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1、微柱凝胶免疫检测技术微柱凝胶免疫检测技术 反应原理反应原理 微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（Microcolumn Gel Heamagglutination AssayMicrocolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHAMGHA）。）。在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，
2、在同样的离心力下，集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。红细胞沉降到微柱管尖底部。4+4+2+2+-特点和优点特点和优点 简单：不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，适用于大量标本检测，解决了简单：不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，适用于大量标本检测，解决了CoombsCoombs试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。使不完全抗体检测理论使不完全抗体检测理论“金标准金标准”成为临床的成为临床的“金标准金标准”。多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。多份标
3、本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、操作操作更安全等优点。更安全等优点。产品操作产品操作一一.准备工作准备工作检测卡的准备检测卡的准备1.1.在在18-2518-25条件下平衡条件下平衡3030分钟。分钟。2.2.离心离心2-32-3分钟，均衡反应介质。分钟，均衡反应介质。3.3.外观检查应无气泡、干胶和杂质。外观检查应无气泡、干胶和杂质。4.4.要缓慢撕膜。防止膜面上的液滴凝结（因冷热交替产生的）污染邻孔。要缓慢撕膜。防止膜面上的液滴凝结（因冷热交替产生的）污染邻
4、孔。离心！检测标本的准备检测标本的准备1.1.标本要求用标本要求用EDTAEDTA抗凝管采集的新鲜血（如陈旧血需设阴性对照）。抗凝管采集的新鲜血（如陈旧血需设阴性对照）。2.2.抗凝血样标本要上清澄清。如有纤毛状、浑浊、乳糜、溶血、脂肪等状，应抗凝血样标本要上清澄清。如有纤毛状、浑浊、乳糜、溶血、脂肪等状，应 再次洗涤离心。为防止纤维蛋白影响红细胞沉降，建议使用红细胞稀释液。再次洗涤离心。为防止纤维蛋白影响红细胞沉降，建议使用红细胞稀释液。3.3.血辫血样须放置试管中离心处理，确保血清澄清微黄。必要时需洗涤。血辫血样须放置试管中离心处理，确保血清澄清微黄。必要时需洗涤。4.4.在在18-251
5、8-25条件下平衡条件下平衡3030分钟，防止冷凝集。分钟，防止冷凝集。红细胞悬液的制备红细胞悬液的制备1.1.将红细胞配制为将红细胞配制为0.8%0.8%的悬液，最高浓度不要超过的悬液，最高浓度不要超过1%1%。如。如:取取8l 8l 压积红细压积红细胞，加入到胞，加入到1ml1ml的红细胞稀释液（抗人球蛋白试验要求用低离子液配置红细胞的红细胞稀释液（抗人球蛋白试验要求用低离子液配置红细胞悬液）中，配制出的红细胞悬液浓度大约为悬液）中，配制出的红细胞悬液浓度大约为0.8%0.8%。2.2.外观检查呈均匀淡红色，无血块、无絮状物（如有纤维蛋白需去除）。外观检查呈均匀淡红色，无血块、无絮状物（如
6、有纤维蛋白需去除）。二二.结果判定结果判定阳性结果阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。阴性结果阴性结果：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。反应强度反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中，为弱阳
7、性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。合物在胶中，为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。？4+4+红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面3+3+大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2+2+大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部1+1+红细胞复合物位于凝胶中下部红细胞复合物位于凝胶中下部 与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为 -红细胞完全沉积在凝胶管尖底部红细胞完全沉积
8、在凝胶管尖底部完全溶血完全溶血 凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色不完全溶血不完全溶血 残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色混合凝集混合凝集 红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部 完全完全 不完全不完全 混合凝集混合凝集现象及说明现象及说明反应强度反应强度三、标准操作规程三、标准操作规程 1 1、ABOABO、RhDRhD血型定型检测卡（单克隆抗体）血型定型检测卡（单克隆抗体）操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测
9、卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将待检者血浆分别加入将待检者血浆分别加入5-6管中，各管中，各50l；50l50l待检者血浆待检者血浆3 3）将待检者）将待检者0.8%0.8%红细胞悬液分别加入红细胞悬液分别加入1-41-4管中，管中，各各5050l l；待检者待检者0.8%0.8%红细胞悬液红细胞悬液50l50l50l50l4 4）取）取0.8%0.8%的的ABOABO血型反定型红细胞试剂，分别加血型反定型红细胞试剂，分别加入入5-65-6管中，各管中，各5050l l；50l50lA A细胞细胞B B细胞细胞5 5）离心）离心5 5分钟（分钟（900rpm2900rpm2分
10、钟，分钟，1500rpm31500rpm3分钟）；分钟）；6 6）结果判读。）结果判读。结果：结果：A A型型RhDRhD阳性阳性50l50l50l2 2、ABOABO、RhDRhD血型检测卡（微柱凝胶）血型检测卡（微柱凝胶）操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将待检者）将待检者0.8%0.8%红细胞悬液分别加入第红细胞悬液分别加入第1313或或446 6管中，各管中，各5050l l；待检者的待检者的0.8%0.8%红细胞悬液红细胞悬液3 3）离心）离心5 5分钟（分钟（900rpm2900rpm2分钟，分钟，1500rpm31500rp
11、m3分钟）；分钟）；4 4）结果判读。）结果判读。结果：结果：1.A1.A型型RhDRhD阳性；阳性；2.B 2.B型型RhDRhD阳性阳性 3、Rh血型抗原检测卡（单克隆抗体）血型抗原检测卡（单克隆抗体）操作步骤操作步骤:1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2）将待检者）将待检者0.8%红细胞悬液分别加入红细胞悬液分别加入16管中，各管中，各50l；待检者待检者0.8%0.8%红细胞悬液红细胞悬液50l50l50l50l50l50l3）离心）离心5分钟（分钟（900rpm2分钟，分钟，1500rpm3分钟）；分钟）；4）结果判读结果判读。结果：结果：RhDRhD、C C
12、、e e阳性阳性4 4、抗人球蛋白检测卡、抗人球蛋白检测卡不规则抗体筛检不规则抗体筛检 操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将）将0.8%0.8%、筛检红细胞各筛检红细胞各5050l l分别加分别加入对应的微管中入对应的微管中;50l50l50l0.8%0.8%、筛检红细胞筛检红细胞3 3）将待检者血浆各）将待检者血浆各5050l l分别加入分别加入、微管中；微管中；4 4）3737孵育孵育1515分钟；分钟；待检者血浆待检者血浆50l50l50lll50l50l50l5 5）离心）离心5 5分钟（分钟（900rpm2900rpm2分钟，分
13、钟，1500rpm31500rpm3分钟）；分钟）；6 6）结果判读。）结果判读。根据当前使用的筛检红细胞的反应格局来判定根据当前使用的筛检红细胞的反应格局来判定 5 5、抗人球蛋白检测卡、抗人球蛋白检测卡交叉配血试验交叉配血试验操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将供血者）将供血者0.8%0.8%红细胞悬液与受血者血浆各红细胞悬液与受血者血浆各5050l l先后加入主侧管中；先后加入主侧管中；受血者血浆受血者血浆50l供血者红细胞悬液供血者红细胞悬液50l3 3）将受血者）将受血者0.8%0.8%红细胞悬液与供血者血浆各红细胞悬液与供血者
14、血浆各5050l l先后加入次侧管中；先后加入次侧管中；4 4）3737孵育孵育1515分钟；分钟；供血者血浆供血者血浆50l受血者红细胞悬液受血者红细胞悬液50l5）离心）离心5分钟（分钟（900rpm2分钟，分钟，1500rpm3分钟）；分钟）；6）结果判读结果判读。例如上图：例如上图：1、3不配合；不配合；2配合配合 交叉配血实验注意事项交叉配血实验注意事项1.1.应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTAEDTA的试管采血液标本，的试管采血液标本，该标本不能放入该标本不能放入2-82-8冰箱保
15、存冰箱保存，以避免红细胞在病人，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。体外致敏所致假阳性反应。2.2.红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。3.3.血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶
16、中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4.4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。报告并讨论其原因。5.5.每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6.6.红细胞悬液的浓度应为红细胞悬液的浓度应为0.8%0.8%，不得超过，不得超过1%1%。7.7.使用低离子液（使
17、用低离子液（LissLiss液）稀释红细胞可增强敏感性。液）稀释红细胞可增强敏感性。8.8.检测卡应放在检测卡应放在18-2518-25储存，如若长期放在储存，如若长期放在44冰箱，建议每冰箱，建议每1 1个月取出，用专个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将）将0.8%0.8%待检者和阴性对照（健康待检者和阴性对照（健康男性男性O O型）红细胞悬液各型）红细胞悬液各5050l l分别加分别加入微管中；入微管中；150l50l50l50l50l50l
18、2345 0.8%0.8%待检者红细胞悬液待检者红细胞悬液阴性对照阴性对照 6 6、抗人球蛋白检测卡、抗人球蛋白检测卡抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验 3 3）离心）离心5 5分钟（分钟（900rpm2900rpm2分钟，分钟，1500rpm31500rpm3分钟）；分钟）；4 4）结果判读。）结果判读。结果：结果：1 1、2 2、3 3和和5 5阳性阳性4 4阴性阴性 7.7.抗人球蛋白抗人球蛋白检测卡检测卡母体母体IgGIgG抗体效价检测抗体效价检测 操作步骤操作步骤 1 1）在试管中分别加入）在试管中分别加入200200l l母体血清和母体血清和200200l 2-MEl 2-ME应用液，然
19、后置于应用液，然后置于3737水浴水浴30-6030-60分钟。以充分破坏血清中分钟。以充分破坏血清中IgMIgM类抗体；类抗体；200200l l母体血清母体血清200200l 2-Mel 2-Me3737水浴水浴30-6030-60分钟分钟2 2）取）取6 6只干净试管，分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释；只干净试管，分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释；326412825651216350l 200l 200l 200l 200l 200l 标记并加入稀释液标记并加入稀释液326412825616灭活后的血清灭活后的血清50l 200l 200l 200l 200l 200l 51
20、23 3）将准备好的）将准备好的HDNHDN母体母体IgGIgG抗体效价检测卡做好标记，在所有孔中分别加入抗体效价检测卡做好标记，在所有孔中分别加入5050l l父亲（或父亲同型）的父亲（或父亲同型）的0.8%0.8%红细胞悬液（红细胞悬液（ABOABO血型系统血型系统IgGIgG血型抗体）或在所有孔血型抗体）或在所有孔中分别加入中分别加入5050l l标准标准O O型型0.8%0.8%红细胞悬液（测定孕妇红细胞悬液（测定孕妇ABOABO血型系统以外血型系统以外IgGIgG血型抗血型抗体）；体）；50l50l50l50l50l50l0.8%红细胞悬液红细胞悬液4 4）依次将）依次将5050l
21、l倍比稀释血清分别加入对应孔中；倍比稀释血清分别加入对应孔中；163250l 50l 50l 50l 50l 50l 645122561285）37孵育孵育15分钟；分钟；6）离心）离心5分钟（分钟（900rpm2分钟，分钟，1500rpm3分钟）；分钟）；7）结果判读结果判读。结果：效价为结果：效价为 1 1：128128提示：提示：将每次采集的血清标本分装冻存，每次检测要以同样的方法、将每次采集的血清标本分装冻存，每次检测要以同样的方法、同样的表型抗原红细胞，当次检测的血清要和以前冻存的血清同时同样的表型抗原红细胞，当次检测的血清要和以前冻存的血清同时对照试验。对照试验。HDNHDN母体母
22、体IgGIgG抗体效价检测实验注意事项抗体效价检测实验注意事项1.1.血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。2.2.父亲红细胞标本也可用与其同型的父亲红细胞标本也可用与其同型的A A型或型或B B型红细胞代替。型红细胞代替。3.3.每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。4.4.红细胞悬液的浓度应为红细胞悬液的浓度应为0.8%0.8%，最高不超过，最高不超过1%1%。5.5.检测卡应
23、放在检测卡应放在18-2518-25储存，如若长期放在储存，如若长期放在44冰箱，建议每冰箱，建议每1-21-2个月取出，用个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。6.6.倍比稀释时要注意正确更换枪头。倍比稀释时要注意正确更换枪头。7.7.灭活时要注意用封口膜密封试管口。灭活时要注意用封口膜密封试管口。50l50l50l50l50l50l操作步骤：操作步骤：1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将）将0.80.8待检者红细胞悬液分别待检者红细胞悬液分别加入加入1-61-6管中管中,各各5050l l；待检者
24、待检者0.8%0.8%红细胞悬液红细胞悬液8 8、新生儿、新生儿ABOABO、RhDRhD血型检测卡（微柱凝胶）血型检测卡（微柱凝胶）新生儿溶血病检新生儿溶血病检测卡测卡 3）离心）离心5分钟（分钟（900rpm2分钟，分钟，1500rpm3分钟）；分钟）；4）结果判读结果判读。结果：结果：ABAB型型RhDRhD阳性，阳性，直抗试验阳性。直抗试验阳性。9 9、抗人球蛋白检测卡、抗人球蛋白检测卡-新生儿溶血病胎（婴）儿不完全抗体检测卡新生儿溶血病胎（婴）儿不完全抗体检测卡准备工作准备工作热放散：热放散：取同体积的压积血（至少洗涤三次）和牛血清白蛋白混匀，置于取同体积的压积血（至少洗涤三次）和牛
25、血清白蛋白混匀，置于5656水浴水浴1010分钟，期间不断摇动，然后离心分钟（分钟，期间不断摇动，然后离心分钟（2000rpm2000rpm），取上清。即放散液。），取上清。即放散液。酸放散：酸放散：a.a.用生理盐水洗涤待检红细胞用生理盐水洗涤待检红细胞4 4次。次。b.b.配制放散液配制放散液(取取4 4体积的放散液体积的放散液A A与与1 1体积的放散液体积的放散液B B混合均匀混合均匀)。c.c.将待检压积红细胞与酸放散液等体积混合均匀，室温孵育将待检压积红细胞与酸放散液等体积混合均匀，室温孵育1-21-2分钟。分钟。d.d.以以3000rpm3000rpm离心离心1-21-2分钟。分
26、钟。e.e.立即将酸放散液移到另一只干净试管中，并加入紫红色中和液调至肉色或水粉色立即将酸放散液移到另一只干净试管中，并加入紫红色中和液调至肉色或水粉色（500ul500ul放散液加入中和液放散液加入中和液80-85ul80-85ul），此时），此时PHPH值近中性。值近中性。f.f.将中和后的酸放散液再次进行离心（将中和后的酸放散液再次进行离心（3000rpm3000rpm离心离心1-21-2分钟）取上清即放散夜。分钟）取上清即放散夜。v操作步骤操作步骤v1 1）将准备好的检测卡做好标记；）将准备好的检测卡做好标记；2 2）将）将0.80.8A A型红细胞悬液各型红细胞悬液各5050l l分
27、分别加入别加入1 1号、号、4 4号管中；将号管中；将0.80.8B B型红型红细胞悬液各细胞悬液各5050l l分别加入分别加入2 2号、号、5 5号；号；将将0.80.8的的O O型红细胞悬液各型红细胞悬液各5050l l分别分别加入加入3 3号、号、6 6号孔中；号孔中；3 3）将）将1313管分别加入管分别加入5050l l新生儿血浆，新生儿血浆，4646管分别加入管分别加入5050l l新生儿红细胞放新生儿红细胞放散液；散液；50l50l50l50l50l50lA BO0.8%0.8%红细胞悬液红细胞悬液新生儿血浆新生儿血浆50l50l50l50l50l50l新生儿红细胞放散液新生儿
28、红细胞放散液4 4）3737孵育孵育1515分钟；分钟；5 5）离心）离心5 5分钟（分钟（900rpm2900rpm2分钟，分钟，1500rpm31500rpm3分钟）；分钟）；6 6）结果判读。）结果判读。结果：游离抗体阳性、放散试验阳性结果：游离抗体阳性、放散试验阳性 新生儿溶血病检测实验注意事项新生儿溶血病检测实验注意事项1.1.红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，
29、则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。确定该标本是否可以做本实验。2.2.血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。3.3.如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论。原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多
30、报告并讨论。4.4.父亲红细胞标本也可用与其同型的父亲红细胞标本也可用与其同型的A A型或型或B B型红细胞代替。型红细胞代替。5.5.洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过5656，以防溶血；酸放散室温，以防溶血；酸放散室温孵育时间必须在孵育时间必须在1-21-2分钟之间；天冷时放散液注意保温；尽可能多得放散液吸出；注分钟之间；天冷时放散液注意保温；尽可能多得放散液吸出；注意除去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤，至少三次。意除去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤，至少三次。6.6.每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置
31、至室温。每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。7.7.红细胞悬液的浓度应为红细胞悬液的浓度应为0.8%0.8%，最高不超过，最高不超过1%1%。8.8.检测卡应放在检测卡应放在18-2518-25储存，如若长期放在储存，如若长期放在44冰箱，建议每冰箱，建议每1-21-2个月取出，用专用离心个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。机离心一次，以防止干胶或产生气泡。临床遇到的一些问题及原因的分析临床遇到的一些问题及原因的分析问题问题1 1：正反定型卡反定型侧出现弱阳性结果：正反定型卡反定型侧出现弱阳性结果原因及分析原因及分析可能是一些特殊标本（如血液病、肿瘤病人和老年人等）抗体比
32、较弱，有些大医可能是一些特殊标本（如血液病、肿瘤病人和老年人等）抗体比较弱，有些大医院做过统计（当地院做过统计（当地10%10%左右的人群存在此情况），不同地区比例可能不同。左右的人群存在此情况），不同地区比例可能不同。处理方法处理方法加样后加样后2-8 2-8 孵育孵育10151015分钟，可增加弱抗体检出率。分钟，可增加弱抗体检出率。问题问题2.2.正反定型卡正定型结果阳性弱正反定型卡正定型结果阳性弱原因及分析原因及分析可能是一些特殊疾病引起抗原减弱。可能是一些特殊疾病引起抗原减弱。处理方法处理方法加样后室温孵育加样后室温孵育10151015分钟，可增加弱抗原检出率。分钟，可增加弱抗原检出
33、率。问题问题3.3.交叉配血阴性结果不好（假阳性，有交叉配血阴性结果不好（假阳性，有1+1+或或2+2+结果）结果）原因及分析原因及分析 a.a.标本本身的问题（放置时间长、标本本身存在致敏现象、标本被污染）。标本本身的问题（放置时间长、标本本身存在致敏现象、标本被污染）。b.b.低于实验要求温度或没有孵育，特别是在冬天很容易出现此问题。低于实验要求温度或没有孵育，特别是在冬天很容易出现此问题。问题问题4.4.正反定型不符正反定型不符原因及分析原因及分析a.a.一些特殊疾病引起。一些特殊疾病引起。b.b.新生儿抗体弱或无抗体。新生儿抗体弱或无抗体。c.c.抗原弱或亚型引起。抗原弱或亚型引起。问
34、题问题5.5.血型卡或抗人球卡出现混合凝集及疑似现象血型卡或抗人球卡出现混合凝集及疑似现象原因及分析原因及分析a.a.不同血型相容性输血、骨髓移植和器官移植等。不同血型相容性输血、骨髓移植和器官移植等。b.b.标本存放时间过长，存在一些细胞碎片、细胞团块或纤维蛋白（在胶标本存放时间过长，存在一些细胞碎片、细胞团块或纤维蛋白（在胶上部形成红线或红色圆环）。上部形成红线或红色圆环）。c.c.亚型亚型问题问题6.6.母体效价卡结果各稀释度都为阳性母体效价卡结果各稀释度都为阳性原因及分析原因及分析灭活不完全或者稀释度不够。灭活不完全或者稀释度不够。处理方法处理方法重新灭活或重新灭活或先将血清标本稀释，
35、取先将血清标本稀释，取4+4+最高稀释倍数的血清用等量最高稀释倍数的血清用等量2-me2-me灭活。灭活。问题问题7.7.卡式法检测卡式法检测HDNHDN母体母体IgGIgG抗体效价的临界值抗体效价的临界值 卡式法灵敏度较高，比试管法高卡式法灵敏度较高，比试管法高1-21-2个滴度。个滴度。其他注意事项其他注意事项1.1.运输造成的检测卡凝胶有断裂、气泡、干胶时，都会阻碍红细胞的通过，该卡运输造成的检测卡凝胶有断裂、气泡、干胶时，都会阻碍红细胞的通过，该卡不能使用。不能使用。2.2.必须使用博研专用离心机，必要时请厂家对离心机进行校正，以确保结果的准必须使用博研专用离心机，必要时请厂家对离心机
36、进行校正，以确保结果的准确。确。3.3.严禁使用非抗凝血标本配制的红细胞悬液，以避免出现假阳性结果。严禁使用非抗凝血标本配制的红细胞悬液，以避免出现假阳性结果。4.4.被测定的血清中，蛋白含量异常时会出现假阳性结果，细胞凝聚团会被误认为被测定的血清中，蛋白含量异常时会出现假阳性结果，细胞凝聚团会被误认为是阳性凝集。是阳性凝集。5.5.不准确的加样（如加入高浓度的细胞或不足加样量的血清等）均可干扰结果。不准确的加样（如加入高浓度的细胞或不足加样量的血清等）均可干扰结果。6.6.实验温度过低时，因凝胶颗粒活动性减少单个红细胞穿过时困难，易出现假阳实验温度过低时，因凝胶颗粒活动性减少单个红细胞穿过时
37、困难，易出现假阳性结果。性结果。7.7.由于抗原有效期问题，与新鲜红细胞相比，存放久的红细胞抗原反应会相应的由于抗原有效期问题，与新鲜红细胞相比，存放久的红细胞抗原反应会相应的减弱；破碎的红细胞膜浮于胶中或胶面。减弱；破碎的红细胞膜浮于胶中或胶面。8.8.血浆或血清中含有颗粒状的物质可能会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，应对血浆或血清中含有颗粒状的物质可能会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，应对这样的标本进行离心处理分离。这样的标本进行离心处理分离。9.9.加样红细胞亦不应含有颗粒状物质，此种物质同样会阻碍红细胞通过凝胶颗加样红细胞亦不应含有颗粒状物质，此种物质同样会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，建议使用
38、红细胞稀释液。粒间隙，建议使用红细胞稀释液。10.10.禁用严重溶血的标本，它会对结果的判读产生强烈的干扰。禁用严重溶血的标本，它会对结果的判读产生强烈的干扰。11.11.多种药物（包括大剂量的抗菌素）的使用或在某种疾病的状态下，与直抗试多种药物（包括大剂量的抗菌素）的使用或在某种疾病的状态下，与直抗试验的阳性结果有关。验的阳性结果有关。12.12.禁止使用被污染的标本和材料。禁止使用被污染的标本和材料。13.13.不同抗原性红细胞的混合标本、多凝集红细胞（如不同抗原性红细胞的混合标本、多凝集红细胞（如T/TnT/Tn）或亚型红细胞（如）或亚型红细胞（如A3A3）等可能出现混合反应。）等可能出现混合反应。14.14.被酶过度处理的红细胞将会产生非特异性凝集。被酶过度处理的红细胞将会产生非特异性凝集。