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1、第六次实验第六次实验第六次实验第六次实验 抗生素抗菌谱抗生素抗菌谱抗生素抗菌谱抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定及微生物的耐药性的测定及微生物的耐药性的测定及微生物的耐药性的测定实验目的和内容实验目的和内容目的：目的：目的：目的：1 1 1 1、学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗、学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗、学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗、学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。菌谱。菌谱。菌谱。2 2 2 2、学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素、学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素、学习微生物耐药性的测定方法，
2、了解微生物对抗生素、学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策耐药性产生的原因及对策耐药性产生的原因及对策耐药性产生的原因及对策内容：内容：内容：内容：vv抗生素的抗菌谱确定抗生素的抗菌谱确定抗生素的抗菌谱确定抗生素的抗菌谱确定vv微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定实验一实验一实验一实验一 抗生素抗菌谱的测定抗生素抗菌谱的测定抗生素抗菌谱的测定抗生素抗菌谱的测定抗生素抗生素是一类由微生物或其它生物生命活动中是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能
3、抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱。如各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱。如青霉素一般对青霉素一般对G+细菌有抗性。细菌有抗性。实验原理实验原理不同抗生素抑制细菌生长的机制不同，如不同抗生素抑制细菌生长的机制不同，如青霉素抑制细菌细胞壁的合成，而四环素青霉素抑制细菌细胞壁的合成，而四环素抑制细菌蛋白质的合成。抑制细菌蛋白质的合成。实验材料实验材料菌种：菌种：各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。
4、各种不同来源的细菌。培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：供试抗生素：四环素四环素四环素四环素（母液浓度母液浓度母液浓度母液浓度50mg/mL，溶于水溶于水)设备与用具：设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。实验步骤实验步骤1 1 1 1 倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨25mg/L25mg/L25mg/L25mg/L四环素）四环素）四环素）四环素）平板平板平板平板2 2 2 2 将平板将平板将平板将平板(皿底）划分
5、为皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为6 6 6 6等份，每一等份内标明一种细等份，每一等份内标明一种细等份，每一等份内标明一种细等份，每一等份内标明一种细菌的名称；菌的名称；菌的名称；菌的名称；3 3 3 3 用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域4 4 4 4 将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置37373737倒置培养倒置培养倒置培养倒置培养24h-48h24h-48h24h-48h24h-48h。5 5 5
6、 5 记录细菌的生长情况，根据记录细菌的生长情况，根据记录细菌的生长情况，根据记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况细菌的生长情况细菌的生长情况细菌的生长情况，可初步，可初步，可初步，可初步确定卡那霉素的抗菌谱。确定卡那霉素的抗菌谱。确定卡那霉素的抗菌谱。确定卡那霉素的抗菌谱。实验结果实验结果 记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况实验二实验二 微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定耐药性耐药性(antibiotic resistance)即抗药性即抗药性,指指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用微
7、生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。显下降。实验原理实验原理耐药性产生的原因主要有：产生一种使药物耐药性产生的原因主要有：产生一种使药物失去活性的酶；把药物作用的靶位加以修饰失去活性的酶；把药物作用的靶位加以修饰和改变；使药物不能透过细胞膜；通过主动和改变；使药物不能透过细胞膜；通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外；外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外；实验材料实验材料菌种：菌种：大肠杆菌。大肠杆菌。大肠杆菌。大肠杆菌。培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培
8、养基牛肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：供试抗生素：庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮观霉素和链霉素、无菌水观霉素和链霉素、无菌水观霉素和链霉素、无菌水观霉素和链霉素、无菌水设备与用具：设备与用具：恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。滤纸片法测定微生物的耐药性滤纸片法测定微生物的耐药性所需浓度抗生素溶液配制所需浓度抗生素溶液配制A A A A 氨苄青霉素（氨苄青
9、霉素（氨苄青霉素（氨苄青霉素（50g/mL)50g/mL)，B B B B 卡那霉素（卡那霉素（卡那霉素（卡那霉素（50g/mL)50g/mL)，C C C C 四环素（四环素（四环素（四环素（5g/mL)5g/mL)，D D D D 氯霉素（氯霉素（氯霉素（氯霉素（50g/mL)50g/mL)，E E E E 链霉素（链霉素（链霉素（链霉素（50g/mL50g/mL)，F F F F 壮观霉素壮观霉素壮观霉素壮观霉素(50g/mL)50g/mL)，实验步骤实验步骤1 1 1 1 倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板2 2 2 2 取取取取0.2ml0.2m
10、l0.2ml0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。3 3 3 3 将平板将平板将平板将平板(皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为6 6 6 6等份，每一等份内标明一种抗等份，每一等份内标明一种抗等份，每一等份内标明一种抗等份，每一等份内标明一种抗生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。在平板的每一等份中。在平板的每
11、一等份中。在平板的每一等份中。4 4 4 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置37373737倒置培养倒置培养倒置培养倒置培养24-48h24-48h24-48h24-48h。5 5 5 5 测量并记录抑菌圈的直径，抑测量并记录抑菌圈的直径，抑测量并记录抑菌圈的直径，抑测量并记录抑菌圈的直径，抑(杀杀杀杀)菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够反映抗生素抑反映抗生素抑反映抗生素抑反映抗生素抑(杀杀杀杀)菌能力的大小；根据其直径的大小，菌能力的大小；根据其直径的大小，菌能力的大小；根据其直径的大小，
12、菌能力的大小；根据其直径的大小，可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况(或或或或敏感性情况敏感性情况敏感性情况敏感性情况)()()()(自带尺子）自带尺子）自带尺子）自带尺子）氨苄青霉素氨苄青霉素卡那霉素卡那霉素四环素四环素庆大霉素庆大霉素链霉素链霉素 壮观霉素壮观霉素无菌无菌水水抗生素抗生素抑（杀）菌圈直抑（杀）菌圈直径径/mm抗生素抗生素抑（杀）菌圈直抑（杀）菌圈直径径/mm氨苄青霉素氨苄青霉素庆大霉素庆大霉素庆大霉素庆大霉素卡那霉素卡那霉素链霉素链霉素链霉素链霉素四环素四环素四环素四环素壮观霉素壮观霉素壮观霉素壮观霉素实验结果实验结果思思 考考 题题1 1、什么叫抗生素？、什么叫抗生素？什么是耐药性？什么是耐药性？2、微生物产生耐药性的原因有哪些？、微生物产生耐药性的原因有哪些？