《专题二 微生物的实验室培养.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《专题二 微生物的实验室培养.ppt（116页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、专题二 微生物的实验室培养 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用微微生生物物的的分分类类原生生物界原生生物界原核生物界原核生物界真菌界真菌界变形虫、草履虫、衣藻变形虫、草履虫、衣藻酵母菌、青霉菌、根霉菌酵母菌、青霉菌、根霉菌细细 菌菌放线菌放线菌 蓝蓝 藻藻支原体支原体衣原体衣原体病病 毒毒无细胞结构无细胞结构微生物基础知识微生物基础知识特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数
2、十分微小.通常要通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合不能进行光合作用作用.微生物包含了除微生物包含了除植物界植物界和和动物界动物界以外的所有生以外的所有生物物无细胞结构无细胞结构原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞细菌的外形与大小细菌的外形与大小图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态球菌球菌（coccus)杆菌杆菌（bacilus)螺旋菌螺旋菌螺旋菌螺旋菌观察细菌常用光学显微镜观察细菌常用光学显微镜,以微米以微米(1um=1/1000mm)(1
3、um=1/1000mm)作为作为测量它们大小的单位。肉眼的最小分辨率为测量它们大小的单位。肉眼的最小分辨率为0.2mm,0.2mm,观察观察细菌要用光学显微镜放大几百倍到上千倍才能看到。细菌要用光学显微镜放大几百倍到上千倍才能看到。细菌的结构细菌的结构细胞质细胞质核区核区质粒质粒鞭毛鞭毛细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜液泡液泡荚膜荚膜菌毛菌毛细细菌菌的的结结构构基本结构基本结构细胞壁：肽聚糖，保护细胞壁：肽聚糖，保护细胞膜细胞膜细胞质细胞质(核糖体、质粒核糖体、质粒:控制抗控制抗药性固氮抗生素形成药性固氮抗生素形成)核区：未成形的细胞核核区：未成形的细胞核(拟核拟核)特殊结构特殊结构荚膜：粘性荚膜：粘
4、性 ，保护作用，保护作用 鞭毛：运动器官鞭毛：运动器官芽孢芽孢 ：细菌休眠体，对：细菌休眠体，对恶劣的环境有抵抗力恶劣的环境有抵抗力 细细 菌菌 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽风飘散。当环境适宜（如温
5、度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢又可以萌发，形成一个细菌.菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌细菌的菌落特征因落特征因种而异种而异 如：无鞭毛如：无鞭毛的的球菌，常形成球菌，常形成较小较厚边缘较小较厚边缘较整齐的菌落，较整齐的菌落，有鞭毛有鞭毛细菌形细菌形成大而扁平、成大而扁平、边缘波浪或锯边缘波浪或锯齿状菌落齿状菌落放线菌放线
6、菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用:病毒的结构病毒的结构病毒病毒 SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉1.1.何为培养基？何
7、为培养基？3.3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。请举例说明。阅读教材阅读教材P14P14 1515相关内容，回答以下问题：相关内容，回答以下问题：2.2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？些种类、配制特点及其应用？（一）培养基（一）培养基一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混
8、合营养液。专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途n根据根据物理状态物理状态分分n固体培养基固体培养基纯化，增菌纯化，增菌n半固体培养基半固体培养基动力检测，保种动力检测，保种n液体培养基液体培养基增菌增菌n根据根据化学成分化学成分分分n合成培养基合成培养基成分明确成分明确,常用于分类常用于分类,鉴定鉴定n天然培养基天然培养基成分不明确成分不明确,常用于工业生产常用于工业生产n根据根据功能功能分分n选择培养基选择培养基用来将某种或某类微生物从混杂的微用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基生物群体中分离出来的培养基在培养基中加入某种化在
9、培养基中加入某种化学物质学物质,以抑制不需要的微生物的生长以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的促进所需要的微生物的生长微生物的生长,n如：加高浓度的食盐如：加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长抑制多种细菌生长,分离到分离到金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌n鉴别培养基鉴别培养基在培养基中加入某种在培养基中加入某种指示剂或化学药指示剂或化学药品品,用以鉴别不同种类的微生物用以鉴别不同种类的微生物,n如：伊红和美蓝如：伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合和大肠杆菌的代谢产物结合,使使菌落呈菌落呈深紫色深紫色,并带有金属光泽并带有金属光泽,可以用来鉴别大可以用来鉴别大肠杆菌肠杆菌基础培养基基础培养基含有一
10、般微生物生长繁殖所需的基本营含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）选择培养基n加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌n加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌n不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌分离固氮菌n不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物分离自养型微生物n加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞液体培养基液体培养基表面
11、生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂半固体培养基半固体培养基无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动？是否运动？)【例例】以下是单克隆抗体制备流程示意图：以下是单克隆抗体制备流程示意图：根据培养基的根据培养基的_分类，图中分类，图中HATHAT培养基培养基属于属于_培养基培养基选择选择用途用途 2.2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方的培养基配方 (参考教材附录内容参考教材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪
12、种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营特殊营养物质养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物而自身不能合成的化合物,如维生素、某如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧二氧化碳化碳、渗透压渗透压等的要求。等的要求。碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮
13、源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等等牛肉膏蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N的代谢产物的代谢产物合成微生物的细胞物质和一些代谢产物合成微生物的细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源微生物生长不可缺少的微生物生长不可缺少的微量有机物微量有机物如：如：维维生素、氨基酸、碱基生素、氨基酸、碱基等等 生长因子：生长因子：牛肉膏当中含有牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、
14、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。有机酸类、矿物质类及维生素类。的水溶性物质。的水溶性物质。牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供蛋白胨主要提供氮源氮源和和维生素维生素。氮源、能源、生长因子氮源、能源、生长因子碳源、能源、生长因子碳源、能源、生长因子培养基配置原则培养基配置原则目的明确目的明确营养协调营养协调理化条件适宜理化条件适宜经济节约经济节约根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。培养基中各营
15、养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累如：如：pH练习练习1 1（多项选择）（多项选择）n1 1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是nA A 光合细菌光合细菌 B B 根瘤菌根瘤菌 nC C 硝化细菌硝化细菌 D D 乳酸菌乳酸菌n2 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是是nA A 糖、有机酸等糖、有机酸等 B B 二氧化碳、碳酸盐二氧化碳、碳酸盐nC C 蛋白质蛋白质 D D 无机氮化物无机氮化物n3 3、下列叙述不正确的是、下列叙述不正确的是nA A 培养基
16、是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质nB B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同nC C 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌的单个细菌A.CA.CA.CA.CB.C.B.C.1.1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2.2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？4.4.请说出干热灭菌法和高压蒸
17、汽灭菌法的操作请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。步骤。（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。无无论是随后将要学到的论是随后将要学到的倒平板倒平板、平板平板划线划线操作，还是操作，还是平板稀释涂布法平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到其操作中的每一步都需要做到“无无菌菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。地培养微生物。二、无菌技术二、无菌技术（
18、1 1）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手，进行，进行清洁和消清洁和消毒毒。（2 2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基器皿、接种用具和培养基等器具进等器具进行灭菌。行灭菌。（3 3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯酒精灯火焰附近火焰附近进行。进行。（4 4）实验操作时应避免已经）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具灭菌处理的材料用具与周围的物与周围的物品相接触。品相接触。（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的
19、过程。区分为致病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low-level Disinfectionlevel Disinfection）三种方式。）三种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微
20、微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min 巴氏消毒法：巴氏消毒法：707075 75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min。如牛奶的消毒如牛奶的消毒 化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精进行皮肤消毒酒精进行皮肤消毒;用氯气消毒水源等用氯气消毒水源等 紫外线消毒紫外线消毒
21、(1)消毒的方法消毒的方法3 3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。表面或内部一部分对人体有害的微生物。(不包括不包括芽孢和孢子芽孢和孢子)灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：干热灭菌：160160170 170 下加热下加热1 12h2h。高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持151530min.30min.(2)灭菌的方法灭菌的方法概念：使用强烈的理化概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有因素杀死物体内外所有的微生物，包括
22、芽孢和的微生物，包括芽孢和孢子。孢子。a.灼烧灭菌灼烧灭菌微生物的接种工具微生物的接种工具(接种环、接种针接种环、接种针)或其他金属用或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧具直接在火焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围注意适用范围b.干热灭菌干热灭菌 c.160170；12h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器，玻璃器，金属用具金属用具)c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121 e.15-30min通常用于培养基的灭菌，通常用于培养基的灭菌，实验器具实验器具煮沸煮沸消毒消毒法法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂（化学药剂（70%酒精等）酒精等）紫外线紫外线针对不
23、耐高温的液体针对不耐高温的液体接种室、超净工作台接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法灼烧法干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）接种工具（接种环等）吸管吸管实验操作者的双手实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养皿等玻璃器皿培养基培养基1 1、消毒方法、消毒方法2、灭菌方法、灭菌方法干热灭菌干热灭菌思考思考:1)消毒和消毒和灭菌有何不同？菌有何不同？2)为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?消毒消毒灭菌灭菌条件条件温和温和强烈强烈作用作用范围范围物体表面或内部一部物体表面或内部一部分分,不包括芽孢和孢子不包括芽
24、孢和孢子物体内外所有微生物物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子营养成分不被破坏营养成分不被破坏1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答
25、：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2O O100ml100ml右表是某微生物培养右表是某微生物培养基成分，请据此回答：基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可）右表培养基可培养的微生物类型是培养的微生物类型是 。（2
26、 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物（3 3）若除去成分）若除去成分，加（，加（CH2OCH2O），），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是分装前，要进行是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加）若右表培养基用于菌种鉴
27、定，应该增加的成分是的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）三三.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存实验操作实验操作(一一)制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.
28、0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL1.1.计算：计算：培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸
29、。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至定溶至100mL100mL。4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口：操作步骤操作步骤 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。5灭菌灭菌:将将50ml培养基用玻棒转移至三角培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸
30、，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为、温度为121，灭菌，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160170 下灭下灭菌菌2h。6倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接后观察平板，无杂菌污染才可用来接种种.7无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中培的温室中培养养2448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是
31、否彻底。倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的将灭过菌的培养皿放在火培养皿放在火焰旁的桌面上，焰旁的桌面上，右手拿装有培右手拿装有培养基的锥形瓶，养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。左手拨出棉塞。1234倒平板技术倒平板技术2.右手拿锥形右手拿锥形瓶，使瓶口迅瓶，使瓶口迅速通过火焰。速通过火焰。1234倒平板技术倒平板技术12343.用左手的拇指用左手的拇指和食指将培养皿和食指将培养皿打开一条稍大于打开一条稍大于瓶口的缝隙，右瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的手将锥形瓶中的培养基培养基(约约1020mL)倒入培养倒入培养皿，左手立即盖皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。上培养皿的皿盖。倒平板技术倒平板技术12344.
32、等待平板冷等待平板冷却凝固，大约却凝固，大约需需510min。然后，将平板然后，将平板倒过来放置，倒过来放置，使皿盖在下，使皿盖在下，皿底在上。皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。板了。问题讨论问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？答
33、：通过灼烧灭菌，防止瓶答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位
34、，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：空气中的微生物可能答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培生，因此最好不要用这个平板培养微生物。养微生物。【例例2 2】进行细菌接种培养实验时，以下哪个进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？操作步骤是非必要的？A A双手带上胶手套双手带上胶手套 B B接种前后都灼烧接种环接种前后都灼烧接种环 C C接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面 试管口试管口 D D要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌要丢弃
35、带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌 或加热灭菌或加热灭菌（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：1.1.平板划线法平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后可以分离到由一个在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称体称菌落菌落。平板划线的操作方法平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不
36、均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为
37、什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌
38、种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端
39、细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法将菌液进行将菌液进行一系列的梯度稀释一系列的梯度稀释，然后将，然后将不同稀释度的菌液分别不同稀释度的菌液分别涂布到涂布到琼脂固体琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成
40、单个细胞，从而能在培养基表被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成面形成单个的菌落单个的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.将分别盛有将分别盛有9mL水的水的6支试管灭菌，支试管灭菌，并按并按101106的顺序编号。的顺序编号。2.用移液管吸取用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3.从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注稀释液，注入入102倍稀释的试管中，重复第倍稀释的试管中，重复第2步的操作。步的操作。依次类推
41、，直到完成最后一支试管的稀释。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：注意：移液管需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口和移液管离火焰12cm处处.涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在
42、酒精灯火焰周围等等。吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论问题讨论微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌状、
43、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。的变化。随着时间的延长
44、、菌落的不断生随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。长，使菌落不断增大。这一步的要求主要这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。是培养学生良好的科学态度与习惯。4.4.如果在培养基上观察到不如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的同形态的菌落，请分析其可能的原因。原因。无菌操作未达到要求：可能无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。养的过程中受到了污染。1.1.试管低温临时保藏试管低温临时保藏 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，将菌种接种到试管的固
45、体斜面培养基上，培养成菌落后，置于培养成菌落后，置于4 4O OC C的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6个月要重新接种培养后再保存）。个月要重新接种培养后再保存）。2.2.甘油管长期保藏甘油管长期保藏 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高压灭菌。的甘油，高压灭菌。将将1mL1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于置于2020O OC C的冷冻箱中保存。的冷冻箱中保存。五、课题延伸五、课题延伸-菌种的保藏菌种的保藏本课题知识小结本课题知识小结:2011年新课标年新课标39.生物生物选修选修1：生物技术实践：
46、生物技术实践（15分）分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效染。某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油降解原油的的菌菌株株。回答问题：。回答问题：（1）在筛选过程中，应将）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液土壤样品稀释液接种于以接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。培养基。（2）纯化菌种时，）纯化菌种时，为了得到单菌落为了得到单菌落，常采用的，常采用的接种方法接种方法有两种，即有两种，即_和和_。（3）为了筛
47、选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，大小，分解圈大分解圈大说明该菌株的降解能力说明该菌株的降解能力_。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法灭菌方法有灼烧灭菌、有灼烧灭菌、_和和_。无菌无菌技术技术要求实验操作应在酒精灯要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。围环境中微生物的污染。原油原油选择选择平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法强强干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌火焰火焰39.39.【答案答案】（1 1）原油）
48、原油 选择选择 （2 2）平板划）平板划线法线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 （3 3）强）强(1)(1)（4 4）干）干热灭菌热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 火焰火焰【解析解析】该同学筛选能降解原油的菌株，可该同学筛选能降解原油的菌株，可以将样品稀释液置于以原油为唯一碳源的固体以将样品稀释液置于以原油为唯一碳源的固体培养基中培养，该培养基功能上属于选择培养培养基中培养，该培养基功能上属于选择培养基。基。菌株的接种方法，常用的有两种：平板菌株的接种方法，常用的有两种：平板划线法和稀释涂布平板法。划线法和稀释涂布平板法。菌株分解周围的菌株分解周围的营养物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株营养
49、物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株的降解能力强。的降解能力强。实验室常用的灭菌方法有灼实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。n2010年海南年海南25（18分）分）选修模修模块1：生物技：生物技术实践践n葡萄葡萄发酵可酵可产生葡萄酒，生葡萄酒，请利用相关的知利用相关的知识回答回答问题：n（1）利用葡萄制作葡萄酒的）利用葡萄制作葡萄酒的过程中，程中，发挥作用的微生物是作用的微生物
50、是。n（2）该微生物通微生物通过无氧呼吸可分解，无氧呼吸可分解，产生的生的终产物物是和。是和。n（3）甲、乙、丙三位同学将葡萄榨成汁后分）甲、乙、丙三位同学将葡萄榨成汁后分别装入相装入相应的的发酵酵瓶中，在温度等适宜的条件下瓶中，在温度等适宜的条件下进行行发酵，如酵，如图所示。所示。发酵酵过程中，程中，每隔一段每隔一段时间均需排气一次。据均需排气一次。据图分析，甲和丙同学的操作有分析，甲和丙同学的操作有误，其中甲同学的其中甲同学的错误是是 ，导致致发酵中出酵中出现的的主要异常主要异常现象是象是 。n丙同学的丙同学的错误是是 ，导致致发酵中出酵中出现的主要异常的主要异常现象是。上述象是。上述发酵