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1、实验十二实验十二 细菌的生理生化反应细菌的生理生化反应v实验目的实验目的v巩固微生物无菌接种技术；巩固微生物无菌接种技术；v证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统；不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统；v掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。微生物的生理生化反应v微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应化反应v把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生理现象和检查代谢产物，
2、可以了解微生物的代谢理现象和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和代谢的特点过程和代谢的特点v由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生和代谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生物分类鉴定的重要指标之一。物分类鉴定的重要指标之一。微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）将大分子物质的分解过程可以通过观察细将大分子物质的分解过程可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。菌菌落周围的物质变化来证实。器材器材1菌种菌种：土壤分离菌株。2.培养基培养基：固体淀粉培养基，明胶培养基试管，
3、石蕊牛奶试管溶液或试剂溶液或试剂：革兰氏染色用卢戈氏碘液仪器或其他用具仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。淀粉水解实验淀粉水解实验淀粉培养基+淀粉培养基+接种+变色圈，水解圈培养培养24h加卢哥氏碘液I-KIv结果：结果：v 有水解圈有水解圈淀粉水解实验阳性，用淀粉水解实验阳性，用 +表示；表示；v 无水解圈无水解圈淀粉水解实验阴性，用淀粉水解实验阴性，用 -表示；表示；明胶液化实验明胶液化实验明胶培养基接种培养培养24h明胶培养基结果观察结果观察 培养1，3，5。在20以下的室温观察生长情况和明胶是否液化。如菌已生长，明胶表面无凹陷且为稳定的凝块则为明胶水解阴性。如明
4、胶凝块部分或全部在20以下变为可流动的液体，则为明胶水解阳性。如菌已生长，明胶末液化，但明胶表面菌苔下出现凹陷小窝(须与末接种的对照管比较，因培养过久的明胶因水分失散也会凹陷)也是轻度水解，按阳性记录。若细菌未生长则或是不在明胶培养基上生长，或是基础培养基不适宜。牛奶分解石蕊牛奶试验石蕊牛奶试验接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌于石蕊牛奶培养基中，置于35培养2448h后观察培养基颜色变化情况。石蕊在酸性条件下为粉红色，碱性为紫色，而被还原时为白色。实验报告实验报告将结果添入下表，“+”表示阳性，“-”表示阴性思考题思考题1你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？2不利用碘液，你怎么证明淀粉水解的存在?3接种后的明胶试管可以在35培养，在培养后你必须做什么才能证明水解的存在？4解释在石蕊牛奶中的石蕊为什么能起到氧化还原指示剂的作用？