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1、关于菊花的组织培养综合版第一页，本课件共有51页第二页，本课件共有51页第三页，本课件共有51页 菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统名花和是我国的传统名花和世界四大切花之一世界四大切花之一 长期以来菊花采用长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长繁殖周期长,随着市场需随着市场需 求的急剧增加求的急剧增加,已经不能满足市场日益发展的需要。已经不能满足市场日益发展的需要。植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点植物组织培养具有增殖效率
2、高、繁殖速度快的特点,可以用较可以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗第四页，本课件共有51页扦插扦插嫁接嫁接压条压条 第五页，本课件共有51页n植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程n影响植物组织培养的因素影响植物组织培养的因素n菊花的组织培养菊花的组织培养第六页，本课件共有51页植物组织培养关键词：关键词：外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织 在在无菌无菌和和人工控制人工控制条件下，将离体植条件下，将离体植物的物的器官、组织、细胞器官、组织、细胞或或原生质体原生质体，培养在人工配置的培养基上，给予适培养在人工配置
3、的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成丛芽，最终形成完整的植株完整的植株。第七页，本课件共有51页切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化举例举例第八页，本课件共有51页1 1、培育无病毒植株、培育无病毒植株2 2、大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗烫伤大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）4 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法、基因工程中亦需用到植物组
4、织培养的方法（受体细胞为植物细胞）（受体细胞为植物细胞）植物组织培养的应用：植物组织培养的应用：3 3、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差，、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题）结子困难或发芽率低等问题）第九页，本课件共有51页愈伤组织愈伤组织第十页，本课件共有51页人工种子人工种子第十一页，本课件共有51页植物组织培养过程植物组织培养过程:离离体体组组织织或或细细胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化细胞分细胞分细胞分细胞分裂素裂素裂素裂素生长素生长素生长素生长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽芽芽根根细胞分裂细胞分裂素素 生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素
5、细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长第二十一页，本课件共有51页（4）pH、温度、光照、温度、光照pH控制在控制在5.8左右左右温度控制在温度控制在1822每日用日光灯照射每日用日光灯照射12h第二十二页，本课件共有51页菊花的组织培养菊花的组织培养（
6、一）制备一）制备MSMS固体培养基固体培养基（二）外植体消毒（二）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培第二十三页，本课件共有51页（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMSMSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4保保存配制好的培养基存配制好的培养基母液母液来制备来制备来制备来制备1 1、配制各种母液、配制各种母液无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩10101010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩
7、倍，微量元素浓缩100100倍，倍，倍，倍，常温保存常温保存常温保存常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量计算用量计算用量计算用量第二
8、十四页，本课件共有51页2 2、配制培养基、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素不必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌汽灭菌第二十五页，本课件共有51页1 1 1 1、选材：、选材：、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2 2 2、消毒
9、、消毒、消毒、消毒流水冲洗流水冲洗流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗刷洗，刷洗后在流水下冲洗刷洗，刷洗后在流水下冲洗刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min20min20min左右左右 酒精处理酒精处理酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70
10、707070的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动2 2 2 23 3 3 3次，持续次，持续次，持续次，持续6 67s7s7s7s，立即将外植，立即将外植，立即将外植，立即将外植体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗 消毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为量分数为量分数为量分数为0.10.10.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液
11、中的氯化汞溶液中1 1 1 12min2min2min2min，取出后，取出后在无菌水中至少清洗在无菌水中至少清洗3 3 3 3次，漂净次，漂净次，漂净次，漂净消毒液消毒液第二十六页，本课件共有51页（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用是至关重要的。用是至关重要的。用是至关重要的。用70707070的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，酒精或酒精或酒精或酒精或新洁
12、尔灭搽洗工作台并用紫外线照射新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20202020分钟分钟分钟分钟1 1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种第二十七页，本课件共有51页4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放
13、入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75757575的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种却后再接种却后再接种却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡
14、萝卜3 34 4 4 4块，菊的茎或块，菊的茎或块，菊的茎或块，菊的茎或叶叶叶叶6 6 6 68 8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件和光照条件和光照条件和光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分基利于吸收水分和养分基利于吸收水分和养分基利于吸收水分和养分第二
15、十九页，本课件共有51页正常苗正常苗污染苗污染苗第三十页，本课件共有51页1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种器、培养基及接种器具灭菌不彻底具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径第三十一页，本课件共有51页思考：你打算做几组重复？你打算设置思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说锥形瓶，与接种操作后的锥形
16、瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第三十二页，本课件共有51页（四）培养（四）培养n接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒养期间应定期消毒n培养温度控制在培养温度控制在18-22n每日用日光灯光照每日用日光灯光照12h第三十三页，本课件共有51页（五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移 用流水清洗根部的培养基
17、，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间3 3、移栽、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中第三十四页，本课件共有51页固体基质型，含水量高、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培蓄水性强、透性好，适合栽培珍珠岩珍珠岩,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩珠的结构，所以被命名为珍珠岩。蛭石蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用
18、下会膨胀的矿是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。第三十五页，本课件共有51页（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花第三十六页，本课件共有51页 1、甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这殖脱毒的种苗，以保证该品种
19、的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的的（）A.有丝分裂有丝分裂 B.分化分化 C.减数分裂减数分裂 D.全能性全能性 练习练习C第三十七页，本课件共有51页n解析：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段解析：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间后，脱分化，通过细胞分裂，形成愈伤组织；时间后，脱分化，通过细胞分裂，形成愈伤组织；脱分化的愈伤组织继续培养，又可重新分化成根或脱分化的愈伤组织继续培养，又可重新分化成根或芽等器官；再分化形成的试管苗，移栽到地里，可芽等器官；再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整
20、的植物体。由愈伤组织发育为完整的以发育成完整的植物体。由愈伤组织发育为完整的植物体体现了细胞的全能性。植物组织培养的过程植物体体现了细胞的全能性。植物组织培养的过程是无性繁殖的过程，不涉及减数分裂，减数分裂是是无性繁殖的过程，不涉及减数分裂，减数分裂是生物在进行有性生殖的过程中的一种分裂方式。本生物在进行有性生殖的过程中的一种分裂方式。本题解决的关键是要了解植物的组织培养过程。题解决的关键是要了解植物的组织培养过程。第三十八页，本课件共有51页2、（2004年广东模拟题）植物细胞表现出全能性的必要条件是nA.导入其他植物细胞的基因nB.将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中nC.用适当浓度的秋水仙
21、素处理nD.脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的温度等外界条件 C第三十九页，本课件共有51页n解析：植物细胞只有脱离了植物体，在一定解析：植物细胞只有脱离了植物体，在一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织细胞发育、分化出新的植物体。细胞发育、分化出新的植物体。第四十页，本课件共有51页3、动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于nA.培养基不同nB.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行nC.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能nD.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株A第四十一
22、页，本课件共有51页n解析：动物细胞培养所用的培养基是液解析：动物细胞培养所用的培养基是液体培养基，其中通常含有葡萄糖、氨基体培养基，其中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。植酸、无机盐、维生素和动物血清等。植物组织培养所用的培养基是固体培养基。物组织培养所用的培养基是固体培养基。第四十二页，本课件共有51页4、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的需要的nA.消毒灭菌nB.适宜的温度nC.充足的光照 nD.适宜的养料和激素C第四十三页，本课件共有51页n解析：
23、离体的植物器官、组织或细胞脱分化过程是在无菌条件下进行的，在愈伤组织形成过程中，需要适宜的温度、一定的营养物质和植物激素的诱导，但不需要阳光。第四十四页，本课件共有51页n4如图所示，图为植物组织培养流程图，图为植物组织培养过程的部分示意图，请据图回答：第四十五页，本课件共有51页n(1)植物组织培养依据的原理是_。n(2)图中外植体是指从植物_中分离出来的。n(3)图中的和图A中培养基上的培养物都是由无特定形态与功能的细胞组成的，称为_。n(4)图中D培养物已经形成幼体。请根据植物组织培养过程对图重新排序：_。植物细胞的全能性植物细胞的全能性器官、组织器官、组织愈伤组织愈伤组织BADC第四十
24、六页，本课件共有51页解析：植物组织培养的基本原理是细胞的全能性。离体的植物器官或组织片段先脱分化形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。愈伤组织继续进行培养，再分化成根或芽等器官，最终发育成完整的植物体。第四十七页，本课件共有51页n5下图是某一植株的形成层细胞，通过无菌操作，接入试管后，在一定条件下形成试管苗的培育过程，已知该植株有10对染色体。(1)愈伤组织是形成层细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，在愈伤组织的形成过程中，必须从培养基中获得_和小分子有机物等营养物质。(2)试管苗的细胞核中含有_个DNA分子。(3)该实验说明植物细胞具有_
25、性。(4)该试管苗的形成经历了_等几个过程。水、无机盐、维生素水、无机盐、维生素20全能全能细胞分裂细胞分裂细胞分化细胞分化组织、器官的形成组织、器官的形成新个体新个体第四十八页，本课件共有51页解析：此题中，形成层细胞是已分化的细胞，但它在一定条件下仍可发育为一新植株，即表现了全能性，在这一发育过程中，它同样要经历多细胞生物发育的过程：细胞分裂、细胞分化、组织器官的形成、新个体的形成。第四十九页，本课件共有51页三、课题延伸三、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养易进行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季第五十页，本课件共有51页感谢大家观看第五十一页，本课件共有51页