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1、课题目标课题目标本课题通过尝试本课题通过尝试PCR（DNA多聚酶链式反应）技多聚酶链式反应）技术的基本操作，使学生体验术的基本操作，使学生体验PCR这一常规的分子生这一常规的分子生物学实验方法，理解物学实验方法，理解PCR的原理，讨论的原理，讨论PCR的应的应用。用。课题重点与难点课题重点与难点课题重点：课题重点：PCR的原理和的原理和PCR的基本操作。的基本操作。课题难点：课题难点：PCR的原理。的原理。基础知识基础知识 PCR原理原理知识要点：知识要点：1.细胞内参与细胞内参与DNA复制的各种组成成分与反应复制的各种组成成分与反应条件；条件；2.DNA的合成方向；的合成方向；3.Taq D
2、NA聚合酶的应用。聚合酶的应用。PCR的反应过程的反应过程知识要点：知识要点：PCR的基本步骤及每个步骤所发生的变化。的基本步骤及每个步骤所发生的变化。提示：绘图可参考教科书中图提示：绘图可参考教科书中图5-9。PCR反应中的目反应中的目的片段一般以的片段一般以2n的方式积累，其中的方式积累，其中n为反应循环次数。为反应循环次数。一个一个DNA片段在片段在30次循环后反应物中大约有次循环后反应物中大约有10亿个亿个这样的片段（这样的片段（2n=230=1 073 741 824)。提示：提示：PCR引物是根据需要扩增的目标引物是根据需要扩增的目标DNA的碱基的碱基序列来设计的。引物的设计需要丰富的分子生物学序列来设计的。引物的设计需要丰富的分子生物学实验经验，感兴趣的学生可以参考实验经验，感兴趣的学生可以参考分子克隆实验分子克隆实验指南指南（见本专题参考书目），书中有详尽的论述。（见本专题参考书目），书中有详尽的论述。