细菌检查与防治.pptx

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1、教学目的：掌握临床细菌标本的采集、送检原则,革兰染色法的步骤 熟悉病原菌的检验程序、常用血清学试验的原理 了解细菌学检查在临床诊断中的重要性第1页/共160页教学方法：理论教学重点、难点、关键：病原菌的检验程序第2页/共160页细菌学诊断(bacteriological diagnosis)示踪性检测l形态学检查 l分离培养l生化试验 l血清学鉴定致病力和药敏测定l动物实验l毒力检测l药物敏感试验病原微生物感染的检查法第3页/共160页临床细菌标本的采集、送检原则1.无菌操作:避免人为污染 2.选准部位:根据疾病种类和病程不同,采集不同标本(specimens)如:伤寒 第一周 取血 第二、三

2、周 取大、小便、骨髓第4页/共160页3.早期取材 (1)疾病早期 (2)使用抗菌药物之前,如已用抗生素,应停 用12天 (3)机体免疫因素形成之前 (4)未出现合并或继发感染之前第5页/共160页4.快速送检:大多数细菌低温送检,但奈瑟球菌须30-40保温送检 标本采集的准确性是检查结果可靠性的保证第6页/共160页1、直接涂片镜检n n形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、染色性做初步诊断染色性做初步诊断(一)、病原菌分离鉴定的一般程序：一、形态学检查第7页/共160页(1)不染色标本的检查 主要用于

3、观察病原菌的某些形态特点及运动性 常用的方法有压滴法和悬滴法 如:用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动”n n暗视野检查uu用于检查活菌、螺旋体及其动力用于检查活菌、螺旋体及其动力第8页/共160页(2)染色标本的检查染色单染复染正染负染(negative staining)革兰染色法革兰染色法抗酸染色法抗酸染色法荧光染色荧光染色第9页/共160页单染色:只用一种染料进行染色.可分为:正染:标本着色,背景不着色 负染:标本不着色,背景着色 用于形态的观察,不能鉴别染色性第10页/共160页复染色:用两种或两种以上的染料进行 染色目前常用的有:革兰染色法、抗酸染革兰染色法、抗酸染 色法、荧光染色、

4、特殊色法、荧光染色、特殊染色法染色法既可观察形态结构,又可鉴别染色性第11页/共160页革兰染色法步骤:制片:涂片染色:结晶紫初染1分钟水冲洗碘液媒染1分钟水冲洗95%乙醇脱色30秒左右水冲洗稀释复红复染30秒水冲洗干后油镜下观察干燥固定第12页/共160页 涂 片 干 燥固 定 染 色镜 检第13页/共160页结果:染成紫色称革兰染色阳性 G+染成红色称革兰染色阴性 G-原理:(1)等电点学说 结晶紫为碱性染料(2)化学学说 G+含有核糖核酸镁盐,能与结晶紫形成牢固的复合物(3)通透性学说第14页/共160页 G+G-P I 23 46核糖核酸镁盐 +-通透性 小 大脂质 少 多第15页/共

5、160页意义:(1)鉴别细菌 (2)指导临床用药 (3)了解细菌的致病性第16页/共160页第17页/共160页第18页/共160页第19页/共160页第20页/共160页二、分离培养纯培养：根据不同标本采取不同培养基。分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧克力平板 菌落形态观察:大小、表面、透明度、边缘、高度、色素、溶血等第21页/共160页第22页/共160页三、生化反应：通过检测细菌代谢产物的生化反应鉴定细菌的种类 乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。第23页/共160页四、血清学鉴定:(serological identification)：用已知抗体

6、检测标本中分离得到的病原菌的血清型别，采用玻片凝集法。第24页/共160页原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。纸片扩散法（Kirby-Bauer法）五、药敏试验：第25页/共160页 抑菌圈 或抑菌环纸片扩散法纸片扩散法第26页/共160页原理：聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入100l100l浓度为10105 5 CFU/ml

7、CFU/ml的菌液，盖上盖板，3535161620h20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSICLSI标准判断其敏感和耐药。再取0.01ml0.01ml容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经3535过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死99.999.9原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)(MBC)。微量液体稀释法(microdilution test)第27页/共160页 用微量加样器接种100l100l 到9696孔中，盖上盖板。同时作阳性、阴性对照。手工看浊度或仪器自动 判读。按照CLSI标准

8、报 告细菌对某抗菌药物为 敏感、耐药和中介。第28页/共160页原理：E试条是一条5mm50mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。E-TEST第29页/共160页 孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交 处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC)。第30页/共160页六、细菌成分的

9、检测(detection of bacterial antigens)：目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测 如:协同凝集试验、间接凝集试验、荧光抗体法、酶免疫法、核酸杂交、聚合酶链反应等 第31页/共160页七、检测细菌相应抗体 均为免疫学方法 经典方法如:凝集试验、沉淀反应、补体结合试验 现代快速方法主要是免疫标记技术 通常采用取双份血清，其间间隔12周。后一份血清抗体效价比前一份升高4倍以上有诊断意义。第32页/共160页第33页/共160页第34页/共160页细菌感染的实验诊断细菌感染的实验诊断第35页/共160页病原微生物感染的防治原则 微生物感染所导致的感染性疾病的控制由预防和治疗两

10、方面组成预防:对病原微生物传播的各个环节进 行控制治疗:是通过抗微生物药物和新医疗技 术来控制传染病的扩散和发展第36页/共160页病原微生物感染的防治原则 特异性免疫的分类特异性免疫的分类n n自然免疫n n人工免疫uu自然自然主动主动免疫：隐性或显性感染免疫：隐性或显性感染uu自然自然被动被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体uu人工人工主动主动免疫：接种疫苗或类毒素等免疫：接种疫苗或类毒素等uu人工人工被动被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等第37页/共160页第第6 6章章 细菌耐药性第一节第一节 抗菌药物的种类及其作用机制抗菌

11、药物的种类及其作用机制一一、抗菌药物概念抗菌药物概念 1.1.1.1.抗菌药物（抗菌药物（抗菌药物（抗菌药物（antibacterial agentsantibacterial agentsantibacterial agentsantibacterial agents）指指指指对对对对病病病病原原原原菌菌菌菌具具具具有有有有抑抑抑抑制制制制或或或或杀杀杀杀灭灭灭灭作作作作用用用用、用用用用于于于于预预预预防防防防和和和和治治治治疗疗疗疗细细细细菌菌菌菌性性性性感感感感染染染染的的的的药药药药物物物物，包包包包括括括括抗抗抗抗生生生生素素素素（antibioticsantibioticsant

12、ibioticsantibiotics）和化学合成的药物。和化学合成的药物。和化学合成的药物。和化学合成的药物。第38页/共160页2.2.抗生素（抗生素（antibiotic agentsantibiotic agents）：）：微生物在其代谢过程中产生的能杀灭或抑制其它特异病原微生物的产物。微生物在其代谢过程中产生的能杀灭或抑制其它特异病原微生物的产物。抗生素分子量小，低浓度就能发挥其生物活性，有天然和人工半合成两类。抗生素分子量小，低浓度就能发挥其生物活性，有天然和人工半合成两类。第39页/共160页二二、抗菌药物的种类抗菌药物的种类 （一）按抗菌药物化学结构和性质分类：（一）按抗菌药物

13、化学结构和性质分类：1 1.-内酰胺类内酰胺类（-lactam-lactam）青霉素青霉素（penicillinpenicillin）类：青霉素类：青霉素GG、甲氧西林等。、甲氧西林等。头孢菌素头孢菌素（cephalosporincephalosporin）类：头孢唑啉等。类：头孢唑啉等。头霉素：如头孢西丁。头霉素：如头孢西丁。单环单环-内酰胺类：如氨曲南。内酰胺类：如氨曲南。碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。-内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使酶失活。内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使酶失活。第40页/共160页2 2.大环内酯类大环内酯类（ma

14、crolidesmacrolides）红霉素、螺旋霉素等。红霉素、螺旋霉素等。3 3.氨基糖苷类氨基糖苷类（aminoglycosidesaminoglycosides）链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素4 4.四环素类四环素类（tetracyclinetetracycline）四环素、强力霉素等。四环素、强力霉素等。5 5.氯霉素类氯霉素类（chloramphenicchloramphenic）包括氯霉素、甲砜霉素。包括氯霉素、甲砜霉素。第41页/共160页6 6.化学合成的抗菌药物化学合成的抗菌药物 磺磺胺胺类类：磺磺胺胺嘧嘧啶啶（SDSD）、复复方方新新诺诺明明 （SMZcoSMZco）等

15、。等。喹喹诺诺酮酮（fluroqinolonefluroqinolone）类类：包包括括氟氟哌哌 酸、环丙沙星等酸、环丙沙星等。7 7.其他其他 抗结核药物抗结核药物：利福平、异烟肼、乙胺丁利福平、异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺等。醇、吡嗪酰胺等。多肽类抗生素多肽类抗生素：多粘菌素类、万古霉素、多粘菌素类、万古霉素、杆菌肽、林可霉素和克林霉素等。杆菌肽、林可霉素和克林霉素等。第42页/共160页（二）按生物来源分类（二）按生物来源分类 1 1 1 1.细菌产生的抗生素细菌产生的抗生素细菌产生的抗生素细菌产生的抗生素 如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。2

16、 2 2 2.真真真真菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素 如如如如青青青青霉霉霉霉素素素素及及及及头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，现在多用其半合成产物。现在多用其半合成产物。现在多用其半合成产物。现在多用其半合成产物。3 3 3 3.放放放放线线线线菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素 放放放放线线线线菌菌菌菌是是是是生生生生产产产产抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的主主主主要要要要来来来来源源源源。其其其其中中中中链链链链霉霉霉霉菌菌菌菌和和和和小小小小单单单单孢孢孢孢菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素最最最最多多多多。常常常常

17、见见见见的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素包包包包括括括括链链链链霉霉霉霉素素素素、卡卡卡卡那那那那霉霉霉霉素素素素、四环素、红霉素、两性霉素四环素、红霉素、两性霉素四环素、红霉素、两性霉素四环素、红霉素、两性霉素B B B B等。等。等。等。第43页/共160页 根根据据对对病病原原菌菌的的作作用用靶靶位位，将将抗抗生生素素的的作作用机制分为四类用机制分为四类（表（表6-16-1）。1.1.抑制细菌细胞壁合成抑制细菌细胞壁合成 2.2.影响胞浆膜通透性（多粘菌素）影响胞浆膜通透性（多粘菌素）3.3.抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成（大环内酯类、氨基糖甙大环内酯类、氨基糖甙类）类）4.4.抑制核酸代

18、谢：叶酸代谢；核酸合成（喹抑制核酸代谢：叶酸代谢；核酸合成（喹诺酮、磺胺类）诺酮、磺胺类）三、抗菌药物的作用机制 第44页/共160页表表6-1 6-1 抗菌药物的主要作用部位抗菌药物的主要作用部位喹诺酮类林可霉素类氨基糖苷类酮康唑环丝氨酸利福平红霉素制霉菌素杆菌肽甲氧苄胺嘧啶四环素类两性霉素B万古霉素磺胺药氯霉素多粘菌素类-内酰胺类核酸合成细胞蛋白合成细胞膜渗透性细胞壁第45页/共160页一、细菌的耐药性一、细菌的耐药性（一）细菌耐药性（drug resistance）亦亦称称抗抗药药性性，是是指指细细菌菌对对某某抗抗菌菌药药物物（抗抗生生素素或或消消毒毒剂剂）的的相相对对抵抵抗抗性性。指指

19、病病原原体体或或肿肿瘤瘤细细胞胞对对反反复复应应用用的的化化学学治治疗疗药药物物敏敏感感性性降降低低或或消消失失的的现象。现象。（二）耐药性的程度 用用某某药药物物对对细细菌菌的的最最小小抑抑菌菌浓浓度度（MICMIC）表表示示。临临床床上上有有效效药药物物治治疗疗剂剂量量在在血血清清中中浓浓度度大大于于最最小小抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。第46页/共160页(三)耐药性产生的机制耐药性产生的机制1.产生水解酶和钝化酶2.改变细胞膜的通透性3.改变药物作用位点4.主动外排泵的作用5.生物膜形成第47页/共160页(四)控制耐药性的策略耐药性的策略1.合理用药

20、2.严格执行消毒隔离制度3.研制新的抗菌药物 4.破坏耐药基因药敏实验等指导第48页/共160页(四)控制耐药性的策略 1 1.合理使用抗菌药物合理使用抗菌药物 制定抗生素用药常规，教育医务工作者和病人规范化用药，供临床选制定抗生素用药常规，教育医务工作者和病人规范化用药，供临床选用抗菌药物参考。用抗菌药物参考。严格根据适应证选用药物严格根据适应证选用药物第49页/共160页 病人用药前应尽可能进行病原学检测，并进行药敏试验，作为调整用药的参考。病人用药前应尽可能进行病原学检测，并进行药敏试验，作为调整用药的参考。按药物的药动学特性，制定合理的用药方案按药物的药动学特性，制定合理的用药方案。用

21、药疗程应尽量缩短，一种抗菌药物可以控制的用药疗程应尽量缩短，一种抗菌药物可以控制的感染感染则不任意采用多种药则不任意采用多种药物联合。物联合。严格掌握抗菌药物的局部应用、预防应用和联合用药，避免滥用。严格掌握抗菌药物的局部应用、预防应用和联合用药，避免滥用。第50页/共160页2 2.严格执行消毒隔离制度严格执行消毒隔离制度3 3.加强药政管理加强药政管理4 4.研发新抗菌药物研发新抗菌药物 5 5.破坏耐药基因破坏耐药基因 第51页/共160页传染病控制三大原则:1.查明和控制传染源2.切断传播途径3.提高健康人群的免疫力消毒与灭菌是控制传染源的重要手段第52页/共160页消毒与灭菌 消毒（

22、disinfection）：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。灭菌（sterilization）:杀死物体上所有微生物的方法。包括致病菌、非致病菌、繁殖体和芽胞。第53页/共160页抑菌：抑制体内或体外细菌的生长。防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 无菌（asepsis）：没有活菌的意思。无菌状态是灭菌的结果。无菌操作（antiseptic technique）：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。第54页/共160页物理消毒灭菌法一、热力灭菌法热力灭菌法有干热灭菌和湿热灭菌两大类 在同一温度下，后者比前者的效力大。这是因为：第55页/共160页 *湿

23、热中菌体蛋白较易凝固。*湿热的穿透力比干热大。*湿热的蒸汽有潜热存在。为什么湿热灭菌比干热灭菌效力大第56页/共160页干热灭菌 ：干热的杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。1.焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。是一种彻底的灭菌方法。适用于废弃物品或动物尸体。第57页/共160页 2.烧灼法：直接用火焰灭菌。适用于接种环，试管口等的灭菌。3.干烤法：将物品置干烤箱内，加热至 160170 0C 2h。适用于高温下不变质、不损坏、不 蒸发的物品。第58页/共160页 4.红外线：利用电磁波的热效应灭菌。110m波长的热效应最强。适用于医疗器械的灭菌。第59页/共160页湿热灭菌：利用热蒸汽的高温

24、使微生物的蛋白质变性。1.巴氏消毒法：用较低温度61.162.80c，30min;71.70c,1530s杀灭液体中的病原 微生物或特 定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。用于牛乳制品、酒类等的消毒 第60页/共160页 2.煮沸法:100 0c,水浴，30min。食具、一般外科器械消毒。杀死芽胞需13小时。3.流动蒸气消毒法：100 0c,汽浴，30min 可杀死细菌繁殖体，但不能杀死芽胞。第61页/共160页 4.间歇蒸汽灭菌法：100 0c,汽浴,30min/次 流通蒸汽消毒法重复三次，每次间歇期置37温箱过夜，促使芽胞发芽变为繁殖体，被下一次蒸汽灭菌时杀灭。主

25、要用于营养培养基的灭菌，可杀死芽胞。第62页/共160页 5.高压蒸汽灭菌法：121.3 0c 汽浴（103.4kPa），1520min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物 用于培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的灭菌。灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。第63页/共160页二、辐射杀菌法（一）紫外线（ultraviolet ray，UV）杀菌 波长200300nm的紫外线有杀菌作用，其中以260266nm最强。*杀菌机制：干扰DNA的复制与转录。*杀菌作用特点：杀菌作用强,穿透力弱。第64页/共160页*适用范围：手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒,或不耐热物品的表面消毒。（二）

26、电离辐射：高速电子、射线、r射线等。应用范围：一次性医用塑料制品；食品。第65页/共160页三、过滤除菌法（filtration）用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。血清、抗生素、抗毒素等除菌。四、干燥与低温抑菌法 保存菌种:冷冻真空干燥法 lyophilization 五、超声波杀菌法第66页/共160页第二节 化学消毒灭菌法一、化学消毒剂的杀菌机制二、消毒剂的主要种类 醇类-乙醇（7075%）碘酒 2%2.5%、新洁尔灭 0.05%0.1%第67页/共160页第三节 影响消毒灭菌效果的因素一、消毒剂的性质、浓度与作用时间二、微生物的种类与数量三、温度 四、酸碱度 五

27、、有机物第68页/共160页病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全 生生物物安安全全（biosafetybiosafety）是是生生物物技技术术安安全全（safety safety of of biotechnologybiotechnology）的简称。的简称。狭狭义义地地指指现现代代生生物物技技术术的的研研究究、开开发发、应应用用及及转转基基因因生生物物可可能能对对生生物物多多样样性性、生生态态环环境境和和人人类类健健康康产产生生潜潜在的危害。在的危害。广广义义地地指指与与生生物物有有关关的的各各种种因因素素对对社社会会、经经济济、人人类类健健康康及及生生态态环环境境所产生的危害

28、或潜在风险。所产生的危害或潜在风险。第69页/共160页 一、病原微生物的分类一、病原微生物的分类 根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：第第第第一一一一类类类类是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物非非非非常常常常严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病的的的的微微微微生生生生物物物物，以以以以及及及及我我我我国国国国尚尚尚尚未

29、未未未发发发发现现现现或者已经宣布消灭的微生物。或者已经宣布消灭的微生物。或者已经宣布消灭的微生物。或者已经宣布消灭的微生物。第第第第二二二二类类类类是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，比比比比较较较较容容容容易易易易直直直直接接接接或或或或者者者者间间间间接接接接在在在在人人人人与与与与人人人人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。动物与人、动物与动物间传播的微生物。动物与人、动物与动物间传播的微生物。动物与人、动物与动物间传播的微生物。第70页/共160页第第第第三三三三类类类类是是是是指指指指能

30、能能能够够够够引引引引起起起起人人人人或或或或动动动动物物物物疾疾疾疾病病病病，但但但但一一一一般般般般情情情情况况况况下下下下对对对对人人人人、动动动动物物物物或或或或环环环环境境境境不不不不构构构构成成成成严严严严重重重重危危危危害害害害，传传传传播播播播风风风风险险险险有有有有限限限限，实实实实验验验验室室室室感感感感染染染染后后后后很很很很少少少少引引引引起起起起严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，并并并并且且且且具具具具备备备备有有有有效效效效治治治治疗疗疗疗和和和和预预预预防措施的微生物。防措施的微生物。防措施的微生物。防措施的微生物。第四类第四类第四类第四类是指在通常情况下不会引起

31、人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一类、第二类统称为第一类、第二类统称为第一类、第二类统称为第一类、第二类统称为高致病性病原微生物高致病性病原微生物高致病性病原微生物高致病性病原微生物。第71页/共160页二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病

32、的致病因子人、动植物致病的致病因子。二级二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，成严重危害，具具有有效的预防和治疗措施有有效的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施预防治疗措施。四级四级

33、 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施子。没有预防治疗措施。第72页/共160页 一一一一、二二二二级级级级实实实实验验验验室室室室不不不不得得得得从从从从事事事事高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物实实实实验验验验活活活活动动动动。三三三三级级级级、四四四四级级级级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。实验室从事高致病性病原微生物实验活动。实验室从事高致病性病原微生物实验活动。实验室从事高致病性病原

34、微生物实验活动。从从从从事事事事高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物相相相相关关关关实实实实验验验验活活活活动动动动应应应应当当当当有有有有名名名名以以以以上上上上的的的的工工工工作作作作人人人人员员员员共共共共同同同同进进进进行行行行。在在在在同同同同一一一一个个个个实实实实验验验验室室室室的的的的同同同同一一一一个个个个独独独独立立立立安安安安全全全全区区区区域域域域内内内内，只只只只能能能能同同同同时时时时从从从从事事事事一一一一种种种种高高高高致致致致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度

35、病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度 。第73页/共160页生物安全生物安全第74页/共160页三、实验室感染的控制以及监督和法律责任三、实验室感染的控制以及监督和法律责任 实实实实验验验验室室室室感感感感染染染染控控控控制制制制工工工工作作作作包包包包括括括括定定定定期期期期检检检检查查查查实实实实验验验验室室室室的的的的生生生生物物物物安安安安全全全全防防防防护护护护、病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物菌菌菌菌（毒毒毒毒）种种种种和和和和样样样样本本本本保保保保存存存存与与与与使使使使用用用用、安安安安全全全全操操操操作

36、作作作、实实实实验验验验室室室室排排排排放放放放的的的的废废废废水水水水和和和和废废废废气气气气以以以以及及及及其其其其他他他他废废废废物处置等实施情况。物处置等实施情况。物处置等实施情况。物处置等实施情况。第75页/共160页实实实实验验验验室室室室发发发发生生生生高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物泄泄泄泄漏漏漏漏时时时时，预预预预防防防防、控控控控制制制制措措措措施施施施包包包包括括括括：封封封封闭闭闭闭被被被被病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物污污污污染染染染的的的的实实实实验验验验室室室室或或或或可可可可能能能能造造造造成成成成病病病病原原原

37、原微微微微生生生生物物物物扩扩扩扩散散散散的的的的场场场场所所所所；开开开开展展展展流流流流行行行行病病病病学学学学调调调调查查查查；对对对对病病病病人人人人进进进进行行行行隔隔隔隔离离离离治治治治疗疗疗疗，对对对对相相相相关关关关人人人人员员员员进进进进行行行行医医医医学学学学检检检检查查查查；对对对对密密密密切切切切接接接接触触触触者者者者进进进进行行行行医医医医学学学学观察；观察；观察；观察；进行现场消毒；进行现场消毒；进行现场消毒；进行现场消毒；对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。对染

38、疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。第76页/共160页第十六章 螺旋体要求掌握：1、掌握钩端螺旋体的致病性及防治原则；2、熟悉梅毒螺旋体的致病性，检验方法及防治原则；3、了解螺旋体的概念，对人类有致病性的螺旋体属。第77页/共160页一、概念螺 旋 体（spirochete）是一类细长、柔软、呈螺旋形弯曲，运动活泼的原核细胞型微生物。第78页/共160页二、种属：二、种属：螺旋体属名螺旋体属名螺旋特征螺旋特征代表株代表株致致病病疏螺旋体属疏螺旋体属(Borrelia)3-10不规则不规则伯氏螺旋体回伯氏螺旋体回归热螺旋体归热螺旋体流行性回流行性回归热归热密螺旋体属密螺旋体属(Trepo

39、nema)8-14规则细密，规则细密，两端尖直两端尖直苍白螺旋体苍白螺旋体雅司螺旋体雅司螺旋体梅毒梅毒钩端螺旋体钩端螺旋体属属(Leptospira)规则更多更细密，规则更多更细密，一端或两端钩状一端或两端钩状问号钩端螺旋问号钩端螺旋体体钩端螺旋钩端螺旋体病体病第79页/共160页一、生物学性状一、生物学性状 1 1、形态、结构及染色、形态、结构及染色 细长，螺旋密而规则细长，螺旋密而规则 一端或两端弯曲呈钩状，呈一端或两端弯曲呈钩状，呈C C、S S形形 外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动 有关）有关）革兰阴性，着色难，常用于革兰阴性，着色难，常用于Fo

40、ntanaFontana镀银镀银 染色染色（棕褐色）（棕褐色）第一节钩端螺旋体（钩体）第80页/共160页黄疸出血热群钩端螺旋体黄疸出血热群钩端螺旋体第81页/共160页第82页/共160页2 2、培养特性、培养特性 钩体是目前钩体是目前唯一唯一能人工培养的能人工培养的螺旋体螺旋体 常常用用Korthof（柯柯索索夫夫）培培养养基基 生生长长最最适适温温度度为为2830，2周后出现云雾状周后出现云雾状 动物培养（小鼠）动物培养（小鼠）第83页/共160页3 3、抵抗力、抵抗力 对热敏感，对热敏感，5656，1010分钟即死亡分钟即死亡 对消毒剂敏感对消毒剂敏感 对对青霉素青霉素、金霉素敏感，治

41、疗首、金霉素敏感，治疗首选选第84页/共160页二、致病性 1、致病物质 溶血毒素 细胞毒性因子CTF 内毒素样物质（脂多糖样物质）细胞致病作用（CPE）物质 其他酶类（脂酶，脱氢酶）第85页/共160页2、所致疾病钩端螺旋体病（钩体 病）俗称打谷黄，属自然疫源 性疾病。传 染 源：鼠、猪（我国是幼猪）传播途径：经健康或破损皮肤粘膜第86页/共160页3、致病机制：、致病机制：钩体经皮肤粘膜进入人体在局部迅速繁殖引起钩体血症、败血症向全身毛细血管内皮细胞扩散至肝、肾、心肺、脑、肌肉损害第87页/共160页 4 4、表现：、表现：起病急、高热、乏力、头痛、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌触痛、浅表淋

42、巴结肿大，严重者、有出血、黄疸、休克、DIC、伴心、肾功能不全。寒热酸痛一身乏 眼红腿痛淋巴大第88页/共160页5、临床类型：黄疸出血型-最常见 流感伤寒型 肺出血型-最严重 脑膜脑炎型 肾功能衰竭型第89页/共160页 三、微生物学检查三、微生物学检查 1 1、病原体检查、病原体检查 直接镜检：直接镜检：暗视野观察活体、镀银染色片暗视野观察活体、镀银染色片 分离培养：分离培养：标本接种于标本接种于KorthofKorthof培养基培养基 动物接种：动物接种：核酸检测：核酸检测：PCRPCR、DNADNA探针探针 第90页/共160页2、血清学诊断 显微凝集试验（凝集溶解）：已知钩体+血清

43、小蜘蛛样凝集 血清中补体含量高 凝集稍后溶解 1:400，4倍 补体结合试验：1:20第91页/共160页四、防治原则（一）控制传染源 （1）灭鼠（2）加强家畜管理保护水源（二）接种疫苗（三）治疗青霉素首选第92页/共160页第二节密螺旋体属一、生物学特性 1、形态结构（同前、略）2、培养特性：不能进行人工培养 3、抵抗力：极弱，对温度、干燥、化学消毒剂、抗生素等均敏感与人类疾病密切相关的代表株是引起梅毒的苍白螺旋体苍白亚种。第93页/共160页二、致病性 1、梅毒螺旋体在自然情况下只感染人，人是梅毒螺旋体的唯一宿主，也是梅毒的唯一传染源。2、梅毒按传播途径分先天梅毒（胎传梅毒）和后天梅毒（获

44、得性梅毒）。3、获得性梅毒，经性接触传播，以反复隐伏和再发为特征，临床分为三期。第94页/共160页期梅毒（初期）又称初疮 破坏性小，感染性极强 感染后3周左右，局部出现，无痛性硬结称“硬下疳”多见于外生殖器 48周后，不治自愈第95页/共160页第96页/共160页期梅毒期梅毒 硬下疳自愈后，经过硬下疳自愈后，经过2323个月无症状潜个月无症状潜伏期后进入伏期后进入期期 破坏性小，感染性强破坏性小，感染性强 出现苍白亚种螺旋体血症出现苍白亚种螺旋体血症 全身皮肤粘膜梅毒疹全身皮肤粘膜梅毒疹 全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼和其他脏器扩散和其他脏器扩散第97页/

45、共160页第98页/共160页第99页/共160页期梅毒期梅毒 发性于感染后发性于感染后2 2年左右，也有长达年左右，也有长达10151015年之久年之久 感染性小，破坏性大感染性小，破坏性大 病变播及全身组织器官（皮肤、肝、病变播及全身组织器官（皮肤、肝、脾、骨骼）脾、骨骼）慢性肉芽肿，损害进展和消退常交慢性肉芽肿，损害进展和消退常交替出现替出现 严重者危及生命严重者危及生命第100页/共160页第101页/共160页4、先天梅毒（胎传梅毒）、先天梅毒（胎传梅毒）多发于在妊娠多发于在妊娠4个月之后个月之后 引起胎儿全身感染导致引起胎儿全身感染导致流产流产、早产早产和和死胎死胎 出出生生梅梅毒

46、毒婴婴儿儿，可可表表现现为为马马鞍鞍鼻鼻、锯锯齿齿形形牙牙，间间质质性性角角膜膜炎炎、先先天天性性耳聋等。耳聋等。第102页/共160页三、微生物学检查（一）标本期梅毒硬下疳渗出物期梅毒梅毒疹渗出物，淋巴结抽取液（二）方法、显微镜检查第103页/共160页2、血清学诊断 非特异性血清学试验 抗原为（正常牛心肌的心脂质）血清中的反应素为抗脂质抗体。方法有VDRL（性病研究实验室试验）Veneral Disease Research Laboratory RPR（快速血浆反应素试验）Rapid Plasma Reagin 适用于大量筛选第104页/共160页特异性血清学试验特异性血清学试验抗原抗原

47、为（为（NicholsNichols株螺旋体）株螺旋体）抗体抗体为螺旋体特异性抗体为螺旋体特异性抗体方方法法有有FTA-ABSFTA-ABS试试验验（荧荧光光梅梅毒螺旋体抗体吸收试验）毒螺旋体抗体吸收试验）优优点点：特特异异性性强强，可可用用于于梅梅毒毒螺螺 旋体旋体证实试验证实试验第105页/共160页第十七章 支原体要求掌握：1、掌握支原体的概念、形态结构特点及培养特性；2、掌握主要病原性支原体的传播途径及所致疾病；3、熟悉支原体与L型细菌的区别。第106页/共160页第一节第一节 支原体的概念及种类支原体的概念及种类一、概念：支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态上呈多形性、

48、可通过除菌滤器、能在无生命的培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。第107页/共160页支原体属于柔膜体纲中的支原体目，下分三个科：支原体科Mycoplasmataceae螺原体科Spiroplasmataceae无胆甾原体科Acholeplasmataceae支原体科支原体属64个种脲原体属2个种第108页/共160页对人类主要致病性支原体包括：支原体支原体 致病性致病性肺炎支原体 Mpneumoniae 肺炎、支气管炎人型支原体 Mhominis 泌尿生殖道感染生殖支原体 Mgenitalium 泌尿生殖道感染穿透支原体 Mpenetraus 多继发于艾滋病溶脲脲原体 Uurealyt

49、icum 泌尿生殖道感染第109页/共160页二、生物学性状（一）形态结构 体 积：最小0.20.3m，能通过除菌滤器 形 态：球形、丝状等 第110页/共160页肺炎支原体第111页/共160页 结 构：细胞膜由三层含蛋白质和脂 质成分构成，内外两层为蛋白质，中层 为脂质（含固醇）细胞膜外有荚膜（致 病因素），还有特殊的顶端结构（具有 粘附细胞），微丝网（与运动有关）没有细胞壁 染 色 性：革兰染色阴性，Giemsa染 色呈淡紫色。第112页/共160页（二）培养特性（二）培养特性 营养要求比细菌高（人和动物血浆）营养要求比细菌高（人和动物血浆）生长缓慢，数日至数周后出现菌落生长缓慢，数日至

50、数周后出现菌落 油煎荷包蛋样菌落油煎荷包蛋样菌落 、“T”株株第113页/共160页（三）生化反应（三）生化反应支原体名称支原体名称葡萄糖葡萄糖精氨酸精氨酸尿素尿素肺炎支原体肺炎支原体+人型支原体人型支原体+生殖支原体生殖支原体+穿透支原体穿透支原体+溶脲脲原体溶脲脲原体+第114页/共160页（四）抵抗力n n对理化因素的抵抗力较细菌弱对理化因素的抵抗力较细菌弱 对抑制细胞壁合成的抗生素耐受 对干扰蛋白质合成的抗生素敏感第115页/共160页（五）支原体与（五）支原体与L型细菌的区别型细菌的区别性状性状支支原原体体L-型细菌型细菌细胞壁细胞壁没没有有缺缺少少分分布布自然界广泛自然界广泛多在诱