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1、关于菊花的组织培养第一页，本课件共有32页课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养第二页，本课件共有32页第三页，本课件共有32页1、熟悉植物组织培养的基本过程、熟悉植物组织培养的基本过程2、了解植物组织培养的影响因素、了解植物组织培养的影响因素3、掌握植物组织培养的操作过程、掌握植物组织培养的操作过程 示示 标标第四页，本课件共有32页什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？.植物组织培养应用的理论基础是什么植物组织培养应用的理论基础是什么植物组织培养应用的理论基础是什么植物组
2、织培养应用的理论基础是什么?愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？组织培养的过程？脱分化、再分化？组织培养的过程？脱分化、再分化？植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？躬躬 学学第五页，本课件共有32页1、细胞分化、细胞分化2、细胞的全能性、细胞的全能性3、愈伤组织、愈伤组织4、脱分化、脱分化5、再分化、再分化6、外植体、外植体需要了解的几个概念
3、需要了解的几个概念第六页，本课件共有32页1、细胞分化细胞分化细胞分化细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现结构和生理功能上都会出现稳定性的差异稳定性的差异，形成这些差形成这些差形成这些差形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因选择性表达基因选择性表达基因选择性表达基因选择性表达的的结果。结果。2、细胞的全能性细胞的全能性细胞的全能性细胞的全能性：已分化已分化的植物细胞仍然具有发育成为的植物细胞仍然具有发育成为完整个体的潜
4、能。完整个体的潜能。3、愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织：由由由由离体离体离体离体的植物器官、组织或细胞在一定的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过的培养条件下经过脱分化脱分化脱分化脱分化过程形成的组织，就叫愈伤组过程形成的组织，就叫愈伤组过程形成的组织，就叫愈伤组过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞织，愈伤组织的细胞织，愈伤组织的细胞织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则排列疏松而无规则排列疏松而无规则排列疏松而无规则，是一种高度液泡是一种高度液泡是一种高度液泡是一种高度液泡化的呈无定形状态的化的呈无定形状态的化的呈无定形状态的化的呈无定形状态的薄壁薄壁细胞。细胞。4、脱分化脱分化
5、：由由高度分化高度分化的植物组织或细胞产生的植物组织或细胞产生愈伤组愈伤组织织的过程，称为脱分化，又叫去分化。的过程，称为脱分化，又叫去分化。5 5、再分化再分化：脱分化产生的：脱分化产生的愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织继续进行培养，继续进行培养，继续进行培养，继续进行培养，又又可可以以重新分化重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。6、外植体外植体外植体外植体：用于：用于离体离体培养的植物器官或组织片段。培养的植物器官或组织片段。第七页，本课件共有32页 愈伤组织：愈伤组织：离体
6、的植物器官、组织或细胞通过离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的脱分化形成的疏松而无规则疏松而无规则的，高度液泡化的呈的，高度液泡化的呈无定形状态无定形状态的的,未分化的未分化的薄壁细胞薄壁细胞2-3周，愈伤组织开始形成。周，愈伤组织开始形成。第八页，本课件共有32页 再分化：再分化：愈伤组织愈伤组织继续培养，继续培养，重新重新分化成根和芽分化成根和芽等器官的过程。等器官的过程。3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。周之后，诱导出的新叶片和芽。第九页，本课件共有32页离体的植物离体的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体植物组织培养的基
7、本过程植物组织培养的基本过程第十页，本课件共有32页（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素 材料的选择、材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。第十一页，本课件共有32页MS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例同微生物培养基相比，同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？培养基的配方有哪些明显的不同？第十二页，本课件共有32页微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生培养基则需提供大量无机营养，无机盐混
8、合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。长必须的大量元素和微量元素两大类。阅读课文，思考以下问题阅读课文，思考以下问题1.同微生物培养基相比，同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？培养基的配方有哪些明显的不同？2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？条件是什么？组织的脱分化及愈伤组织的再分化。组织的脱分化及愈伤组织的再分化。植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是的最重要因素是植物激素植物激素。第十三页，本课件共有32页
9、激素配比对组织培养的影响激素配比对组织培养的影响在培养基中需要添加在培养基中需要添加生长素生长素和和细胞分裂素细胞分裂素等植物激素，其等植物激素，其浓度浓度、使使用的先后顺序用的先后顺序、用量的比例用量的比例等都影响结果。等都影响结果。高高 利于根分化、抑制芽的形成利于根分化、抑制芽的形成生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素 低低 利于芽的形成利于芽的形成适中适中 利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成 第十四页，本课件共有32页活动活动2：用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来来?（提示：怎样配制（提示：怎样配制（提示：怎样配制（提示：怎样配制MS
10、培养基培养基?外植体消毒应如外植体消毒应如何进行何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题接种、培养、移栽时应注意什么问题接种、培养、移栽时应注意什么问题接种、培养、移栽时应注意什么问题?）第十五页，本课件共有32页（一）制备（一）制备MS培养基培养基（二）外植体消毒（二）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培实验操作流程实验操作流程：第十六页，本课件共有32页2、实验具体操作、实验具体操作（1）制备）制备MS固体培养基固体培养基 实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母保存的配制好的培养基母液来制备液来制备配制各种母液配制各种母液
11、 配制母液时，大量元素浓缩配制母液时，大量元素浓缩_ _，微量元素，微量元素浓缩浓缩_ _，常温保存常温保存。激素类、维生素类以及。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照用量比较小的有机物可以按照_的质量浓度的质量浓度单独配制母液。单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，倍数，计算用量计算用量。1mg/ml410倍倍100倍倍第十七页，本课件共有32页配制培养基。配制培养基。2、实验具体操作、实验具体操作（1）.制备制备MS固体培养基固体培养基实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来保存的配制好的培养基母液
12、来制备制备4植物激素植物激素在菊花组织培养中，可以不添加在菊花组织培养中，可以不添加_，原，原因是菊花茎段组织培养因是菊花茎段组织培养_。比较容易比较容易配制培养液配制培养液调调PHPH培养基的分装培养基的分装 第十八页，本课件共有32页灭菌灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行将分装好的培养基连同其他器械一起进行_。2、实验具体操作、实验具体操作（1）.制备制备MS固体培养基固体培养基实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制保存的配制好的培养基母液来制备备4高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌第十九页，本课件共有32页2、实验具体操作、实验具体操作（2）外植体消毒）外植体消毒 选取菊
13、花茎段时，要取选取菊花茎段时，要取 _。流水流水冲洗冲洗酒精酒精无菌水无菌水氯化汞氯化汞无菌水无菌水消毒流程：消毒流程：浓度浓度_摇动摇动_次次时间时间_s浓度浓度_时间时间_min至少清洗至少清洗_次次漂净漂净_生长旺盛的嫩枝生长旺盛的嫩枝70%23670.1%123消毒消毒液液第二十页，本课件共有32页 不是。对外植体进行表面消毒时，既不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。受能力。在外植体消毒过程中，是不是强度在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？越大越好，为什么？思思 考考第二十一页，本课件共有32页2、
14、实验具体操作、实验具体操作（3）接种）接种 前期准备：用前期准备：用_消毒工作台，点燃酒消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用都要用_灭菌。灭菌。接种操作：插入外植体时接种操作：插入外植体时_端朝上，每端朝上，每个锥形瓶接种个锥形瓶接种_个外植体。个外植体。70的酒精的酒精火焰灼烧火焰灼烧形态学上形态学上68第二十二页，本课件共有32页你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？思思 考考 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实
15、验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第二十三页，本课件共有32页2、实验具体操作、实验具体操作（4）培养）培养 接种后的锥形瓶最好放在接种后的锥形瓶最好放在_中培养。中培养。培养期间定期进行培养期间定期进行_，温度控制在，温度控制在_，并且，并且每天每天用日光灯光照用日光灯光照_h h。无菌箱无菌箱182212消毒消毒了解：了解：光照条件光照条件第二十四页，本课件共有32页2、实验具体操作、实验具
16、体操作（5）移栽）移栽 移栽生根的试管苗之前，应先移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗日；然后用流水清洗_，将幼苗移植，将幼苗移植到到_等等环境中生活一段时间，进行壮环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。苗。最后进行露天栽培。根部培养基根部培养基消过毒的蛭石或珍珠岩消过毒的蛭石或珍珠岩第二十五页，本课件共有32页1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养
17、；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思思 考考第二十六页，本课件共有32页三、三、结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格第二十七页，本课件共有32页外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造外植体在培养过程
18、中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？成污染的原因有哪些？污染物如何处理？污染物如何处理？思思 考考第二十八页，本课件共有32页1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁结合录像结合录像外植体灭菌与接种操作外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主要途，谈谈组织培养污染的主要途径及怎样预防污染？径及怎样预防污染？第二十九页，本课件共有32页污染的预防措施污染的预防措施（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁第三十页，本课件共有32页试评价下列操作正确与否试评价下列操作正确与否第三十一页，本课件共有32页感感谢谢大大家家观观看看第三十二页，本课件共有32页