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1、关于流式细胞分析1 1第一页，本课件共有54页2 2 流式细胞仪（流式细胞仪（流式细胞仪（流式细胞仪（FlowCytometerFlowCytometer简称简称简称简称FCMFCM）是一项集激光技）是一项集激光技）是一项集激光技）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞荧光化术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞荧光化术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞荧光化术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，学技术、单克隆抗体技术为一
2、体的新型高科技仪器。概括来说，学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。从开始设想粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。从开始设想粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。从开始设想粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。从开始设想到第一台仪器的问世到第一台仪器的问世到第一台仪器的问世到第一台仪器的问世,科技工作
3、者进行了不懈的努力。随着各相科技工作者进行了不懈的努力。随着各相科技工作者进行了不懈的努力。随着各相科技工作者进行了不懈的努力。随着各相关技术的迅速发展，关技术的迅速发展，关技术的迅速发展，关技术的迅速发展，FCMFCM技术已经成为日益完善的细胞分析和分技术已经成为日益完善的细胞分析和分技术已经成为日益完善的细胞分析和分技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的工具。选的工具。选的工具。选的工具。第二页，本课件共有54页3 3 FCMFCM仪器分为二大类：仪器分为二大类：仪器分为二大类：仪器分为二大类：一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固定，自动一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固
4、定，自动一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固定，自动一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。化程度高，操作简便，易学易掌握。化程度高，操作简便，易学易掌握。化程度高，操作简便，易学易掌握。BDBD公司的临床型公司的临床型公司的临床型公司的临床型FACScanFACScan也是最早可用于临床诊断的仪器。也是最早可用于临床诊断的仪器。也是最早可用于临床诊断的仪器。也是最早可用于临床诊断的仪器。另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出来，另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出来，另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细
5、胞分选出来，另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上，同并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上，同并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上，同并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究应用。研究应用。研究应用。研究应用。第三页，本课件共有54页4 4 流式细胞仪实
6、物BD FACSVantageBD-Calibur 第四页，本课件共有54页5 5其特点是：其特点是：其特点是：其特点是：测量速度快，最快可在测量速度快，最快可在测量速度快，最快可在测量速度快，最快可在1 1秒种内计测数万个细胞；秒种内计测数万个细胞；秒种内计测数万个细胞；秒种内计测数万个细胞；可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；化学特性的多参数测量，并具有
7、明显的统计学意义；化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；成果；成果；成果；既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。既是细胞分析技术，又是精确的
8、分选技术。既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。第五页，本课件共有54页6 6概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。分析技术等。FCMFCM目前发展的水平凝聚了半个世目前发展的水平凝聚了半个世目前发展的水平凝聚了半个世目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。纪以来人们在这方面的心血和成果。纪以来人们在这方面的心血和成果。纪以来人们在这方面的心血和成果。第六页，本课件共有54页7 7流式细胞仪发展的历史流式细胞仪发展的历史起源:1934年
9、-细胞计数仪雏形:1949年-Coulter计数器1959年-B型Coulter计数器1972年:BD(Becton-DickinsonBecton-Dickinson)第一台流式细胞仪第一台流式细胞仪,具有分选功能具有分选功能第七页，本课件共有54页8 8 流流流流式式式式细细细细胞胞胞胞仪仪仪仪主主主主要要要要由由由由三三三三部部部部分分分分组组组组成成成成：流流流流动动动动室室室室和和和和液液液液流流流流系系系系统；光路系统以及电系统。其作用如下：统；光路系统以及电系统。其作用如下：统；光路系统以及电系统。其作用如下：统；光路系统以及电系统。其作用如下：液液流流系系统统：依依次次传传送送
10、待待测测样样本本中中的的细细胞胞到到激激光光照射区。照射区。光光光光路路路路系系系系统统统统：细细细细胞胞胞胞由由由由激激激激光光光光激激激激发发发发，通通通通过过过过光光光光学学学学滤滤滤滤片片片片产产产产生生生生光信号，并传送到相应的探测器。光信号，并传送到相应的探测器。光信号，并传送到相应的探测器。光信号，并传送到相应的探测器。电系统：把光信号转换为电信号。电系统：把光信号转换为电信号。第八页，本课件共有54页9 9在在在在流流流流式式式式细细细细胞胞胞胞仪仪仪仪中中中中，细细细细胞胞胞胞被被被被传传传传送送送送到到到到液液液液流流流流中中中中的的的的激激激激光光光光照照照照射射射射区区
11、区区。任任任任何何何何存存存存在在在在于于于于悬悬悬悬液液液液中中中中的的的的直直直直径径径径为为为为0.2-1500.2-150微微微微米米米米的的的的粒粒粒粒子子子子或或或或细细细细胞胞胞胞都都都都适适适适用用用用于于于于流流流流式式式式分分分分析析析析。在在在在实实实实际际际际工工工工作作作作中中中中，用用用用实实实实体体体体组组组组织织织织进进进进行行行行流流流流式式式式细细细细胞胞胞胞分分分分析析析析往往往往往往往往是是是是不不不不可可可可能能能能的的的的，分分分分析析析析之之之之前前前前必必必必须须须须对对对对其其其其进进进进行行行行分分分分解解解解。被被被被液液液液滴滴滴滴包包包
12、包绕绕绕绕的的的的粒粒粒粒子子子子称称称称为为为为细细细细胞胞胞胞液液液液柱柱柱柱，当当当当粒粒粒粒子子子子经经经经过过过过激激激激光光光光照照照照射射射射区区区区时时时时，通通通通过过过过激激激激光光光光激激激激发发发发产产产产生生生生散散散散射射射射光光光光。含含含含有有有有荧荧荧荧光光光光的的的的粒粒粒粒子子子子就就就就会会会会表表表表现现现现出出出出其其其其荧荧荧荧光光光光特特特特性性性性。散散散散射射射射光光光光和和和和荧荧荧荧光光光光由由由由光光光光路路路路系系系系统统统统（相相相相应应应应的的的的透透透透镜镜镜镜，滤滤滤滤片片片片和和和和探探探探测测测测器器器器）收收收收集集集集
13、。分分分分光光光光器器器器和和和和滤滤滤滤光光光光片片片片引引引引导导导导散散散散射射射射光光光光和和和和荧荧荧荧光光光光至至至至相相相相应的探测器，把光信号转换为电信号。应的探测器，把光信号转换为电信号。应的探测器，把光信号转换为电信号。应的探测器，把光信号转换为电信号。第九页，本课件共有54页1010第十页，本课件共有54页1111液流系统液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想状态是把细胞传
14、送到激光束的中心。而且在特定时间内，应该只有一状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内，应该只有一状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内，应该只有一状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内，应该只有一个细胞或粒子通过激光束。个细胞或粒子通过激光束。个细胞或粒子通过激光束。个细胞或粒子通过激光束。因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。流动室是液流系统的核心因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。流动室是液流系统的核心因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。流动室是液流系统的核心因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。流动室是液流系统的核心部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机
15、称之为喷嘴。在流动室内部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为喷嘴。在流动室内部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为喷嘴。在流动室内部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为喷嘴。在流动室内细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。第十一页，本课件共有54页1212Flow CellInjector TipFluorescenceFluorescencesignalssignalsFocused laserFocused laserbeambeamS
16、heath fluid第十二页，本课件共有54页1313第十三页，本课件共有54页1414 高高流流速速适适用用于于定定性性测测量量，如如免免疫疫表表型型。样样本本流流变变宽宽，细细胞胞间间距距离离缩缩短短，这这样样在在单单位位时时间间内内流流经经激激光光照照射区的细胞数量增加，可以快速获取数据。射区的细胞数量增加，可以快速获取数据。低低流流速速促促使使样样本本流流变变窄窄，单单个个细细胞胞得得以以依依次次通通过过，这这样样大大多多数数细细胞胞可可流流经经激激光光束束的的中中心心，细细胞胞受受激激光光照照射射的的能能量量比比较较均均一一，因因而而低低流流速速适适用用于于检检测测分辨率要求高的实
17、验，如分辨率要求高的实验，如DNA分析。分析。第十四页，本课件共有54页1515散射光信号和荧光信号的检测散射光信号和荧光信号的检测前向角散射：前向角散射（前向角散射：前向角散射（FSC）光与被测细胞光与被测细胞光与被测细胞光与被测细胞的大小和面积有关，检测的是激光束照射方向与的大小和面积有关，检测的是激光束照射方向与的大小和面积有关，检测的是激光束照射方向与的大小和面积有关，检测的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向的散射光收集散射光信号的光电倍增管轴向方向的散射光收集散射光信号的光电倍增管轴向方向的散射光收集散射光信号的光电倍增管轴向方向的散射光信号。信号。信号。信号。FS
18、C不受细胞荧光染色的影响，常用于免疫不受细胞荧光染色的影响，常用于免疫不受细胞荧光染色的影响，常用于免疫不受细胞荧光染色的影响，常用于免疫表型分析的信号处理。表型分析的信号处理。表型分析的信号处理。表型分析的信号处理。第十五页，本课件共有54页1616Forward Angle Light Scatter前向角前向角FALS SensorLaser第十六页，本课件共有54页1717侧向角散射：侧向角散射（侧向角散射：侧向角散射（SSC）光与被光与被测细胞的颗粒密度和内部结构有关，对测细胞的颗粒密度和内部结构有关，对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感。细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感。SSC收
19、集与激光束正交收集与激光束正交90度方向的散射光度方向的散射光信号。信号。第十七页，本课件共有54页181890 Degree Light Scatter90度侧向角度侧向角FALS Sensor90LS SensorLaser第十八页，本课件共有54页1919流式细胞仪产生的信号非荧光信号颗粒度细胞大小第十九页，本课件共有54页2020上上上上述述述述两两两两种种种种信信信信号号号号都都都都是是是是来来来来自自自自于于于于激激激激光光光光原原原原光光光光束束束束，目目目目前前前前采采采采用用用用这这这这两两两两个个个个参参参参数数数数组组组组合合合合，可可可可区区区区分分分分不不不不同同同同
20、种种种种类类类类的的的的细细细细胞胞胞胞亚亚亚亚群群群群，同同同同时时时时可可可可获获获获得得得得细细细细胞胞胞胞相相相相关关关关的的的的重重重重要要要要信信信信息息息息，下下下下图图图图（图图图图3-2）为为FSC和和SSC组组成成的的二二维维散散点点图图，从从图图中中可可以以很很容容易易把把全全血样本中淋巴细胞、单核细胞及粒细胞区分开血样本中淋巴细胞、单核细胞及粒细胞区分开。第二十页，本课件共有54页2121第二十一页，本课件共有54页2222荧光信号荧光信号荧荧光光物物质质吸吸收收符符合合其其波波长长范范围围的的光光能能量量，内内部部电电子子受受激激上上升升到到高高能能级级。然然后后受受
21、激激电电子子迅迅速速衰衰落落回回基基态态，释放过剩能量成为光子。这种能量的转换称为荧光。释放过剩能量成为光子。这种能量的转换称为荧光。能能够够激激发发荧荧光光物物质质的的波波长长范范围围称称为为激激发发光光谱谱。因因为为更更多多的的能能量量消消耗耗在在吸吸收收转转换换而而不不是是荧荧光光转转换换中中，所所以以发发射射光光波波长长要要高高于于激激发发光光波波长长。荧荧光光物物质质的的发发射射波长范围叫做发射光谱。波长范围叫做发射光谱。第二十二页，本课件共有54页2323目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为目
22、前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为488488nmnm的激光器能够激发一种以上的荧光。光源的激光器能够激发一种以上的荧光。光源的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，所产的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，所产生的荧光信号愈强。生的荧光信号愈强。FITC的激发光谱如图的激发光谱如图的激发光谱如图的激发光谱如图3-3所示，所示，488488nm非常接近非常接近FITCFITC的激发光谱的峰值，所以的激发光谱的峰值，所以FITC被激发时会表现出最强荧光信号，而当被激发时会表现出最强荧光信号，而当被激发时会表现出最强荧光信号，而当被激发时会表现出最强荧光信号，而当FITC被被其波谱范围内的
23、其它波长激发时，也会检测到荧光，其波谱范围内的其它波长激发时，也会检测到荧光，但信号强度不会这么高。但信号强度不会这么高。第二十三页，本课件共有54页2424第二十四页，本课件共有54页2525第二十五页，本课件共有54页2626Fluorescein(FITC)400 nm600 nm700 nmWavelength500 nmExcitationEmission第二十六页，本课件共有54页2727Phycoerythrin(PE)400 nm600 nm700 nmWavelengthExcitationEmission500 nmFluorescent Dyes第二十七页，本课件共有54
24、页2828EthidiumEthidiumPEPEcis-Parinaric acidcis-Parinaric acidTexas RedTexas RedPE-TR Conj.PE-TR Conj.PIPIFITCFITC600 nm300 nm500 nm700 nm400 nm457350514610 632488Common Laser Lines第二十八页，本课件共有54页2929第二十九页，本课件共有54页3030对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表面抗对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表面抗对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表面抗对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细
25、胞表面抗原标记原标记原标记原标记确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使用不确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使用不确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使用不确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使用不同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的染色模式同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的染色模式同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的染色模式同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的染色模式与与与与FSC和和和和SSCSSC数据相结合，用于识别样本中的细胞数据相结合，用于识别样本中的细胞种类，并可以得到各细胞亚群的百分含量。而且，种类，并可以得到各细胞亚群的百分含量。而且，还可以对感兴趣的细胞进行再分选
26、。还可以对感兴趣的细胞进行再分选。第三十页，本课件共有54页3131FluorescenceFALS SensorFluorescence detector第三十一页，本课件共有54页3232PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersExample Channel Layout for Laser-based Flow CytometryLaser 1234Flow cell第三十二页，本课件共有54页3333台式机通常配有两根激光器：第一根激光器台式机通常配有两根激光器：第一根激光器波长为波长为488nm。第二根为波长。第二根为波长635nm的的红二
27、极管固态激光器。红二极管固态激光器。第三十三页，本课件共有54页3434数据分析数据分析 第三十四页，本课件共有54页3535ImmunophenotypingCD2CD2CD4CD4第三十五页，本课件共有54页3636n设门设门 n通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据胞，可根据FSC或细胞大小，在或细胞大小，在FSC，SSC的散的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。光特性。第三十六页，本课件
28、共有54页3737第三十七页，本课件共有54页3838直直方方图图可可直直观观单单个个参参数数的的细细胞胞数数量量。阴阴性性对对照照用用于于决决定定直直方方图图中中单单参参数数的的左左右右边边界界。左左图图中中M1为为阴阴性性对对照照峰峰。右右图图中中M2为为CD3FITC阳性峰。阳性峰。第三十八页，本课件共有54页3939第三十九页，本课件共有54页4040统统统统计计计计结结结结果果果果表表表表明明明明，整整整整个个个个事事事事件件件件共共共共记记记记录录录录了了了了60006000个个个个细细细细胞胞胞胞，门门门门内内内内淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞28912891个个个个。其其其其
29、中中中中M1M1（阴阴阴阴性性性性）细细细细胞胞胞胞619619个个个个，M2M2（CD3CD3阳阳阳阳性性性性）细细细细胞胞胞胞22722272个个个个细细细细胞胞胞胞。淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞亚亚亚亚群群群群CD3CD3阳阳阳阳性性性性百百百百分分分分含量的统计结果为：含量的统计结果为：含量的统计结果为：含量的统计结果为：M2M2：2272/2891=78.59%2272/2891=78.59%。第四十页，本课件共有54页4141 二二二二维维维维点点点点图图图图以以以以双双双双参参参参数数数数显显显显示示示示结结结结果果果果，每每每每个个个个点点点点表表表表示示示示一一一一个个个
30、个或或或或多多多多个个个个细细细细胞胞胞胞。图图图图为为为为阴阴阴阴性性性性对对对对照照照照图图图图，用用用用于于于于设设设设定定定定阴阴阴阴性性性性对对对对照照照照边边边边界界界界，全全全全图图图图划划划划分分分分为为为为四四四四个个个个象象象象限限限限，以以以以区区区区分分分分阴阴阴阴性性性性细细细细胞胞胞胞、单单单单阳阳阳阳性性性性细细细细胞胞胞胞以以以以及及及及双双双双阳阳阳阳性性性性细细细细胞胞胞胞。左左左左下下下下象象象象限限限限（LLLL）为为为为双双双双阴阴阴阴性性性性细细细细胞胞胞胞，左左左左上上上上象象象象限限限限（ULUL）为为为为Y Y轴轴轴轴阳阳阳阳性性性性细细细细胞
31、胞胞胞（CD19CD19PEPE），右右右右下下下下象象象象限限限限（LRLR）为为为为X X轴轴轴轴阳阳阳阳性性性性细细细细胞胞胞胞（CD3CD3FITCFITC），），），），右上象限右上象限右上象限右上象限（URURURUR）为双阳性细胞（为双阳性细胞（为双阳性细胞（为双阳性细胞（CD19CD19CD19CD19+/CD3/CD3/CD3/CD3+）。）。）。）。第四十一页，本课件共有54页4242如如图图5-7所所示示，淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群双双阳阳性性细细胞胞（CD19+/CD3+）的的 百百 分分 含含 量量 为为：296/2839=10.43%。第四十二页，本课件共有54页43
32、43分分 选选第四十三页，本课件共有54页4444488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detectorPurdue University Cytometry Laboratories第四十四页，本课件共有54页4545流式细胞术的临床应用流式细胞术的临床应用第四十五页，本课件共有54页46461.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态2.2.白血病白血病白血病白血病/淋巴瘤免疫分型淋巴瘤免疫分型淋巴瘤免疫分型淋巴瘤免疫分型 3.3
33、.HLA组织配型及组织配型及HLAHLA与某些疾病的关系与某些疾病的关系4.干祖细胞的定量及成分分析干祖细胞的定量及成分分析.5.5.其它其它其它其它:血小板血小板血小板血小板PAIgPAIg：粘附分子粘附分子;TCRTCR多态性检测多态性检测;肿肿瘤癌基因及瘤癌基因及 抑癌基因蛋白产物的检测抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶细胞内酶细胞内酶细胞内酶;耐药耐药耐药耐药蛋蛋蛋蛋 白白白白的分析等等。的分析等等。的分析等等。的分析等等。临床常见应用临床常见应用第四十六页，本课件共有54页4747HLA-B27HLA-B27检测检测检测检测 外周血外周血外周血外周血HLAB27HLAB27的表达及其表
34、达程度与强直性脊的表达及其表达程度与强直性脊的表达及其表达程度与强直性脊的表达及其表达程度与强直性脊柱柱柱柱炎的发生有很大炎的发生有很大炎的发生有很大炎的发生有很大程度的相关性程度的相关性程度的相关性程度的相关性.循环血中活化血小板循环血中活化血小板循环血中活化血小板循环血中活化血小板（CD62PCD62P、CD63CD63）：糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板
35、百分率和绝对值成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。血栓形成患者活化血小板水平与
36、正常人无显著差异。PTCAPTCA后后后后2424小时小时小时小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板CD62pCD62p、CD63CD63增多，可以用于预测增多，可以用于预测增多，可以用于预测增多，可以用于预测PTCAPTCA后急性缺血再发作的危险性。后急性缺血再发作的危险性。后急性缺血再发作的危险性。后急性缺血再发作的危险性。第四十七页，本课件共有54页4848微转移肿瘤细胞微转移肿瘤细胞灵敏度:10-7第四十八页，本课件共有54页4949 细
37、胞周期分析细胞周期分析:在细胞周期在细胞周期(G0G0，G1G1，S S，G2 G2，M)M)的各个时期，的各个时期，DNADNA的含量随各时相呈现出的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记周期性的变化。通过核酸染料标记DNADNA，并由流并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出分布状态，计算出G0/G1%G0/G1%，S%S%及及G2/M%G2/M%。了解细了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（胞周期蛋白（CYCLINCYCLIN）、）、Ki67Ki67、核增殖
38、抗原核增殖抗原（PCNAPCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：等，对细胞周期进行精确的分期：G0G0、G1G1、S S、G2G2、M.M.DNA含量及细胞周期分析含量及细胞周期分析第四十九页，本课件共有54页5050G2MGG0G1s0 200 400 600 8001000G0G1sG2MDNA AnalysisDNA AnalysisDNA contentCount2 2N N4 4N NNormalCellCycle第五十页，本课件共有54页51510 200 400 600 80010002N2N4N4NCountsG0/G1G2/MS异倍体PI 荧光强度荧光强度(DNA含量含量)流
39、式DNA周期示意图第五十一页，本课件共有54页5252定量分析1.检测细胞特异性标记物：FCM不但可以定性分析标记物，而且可以进行定量。用标记已知数量的荧光素分子的标准微球作参照，可以计算出每个细胞抗原定簇的个数。2.CD4绝对计数3.CD34绝对计数4.血小板绝对计数5.可溶性物质(如细胞因子)的高通量定量检测第五十二页，本课件共有54页5353血小板计数新标准血小板计数新标准(双平台法双平台法)R=红细胞数R3/血小板数R1(流式)血小板数血小板数=红细胞数(血球仪)/R(国际血液学标准化委员会(ICSH)/国际实验血液学协会(ISLH)2001)灵敏度高(1-400 x109/L)，重复性好，室内/室外变异系数均很小尤其应用于血小板预输注病人的检测(阈值:20 x109/L)第五十三页，本课件共有54页2023/3/12023/3/1感感谢谢大大家家观观看看第五十四页，本课件共有54页