖含量较高 斐林试剂或班氏试剂斐林试剂或班氏试剂脂肪含量不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用苏丹用苏丹或苏丹或苏丹试剂试剂黄豆和花生黄豆和花生 蛋白质含量高蛋白质含量高 双缩脲试剂双缩脲试剂1、某些单子叶植物
15、，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大量某些单子叶植物，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大量的可溶性还原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实验的可溶性还原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实验材料，原因是：材料，原因是：这些叶子的颜色较深，对还原性这些叶子的颜色较深，对还原性糖与斐林试剂的颜色反应起遮蔽作用糖与斐林试剂的颜色反应起遮蔽作用、下列哪组试剂在使用过程中，必须加热：、下列哪组试剂在使用过程中，必须加热：A.斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中B.苏丹苏丹染液在鉴定动物组织中的脂肪时染液在鉴定动物组织中的脂肪时C.双缩脲试剂鉴定蛋白质时双缩脲试剂鉴定蛋白质时D.碘化钾溶液鉴定淀粉
16、时碘化钾溶液鉴定淀粉时（）（）课堂课堂练习练习:、某学生在鉴定脂肪的实验中，在显微镜下观、某学生在鉴定脂肪的实验中，在显微镜下观察花生子叶切片，当转动细调节器时，有一部分细胞察花生子叶切片，当转动细调节器时，有一部分细胞看的清楚，另一部分较模糊，这是由于看的清楚，另一部分较模糊，这是由于（）A.反光镜未调节好反光镜未调节好B.标本切的厚薄不均标本切的厚薄不均C.细调节器未调节好细调节器未调节好D.显微镜物镜损坏显微镜物镜损坏、苏丹、苏丹溶液的配制的方法是：溶液的配制的方法是：称取称取0.1g苏苏丹丹干粉，溶于干粉，溶于100mL酒精的体积分数为酒精的体积分数为95溶液溶液中，待全部溶解后再使用
17、，为什么用酒精而不用蒸中，待全部溶解后再使用，为什么用酒精而不用蒸馏水？馏水？苏丹苏丹染液易溶解于酒精中染液易溶解于酒精中，不易溶解于水。，不易溶解于水。、鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的正确做法是、鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的正确做法是A先加先加A液，混合后再加液，混合后再加B液摇匀观察（）液摇匀观察（）B先加先加B液，混合后再加液，混合后再加A液摇匀观察液摇匀观察CA、B混合后加入，摇匀观察混合后加入，摇匀观察DA、B液同时加入样液，摇匀后观察液同时加入样液，摇匀后观察、在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴、在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择中，错误
18、的是（）定实验中，对实验材料的选择中，错误的是（）A、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可用于进行可溶性还原糖的鉴定的糖且近于白色，因此可用于进行可溶性还原糖的鉴定B、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，适用于脂肪鉴定、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，适用于脂肪鉴定C、大豆种子蛋白质含量高，可用于蛋白质的鉴定、大豆种子蛋白质含量高，可用于蛋白质的鉴定D、鸡蛋清含蛋白质多，是蛋白质鉴定的理想材料鸡蛋清含蛋白质多，是蛋白质鉴定的理想材料五、作业：五、作业：1将可溶性糖、脂肪、蛋白质鉴定原理及结沦填写将可溶性糖、脂肪、蛋白质鉴定原理及结沦填
19、写在在实验报告册实验报告册上。上。2斐林试剂主要用来鉴定可溶性还原糖，其主要成斐林试剂主要用来鉴定可溶性还原糖，其主要成分为分为NaOH和和CuSO4的混合液，用你已有的化学知识的混合液，用你已有的化学知识判断，这两种物质混合以后能发生了什么化学反应判断，这两种物质混合以后能发生了什么化学反应?，请解释为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久：，请解释为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久：。通过查有关资料或请教化学老师：斐林试剂中的什么成通过查有关资料或请教化学老师：斐林试剂中的什么成分在加热条件下与还原糖发生了什么化学反应分在加热条件下与还原糖发生了什么化学反应?砖红色砖红色的沉淀物是什么的沉淀物是什么?，生成了蓝色的生成了蓝色的Cu(OH)2沉淀的悬浊液沉淀的悬浊液时间一长，时间一长，Cu(OH)2沉淀在溶液底部无法发生反应沉淀在溶液底部无法发生反应 发生了氧化还原反应，生成了砖发生了氧化还原反应，生成了砖红色的红色的Cu2O沉淀和某种糖的有机酸沉淀和某种糖的有机酸