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1、微生物实验室培养与应用微生物实验室培养与应用一、培养基一、培养基1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。2营养构成：各种培养基一般都含有 、和 ，此外还要满足微生物生长对 、以及 的要求。3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。二、无菌技术1、获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：（1）对实验操作的 、操作者的 和 进行 。（2）将用于微生物培养的 、和 等器具进行。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭
2、菌处理的材料用具与 相接触。2、消毒和灭菌（1）消毒是指 。常用的方法有 、消毒法。（2）灭菌是指 。常用的方法有：、灭菌。分别适用于那些用具？三、实验操作-大肠杆菌的纯化培养：1.本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。2.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：、。3 倒平板：待培养基冷却至 左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿 ，左手 ；使锥形瓶的瓶口 ；左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板 。四、纯化大肠杆菌1.微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有 和 等。2平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。
3、3.其操作步骤是：在酒精灯火焰上灼烧直至 。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到 的目的。将冷却的接种环伸入到 。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。将平板 培养。4稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度 ，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的 。系列稀释操作：取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编
4、号为101试管中，并吹打3次使之混匀。从10倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推问题1从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？问题2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？问题3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？问题4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 问题5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？问题6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？问题7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？问题8倒平板的目的是什么？问题9若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？问题10配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？问题11取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？问题12系列稀释操作的注意事项是什么？问题13涂布平板操作的步骤是什么？