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1、关于血管紧张素转化酶第一页，本课件共有14页概述概述血管紧张素转化酶（ACE）又称激肽激肽酶或肽基-羧基羧基肽酶，系统系统命名为肽基-二肽水解酶。属血管血管内皮内皮细胞膜细胞膜结合酶，由肽的C端将氨基酸氨基酸切为两段变换而来，可使肽链C端二肽残基水解。ACE可催化血管紧张素血管紧张素（十肽）水解成八肽的血管紧张血管紧张素素，使血管进一步收缩，血压血压升高。也可作用作用于肾上腺皮质肾上腺皮质，促进醛固酮醛固酮的分泌。因此，ACE是肾素肾素-血管紧张素血管紧张素-醛固酮的重要成分。第二页，本课件共有14页概述概述ACE还催化具有降压作用的缓激肽缓激肽水解而失去活性。ACE广泛分布分布于人体人体各组
2、织组织，以附睾附睾、睾丸睾丸及肺的含量较丰富，其中肺毛细血管毛细血管内皮细胞细胞ACE活性最高。肾、脑脑垂体垂体等组织酶活性酶活性较低。ACE测定方法测定方法主要有比色法比色法、酶偶联法等。血管紧张素转换酶的别名血管紧张素转换酶的别名：血管紧张素转化酶：血管紧张素转化酶第三页，本课件共有14页转转换换酶酶的的测测定定原原理理血血管管紧紧张张素素.（1）三硝基苯硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：底物马尿酰-甘氨酰-甘氨酸甘氨酸（Hip-GlyGly-Gly）在在ACE作用下，释放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者与三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黄色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gl
3、y-Gly），其含量与ACE活性呈正相关相关。（2）酶偶联法：ACE使底物马尿酸尿酸双甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成马尿酸（Hip）和双甘肽（Gly-Gly），后者与L-谷氨酰-3-羧基-4-4-硝基苯胺硝基苯胺（GGCN）和-谷氨酰基转移谷氨酰基转移酶酶（GGT）偶联，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm处测其吸光度，以反映ACE活性。第四页，本课件共有14页试剂试剂 （1 1）三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：底物液：用底物液：用5mmol/L5mmol/L的的TrisTris溶液溶液配制配制30mmol/L HGG30mmol/L HGG溶液
4、，此液中含溶液，此液中含0.4mol/L0.4mol/LNaNa2 2SOSO4 4、0.3mol/L NaCl0.3mol/L NaCl，调，调pH7.3pH7.3。0.1mol/L0.1mol/L硼酸硼酸盐盐缓冲液缓冲液（pH9.0pH9.0）。）。100g/L100g/L钨酸钠（含钨酸钠（含2 2个水）溶液。个水）溶液。0.33mol/L NaSO0.33mol/L NaSO4 4。60mmol/L TNBS60mmol/L TNBS溶液溶液第五页，本课件共有14页（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：50mmol/L HEPES50mmol/L HEPES缓冲液：称羟、乙基缓冲液：称羟、乙基
5、哌嗪哌嗪乙磺酸（乙磺酸（HEPESHEPES）1.191g1.191g，加双，加双蒸馏蒸馏水水100ml100ml溶解溶解，用于配制，用于配制GGTGGT、CGCNCGCN和和基质基质缓冲液。缓冲液。20kU/L GGT20kU/L GGT贮存液：取贮存液：取HEPESHEPES缓冲液缓冲液5ml5ml，加入，加入GGT 100UGGT 100U，混匀后分装小瓶，混匀后分装小瓶，2020。保存保存。6.7kU/L GGT6.7kU/L GGT应用液：将上述贮存液用二倍量的应用液：将上述贮存液用二倍量的HEPESHEPES稀释配制。稀释配制。0.1mmol/L GGCN0.1mmol/L GGC
6、N溶液：称溶液：称GGCN 20mgGGCN 20mg，加入，加入50mmol/L HEPES 60ml50mmol/L HEPES 60ml，溶解后，溶解后4 4保存。保存。第六页，本课件共有14页基质缓冲液：称基质缓冲液：称HEPES 1.191gHEPES 1.191g，NaCl 1.755gNaCl 1.755g，NaNa2 2SOSO4 45.68g5.68g，用双蒸馏水溶解，用双蒸馏水溶解后，用后，用NaOHNaOH调调pHpH至至8.08.0，再补充双蒸馏水至，再补充双蒸馏水至100ml100ml，4 4保存。保存。基质液：由基质液：由Hip-Gly-Gly 89.5mgHip-
7、Gly-Gly 89.5mg加基质缓冲液加基质缓冲液10ml10ml溶解混合而成。此液各试剂终溶解混合而成。此液各试剂终浓度为：浓度为：HEPES 50mmol/LHEPES 50mmol/L，NaCl 30mmol/LNaCl 30mmol/L，NaNa2 2SOSO4 4400mmol/L400mmol/L，Hip-Gly-Gly Hip-Gly-Gly 30mmol/L30mmol/L。10mmol/L10mmol/L双甘肽标准液：称双甘肽标准液：称Gly-Gly 52.9mgGly-Gly 52.9mg加双蒸馏水溶解，并稀释至加双蒸馏水溶解，并稀释至100ml100ml，此为贮存液（此
8、为贮存液（40mmol/L40mmol/L）。）。1 1份贮存液和份贮存液和3 3份双蒸馏水混合即为应用液。份双蒸馏水混合即为应用液。第七页，本课件共有14页正常值正常值（1 1）三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：26.126.156.7kU/L56.7kU/L。（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：12-68U/L12-68U/L。第八页，本课件共有14页化验结果临床意义化验结果临床意义血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断，对其他系统疾病的诊疗也有一定价值。(1)肺部疾病：绝大多数结节病结节病患者患者血清ACE活力升高，其阳性率及幅度与病活动活动与否和病变累及的
9、范围有关。肺结核肺结核也可升高，而哮喘哮喘发作、急性心原性肺水肿肺水肿、慢性阻塞性肺疾患、自发性气胸自发性气胸、肺纤维纤维化、成人呼吸窘迫综成人呼吸窘迫综合征合征等血清ACE均有不同程度下降。（2）肝脏肝脏疾病：多数肝脏病患者ACE活性升高，升高幅度依次为肝硬化肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝脂肪肝则正常。第九页，本课件共有14页（3）甲状腺甲状腺疾病：甲亢甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病，且酶活力酶活力高低与T3、T4含量呈正相关。（4）其他：糖尿病糖尿病、虹膜炎、免疫免疫母细胞肉瘤肉瘤等，血清ACE升高；高血压高血压、结肠结肠炎等则降低。第十页，本课件共有14页附注附注（1 1）
10、三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：标本标本在室温或冰箱存放在室温或冰箱存放1 1周，酶活力无明显变化，周，酶活力无明显变化，1515保存保存3 3周酶活性周酶活性稳定稳定。胆红素胆红素对对ACEACE有明显有明显抑制抑制作用，故重度作用，故重度黄疸黄疸可使测定结果偏低。可使测定结果偏低。EDTAEDTA是是ACEACE的强的强抑制剂，抑制剂，NaClNaCl和和NaNa2 2SOSO4 4对对ACEACE有明显的活化作用，有明显的活化作用，溶血溶血、脂血对结果无影响。、脂血对结果无影响。本法与本法与紫外分光光度法紫外分光光度法酶活力单位一致，但其酶活力单位一
11、致，但其测得值测得值为紫外法的为紫外法的9 9倍。倍。第十一页，本课件共有14页（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：当底物当底物pH 8.0pH 8.0，GGCN 1.0mmol/LGGCN 1.0mmol/L，GGT6.7ku/LGGT6.7ku/L时，时，ACEACE活性与吸光度值有良好活性与吸光度值有良好线性线性。线性范围大，即使。线性范围大，即使ACEACE在在1500U/L1500U/L，不用不用稀释也可获得稀释也可获得理想理想结果。结果。GGCNGGCN浓度选择：本浓度选择：本反应反应体系中体系中GGCNGGCN既是测定酶既是测定酶ACEACE的的受体受体，又是指示酶，又是指示酶GGT
12、GGT的供体。的供体。以以1.0mmol/L1.0mmol/L的的GGCNGGCN最理想，在此浓度下最理想，在此浓度下GGCNGGCN与吸光度与吸光度保持保持良好的线性。良好的线性。GGTGGT对测定的影响：本反应利用对测定的影响：本反应利用GGTGGT将双甘肽与将双甘肽与GGCNGGCN偶联，生成黄色的偶联，生成黄色的3-3-羧基羧基-4-4-硝基苯胺，其加入量可直接影响测定结果。硝基苯胺，其加入量可直接影响测定结果。GGTGGT高浓度可使底物过度消耗，使吸高浓度可使底物过度消耗，使吸光度偏离曲线；低浓度光度偏离曲线；低浓度GGTGGT又使吸光度偏低，又使吸光度偏低，灵敏度灵敏度不高。每次加入不高。每次加入0.335 U GGT0.335 U GGT，可获得理想吸光度与线性。在此浓度下，酶基质液的空白管吸光度，可获得理想吸光度与线性。在此浓度下，酶基质液的空白管吸光度0.1A0.1A。第十二页，本课件共有14页相相关关疾疾病病 结节病、肺结核、肺水肿、自发性气胸、结节病、肺结核、肺水肿、自发性气胸、气胸气胸、肝硬化、脂、肝硬化、脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黄疸肪肝、糖尿病、肉瘤、黄疸第十三页，本课件共有14页2023/3/2感感谢谢大大家家观观看看第十四页，本课件共有14页