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1、第十三章第十三章基因治疗原理与研究进展基因治疗原理与研究进展2/28/20231基因治疗的概念基因治疗的概念 将将某某个个遗遗传传物物质质转转移移到到患患者者细细胞胞内内，使使其其在在体体内内发发挥挥作作用用，以以达达到治疗疾病目的的方法。到治疗疾病目的的方法。2/28/20232基因治疗分类基因治疗分类体细胞体细胞(somatic cell)somatic cell)基基因治疗因治疗生殖细胞(germlinegermline)基因治疗v只限于某一体细胞的基因的改变v只限于某个体的当代v对缺陷的生殖细胞进行矫正v当代及子代2/28/20233 内容提要内容提要l第一节第一节 基因治疗的策略基因
2、治疗的策略l第二节第二节 基因转移技术基因转移技术l第三节第三节 基因干预基因干预l第四节第四节 治疗基因的受控表达治疗基因的受控表达l第五节第五节 基因治疗的应用研究基因治疗的应用研究l第六节第六节 基因治疗的问题与展望基因治疗的问题与展望2/28/20234 第一节 基因治疗的策略一、基因置换一、基因置换二、基因添加二、基因添加三、基因干预三、基因干预四、自杀基因治疗四、自杀基因治疗五、基因免疫治疗五、基因免疫治疗2/28/20235一、基因置换（一、基因置换（gene replacement）定定义义：指指将将特特定定的的目目的的基基因因导导入入特特定定细细胞胞，通通过过定定位位重重组组
3、，导导入入的的正正常常基基因因，以以置置换换基基因因组组内原有的缺陷基因。内原有的缺陷基因。目的：目的：将缺陷基因的异常序列进行校正。将缺陷基因的异常序列进行校正。特特点点：对对缺缺陷陷基基因因的的缺缺陷陷部部位位进进行行精精确确的的原原位修复，不涉及基因组的任何改变。位修复，不涉及基因组的任何改变。2/28/20236l定定向向整整合合的的条条件件:转转导导基基因因的的载载体体与与基基因因组组DNA具具有有相相同同的的序序列列。带带有有目目的的基基因因的的载载体体就就能能找找到到同同源源重重组组的的位位点点，进进行行部部分分基基因因序序列列的的交交换换，使使基基因因置置换换这这一一治治疗疗策
4、策略略得以实现。得以实现。l基基因因同同源源重重组组技技术术又又称称为为基基因因打打靶靶(gene targeting）基因同源重组技术基因同源重组技术2/28/20237基因同源重组技术基因同源重组技术重组载体重组载体染色体染色体校正后的染色体校正后的染色体2/28/20238二、基因添加二、基因添加 (gene augmentation)定定义义：通通过过导导入入外外源源基基因因使使靶靶细细胞胞表表达达其其本本身身不表达的基因。不表达的基因。类型：类型：l在在基基因因缺缺陷陷的的细细胞胞中中导导入入相相应应的的正正常常基基因因，补补偿偿缺陷基因的功能，细胞内的缺陷基因并未除去；缺陷基因的功
5、能，细胞内的缺陷基因并未除去；l向向靶靶细细胞胞中中导导入入其其本本来来不不表表达达的的基基因因，利利用用其其表表达产物达到治疗疾病的目的。达产物达到治疗疾病的目的。2/28/20239定义：定义：采用特定的方式抑制某个基因的表达，采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使或者通过破坏某个基因的结构而使 之不能表达，以达到治疗疾病的目的。之不能表达，以达到治疗疾病的目的。例如例如反义核酸反义核酸、核酶核酶或或干扰干扰RNA技术等。技术等。三、基因干预（三、基因干预（gene interference）2/28/202310 原原理理：将将“自自杀杀”基基因因导导入入宿宿主
6、主细细胞胞中中，这这种种基基因因编编码码的的酶酶能能使使无无毒毒性性的的药药物物前前体体转转化化为为细细胞胞毒毒性性代代谢谢物物，诱诱导导靶靶细细胞胞产产生生“自自杀杀”效效应应，从从而而达达到到清清除除肿肿瘤瘤细细胞的目的。胞的目的。为恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。为恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。四、自杀基因治疗四、自杀基因治疗2/28/202311 自杀基因的作用机制自杀基因的作用机制2/28/202312lTK/GCV：单单纯纯疱疱疹疹病病毒毒（herps simplex virus,HSV）型型胸胸苷苷激激酶酶（thymidine kinase,tk）基基因因编编码码胸胸苷苷激激酶
7、酶，特特异异性性地地将将无无毒毒的的核核苷苷类类似似物物丙丙氧氧鸟鸟苷苷（ganciclovir,GCV）转转变变成成毒毒性性GCV三三磷磷酸酸核核苷苷，后后者者能能抑抑制制DNA聚聚合合酶活性，导致细胞死亡。酶活性，导致细胞死亡。（一）自杀基因系统（一）自杀基因系统lCD/5-FC：大大肠肠杆杆菌菌胞胞嘧嘧啶啶脱脱氨氨酶酶（cytosine deaminase,CD）基基因因，在在细细胞胞内内将将无无毒毒性性5-氟氟胞胞嘧嘧啶啶（5-FC）转转变变成成毒毒性性产产物物5-氟氟尿尿嘧嘧啶啶（5-FU）。）。2/28/202313 旁旁观观者者效效应应(bystander effect)：“自自
8、杀杀基基因因”导导入入后后，不不仅仅使使导导入入了了“自自杀杀基基因因”的的肿肿瘤瘤细细胞胞在在用用药药后后被被杀杀死死，而而且且与与其其相相邻邻或或远远处处的未转导的未转导“自杀基因自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。的肿瘤细胞也被杀死。明显增强了自杀基因的肿瘤杀伤作用。明显增强了自杀基因的肿瘤杀伤作用。（二）旁观者效应（二）旁观者效应2/28/202314五、基因免疫治疗五、基因免疫治疗 通通过过将将抗抗癌癌免免疫疫增增强强的的细细胞胞因因子子或或MHC基基因因导导入入肿肿瘤瘤组组织织，以以增增强强肿肿瘤瘤微微环境中的抗癌免疫反应。环境中的抗癌免疫反应。2/28/202315第二节 基因转移技术
9、 一、病毒介导的基因转移系统一、病毒介导的基因转移系统二、非病毒介导的基因转移系统二、非病毒介导的基因转移系统2/28/2023161.ex vivo（经活体）（经活体）是是指指在在体体外外将将目目的的基基因因导导入入靶靶细细胞胞，经经过过筛筛选选和和增增殖殖后后将将细细胞胞回回输输给给患患者者，使使该该基基因因在在体体内内有有效效地地表表达达相相应应产产物物，以以达达到到治治疗的目的。疗的目的。2.in vivo（活体内）（活体内）是指将目的基因直接应用于患者体内。是指将目的基因直接应用于患者体内。根据基因转移的途径不同，基因治疗分为：根据基因转移的途径不同，基因治疗分为：2/28/2023
10、17基因转移的两种途径基因转移的两种途径载体载体目的基因目的基因in vivoex vivo靶细胞靶细胞将目的基因直将目的基因直接输入体内接输入体内将目的基因导入患将目的基因导入患者靶细胞者靶细胞,体外培养体外培养将重组靶细将重组靶细胞回输体内胞回输体内2/28/202318 一、病毒介导的基因转移系统一、病毒介导的基因转移系统 病病毒毒载载体体介介导导的的基基因因转转移移效效率率较较高高，因因此此它它也也是是使使用用最最多多的的基基因因治治疗疗载载体体。据据统统计计，有有72%的的临临床床实实验验计计划划和和71%的的病病例例使使用用了了病病毒毒载载体体，其其中中用用得得最最多多的的是是逆逆
11、转录病毒载体。转录病毒载体。2/28/202319（一）逆转录病毒（一）逆转录病毒（Retrovirus）载体载体+ssRNA逆转录酶逆转录酶核心蛋白核心蛋白膜蛋白膜蛋白人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒（HIV）2/28/202320逆转录病毒的生活周期逆转录病毒的生活周期2/28/202321两端各有一长末端重复序列两端各有一长末端重复序列LTRLTR。LTR由由U3、R和和U5三三部部分分组组成成，内内含含增增强强子子、启启动动子、子、poly(A)加尾信号及病毒整合序列加尾信号及病毒整合序列(IS)。病病毒毒有有三三个个结结构构基基因因：gag、pol和和env基基因因（编编码包装蛋白）
12、。码包装蛋白）。5端端LTR下下游游有有一一段段病病毒毒包包装装所所必必需需的的序序列列（）等。等。1.1.逆转录病毒前病毒的结构特点逆转录病毒前病毒的结构特点2/28/2023222.逆转录病毒介导的基因转移系统逆转录病毒介导的基因转移系统l逆转录病毒载体逆转录病毒载体 保保留留病病毒毒颗颗粒粒的的包包装装信信号号，而而缺缺失失病病毒毒颗颗粒粒包包装装蛋蛋白白基基因因；它它可可以以克克隆隆并并表表达达外外源源基基因因，但不能自我包装成有增殖能力的病毒颗粒。但不能自我包装成有增殖能力的病毒颗粒。LTR therapeutic gene LTR2/28/202323 2.逆转录病毒介导的基因转移
13、系统逆转录病毒介导的基因转移系统l辅助细胞株辅助细胞株 它它由由另另一一种种缺缺陷陷型型逆逆转转录录病病毒毒感感染染构构建建而而成成。该该细细胞胞株株能能合合成成包包装装蛋蛋白白，用用于于逆逆转转录录病病毒毒载载体体包包装装。由由于于缺缺乏乏包包装装型型号号，本身不能被包装成病毒颗粒。本身不能被包装成病毒颗粒。gag pol env2/28/202324逆转录病毒包装系统逆转录病毒包装系统2/28/202325逆逆转转录录病病毒毒携携带带的的遗遗传传物物质质高高效效地地进进入入靶靶细胞。细胞。逆逆转转录录病病毒毒结结构构基基因因缺缺失失，但但不不影影响响其其他他部分的活性。部分的活性。前前病病
14、毒毒通通过过LTR高高效效整整合合至至靶靶细细胞胞基基因因组组中中，有有利利于于外外源源基基因因在在靶靶细细胞胞中中的的永永久久表表达达。包装好的假病毒颗粒易于分离制备。包装好的假病毒颗粒易于分离制备。3.逆转录病毒载体的特点逆转录病毒载体的特点 2/28/202326 4.逆转录病毒载体的主要缺点逆转录病毒载体的主要缺点 随随机机整整合合，有有插插入入突突变变、激激活活癌癌基基因因的的潜在危险潜在危险；逆逆转转录录病病毒毒载载体体的的容容量量较较小小，只只能能容容纳纳7 kb以下以下的外源基因。的外源基因。2/28/202327 （二）腺病毒（二）腺病毒(adenovirus，AV)载体载体
15、2/28/202328 腺腺病病毒毒是是一一种种大大分分子子(36 kb)双双链链无无包包膜膜DNA病病毒毒。它它通通过过受受体体介介导导的的内内吞吞作作用用进进入入细细胞胞内内，然然后后腺腺病病毒毒基基因因组组转转移移至至细细胞胞核核内内，保保持持在在染染色色体体外外，不不整整合合进进入宿主细胞基因组中。入宿主细胞基因组中。2/28/2023291.1.腺病毒载体的优点腺病毒载体的优点基因导入效率高；基因导入效率高；宿主范围广；宿主范围广；基因转导与细胞分裂无关基因转导与细胞分裂无关；重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸入或气管内滴注；雾吸入或气管内滴
16、注；腺病毒载体腺病毒载体容量较大容量较大，可插入，可插入7.5 kb外源基外源基因。因。2/28/202330 2.腺病毒载体缺点腺病毒载体缺点不能整合到靶细胞的基因组不能整合到靶细胞的基因组DNADNA中。治疗中。治疗基因表达时间相对较短。基因表达时间相对较短。宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。暂。部分环节可能产生复制型腺病毒。部分环节可能产生复制型腺病毒。靶向性差。靶向性差。2/28/202331（三三）腺腺相相关关病病毒毒（adeno-associated virus,AAV）载体载体 AAV是是一一类类单单链链线线状状DNA缺缺陷陷型型病病毒毒。其
17、其基基因因组组DNA小小于于5 kb，无无包包膜膜。AAV不不能能独独立立复复制制，只只有有在在辅辅助助病病毒毒存存在在时时，才才能能进进行行复复制制和和溶溶细细胞胞性性感感染染，否否则则只只能能建建立溶源性立溶源性潜伏感染潜伏感染。2/28/202332腺相关病毒基因组的结构腺相关病毒基因组的结构：包装信号序列；：包装信号序列；REP:REP:病毒复制基因；病毒复制基因；CAP:CAP:编码衣壳蛋白的基因；编码衣壳蛋白的基因；ITRITR：反向末端重复序列：反向末端重复序列2/28/2023331.AAV的特点的特点以潜伏感染为主；以潜伏感染为主；高效高效定点整合定点整合至人染色体中，避免随
18、机至人染色体中，避免随机整合可能带来的抑癌基因失活和原癌基整合可能带来的抑癌基因失活和原癌基因激活的潜在危险性。因激活的潜在危险性。2/28/202334 2.AAV载体的缺陷：载体的缺陷：AAV载体容量小，最多只能容纳载体容量小，最多只能容纳5 kb外外源源DNA片段。片段。感染效率比逆转录病毒载体低。感染效率比逆转录病毒载体低。在在40%80%的成人中存在过感染，可的成人中存在过感染，可能会引起免疫排斥。能会引起免疫排斥。2/28/202335二、非病毒载体介导的基因转移系统二、非病毒载体介导的基因转移系统 （一）脂质体介导的基因转移技术（一）脂质体介导的基因转移技术 基基本本原原理理：利
19、利用用阳阳离离子子脂脂质质体体单单体体与与DNA混混合合后后，可可以以自自动动形形成成包包埋埋外外源源DNA的的脂脂质质体体，然然后后与与细细胞胞一一起起孵孵育育，即即可可通通过过细细胞胞内内吞吞作作用用将将外外源源DNA（即即目目的的基基因因）转转移至细胞内，并进行表达。移至细胞内，并进行表达。2/28/202336 脂质体介导的基因转移示意图脂质体介导的基因转移示意图2/28/202337（二）受体介导转移技术（二）受体介导转移技术 将将DNA与与细细胞胞或或组组织织亲亲和和性性的的配配体偶联，可使体偶联，可使DNA具有靶向性。具有靶向性。2/28/202338受体介导转移技术示意图受体介
20、导转移技术示意图2/28/202339 （三）基因直接注射技术（三）基因直接注射技术 如如：肌肌内内注注射射携携带带凝凝血血因因子子 基基因因的的重重组组AAV注注射射液液，可可产产生生血血友友病病所所需需的的凝凝血血因子因子。2/28/202340第三节 基因干预一、反义一、反义RNA二、二、RNA干扰干扰三、核酶三、核酶2/28/202341一、反义一、反义RNA（一）反义（一）反义RNA与基因表达调控与基因表达调控 指能与特定基因指能与特定基因mRNA互补结合的一类互补结合的一类RNA,可抑制一些有害基因的翻译可抑制一些有害基因的翻译。关键技术问题：关键技术问题：1.专一性转移问题专一性
21、转移问题 2.反义反义RNA进入靶细胞前的降解问题进入靶细胞前的降解问题2/28/202342（二）受体介导反义（二）受体介导反义RNA转移技术转移技术受体介导反义受体介导反义RNA转移技术转移技术可以实现可以实现:受受体体介介导导的的RNA转转移移十十分分专专一一，而而且且效效率高；率高；被被转转移移的的RNA是是被被保保护护的的，与与周周围围环环境境之之间间存存在在多多聚聚赖赖氨氨酸酸的的保保护护层层,可可以以抵抵抗抗环境中的核酸酶的降解作用。环境中的核酸酶的降解作用。2/28/202343（三）（三）反义反义RNA的应用前景的应用前景 （1）安全性高）安全性高 （2）反义）反义RNA设计
22、和制备方便设计和制备方便 （3）具有剂量调节效应）具有剂量调节效应 （4）能直接作用于一些）能直接作用于一些RNA病毒病毒2/28/202344二、RNA干扰（RNA interference，RNAi）由双链由双链RNA诱发的基因沉默现象：与诱发的基因沉默现象：与其有同源序列的其有同源序列的mRNA被降解，从而抑制被降解，从而抑制了该基因的表达。了该基因的表达。2/28/202345（一）（一）RNA干扰的机制干扰的机制2/28/202346（二）（二）RNA干扰的应用前景干扰的应用前景 1.1.研究基因功能的新工具研究基因功能的新工具 2.2.肿瘤的基因治疗肿瘤的基因治疗3.3.病毒性疾病
23、的基因治疗病毒性疾病的基因治疗2/28/202347三、核酶三、核酶(ribozyme)具具有有酶酶活活性性的的RNA，可可降降解解特特异的异的mRNA序列。序列。核酶核酶靶靶RNA2/28/202348核酶的作用机制核酶的作用机制2/28/202349 （一）核酶的设计（一）核酶的设计 用用于于基基因因治治疗疗的的核核酶酶分分子子由由三三个个部部分分组组成成，中中间间是是保保守守序序列列（能能够够组组成成酶酶活活性性结结构构域域），两两端端是是引引导导序序列列（guide sequences）。）。引导序列引导序列2/28/202350 （二）核酶的应用（二）核酶的应用 与一般的反义与一般的
24、反义RNA相比，核酶具有较稳定相比，核酶具有较稳定的空间结构，不易受到的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。更重要酶的攻击。更重要的是，核酶在切断的是，核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合和切割其它的解脱下来，重新结合和切割其它的mRNA分子。分子。2/28/202351 第四节第四节 治疗基因的受控表达治疗基因的受控表达 治治疗疗基基因因的的受受控控表表达达包包括括控控制制治治疗疗基基因因表达的表达的时间、空间和水平时间、空间和水平三个方面。三个方面。其其策策略略包包括括：基基因因内内部部调调节节机机制制、基基因因外外部部调调节节机机制制、利利用用病病灶灶微
25、微环环境境使使治治疗疗基基因因特异性表达及治疗基因的诱导表达等。特异性表达及治疗基因的诱导表达等。2/28/202352 利利用用特特定定基基因因的的转转录录调调控控元元件件来来控控制制治治疗基因表达的细胞或组织特异性。疗基因表达的细胞或组织特异性。一、基因内部的调节机制一、基因内部的调节机制1.使使用用正正常常细细胞胞的的组组织织特特异异性性启启动动子子、增增强强子子元元件件，例如酪氨酸酶基因的利用。例如酪氨酸酶基因的利用。2.使使用用病病变变细细胞胞的的组组织织特特异异性性启启动动子子、增增强强子子元元件件，例如甲胎蛋白例如甲胎蛋白(AFP)基因的利用。基因的利用。2/28/202353二
26、、基因外部的调节机制二、基因外部的调节机制 通过施加外部刺激，比如对病灶局部进通过施加外部刺激，比如对病灶局部进行热处理或电离辐射等，促进治疗基因在特行热处理或电离辐射等，促进治疗基因在特定细胞或组织中表达。定细胞或组织中表达。2/28/202354三、利用病灶微环境使治疗基因特异性表达三、利用病灶微环境使治疗基因特异性表达 利利用用病病灶灶特特异异的的微微环环境境及及其其特特异异表表达达的的基基因因来来控控制制治治疗疗基基因因的的表表达达。如如肿肿瘤瘤组组织织往往往往会会出出现现葡葡萄萄糖糖缺缺乏乏或或缺缺氧氧等等微微环环境境，其其中中高高表表达达的的GRP78/Bip蛋蛋白白编编码码基基因
27、因的的启启动动子子即即可可用用于于控制治疗基因的肿瘤组织的特异表达控制治疗基因的肿瘤组织的特异表达。2/28/202355四、治疗基因的诱导表达四、治疗基因的诱导表达 可可诱诱导导性性基基因因表表达达系系统统能能防防止止治治疗疗基基因因表达不再受外界控制。表达不再受外界控制。这这种种系系统统的的必必要要成成分分：一一种种是是转转录录激激活活物物，它它与与DNA结结合合的的活活性性受受某某种种诱诱导导药药物物控控制制；另另一一种种则则是是特特异异性性基基因因表表达达调调控控元元件件，仅对这种转录激活物有所响应。仅对这种转录激活物有所响应。2/28/202356四环素抗性操纵子系统四环素抗性操纵子
28、系统 四四环环素素操操纵纵子子中中的的抗抗性性基基因因的的转转录录受受阻阻遏遏蛋蛋白白的的负负调调控控，而而阻阻遏遏蛋蛋白白的的活活性性又又受受到到四四环环素素药药物物的的调调控控，其其在在四四环环素素存存在在时时会会优优先先结结合合药药物物而而无无法法与与转转录录调调控控元元件件结结合合，即即不能发挥阻遏转录的作用。不能发挥阻遏转录的作用。（一）四环素操纵子中的转录负调控（一）四环素操纵子中的转录负调控2/28/202357（二）四环素操纵子在治疗基因诱导表达系（二）四环素操纵子在治疗基因诱导表达系 统中的应用统中的应用Tet-Off系统系统：转录激活物保留了原阻遏蛋白：转录激活物保留了原阻
29、遏蛋白的四环素结合特性，即与四环素结合时将的四环素结合特性，即与四环素结合时将不能与对应的表达调控元件结合，而无法不能与对应的表达调控元件结合，而无法发挥转录激活作用。发挥转录激活作用。Tet-On系统系统：转录激活物改造了原阻遏蛋白：转录激活物改造了原阻遏蛋白的四环素结合特性，即与四环素结合时才的四环素结合特性，即与四环素结合时才能与对应的表达调控元件结合，而发挥转能与对应的表达调控元件结合，而发挥转录激活作用。录激活作用。2/28/2023582/28/202359 第五节第五节 基因治疗的应用研究基因治疗的应用研究一、遗传病的基因治疗研究一、遗传病的基因治疗研究 1腺苷脱氨酶腺苷脱氨酶(
30、ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)缺乏症缺乏症 2珠蛋白生成障碍性贫血和血红蛋白病珠蛋白生成障碍性贫血和血红蛋白病 3血友病和其他血浆蛋白缺乏症血友病和其他血浆蛋白缺乏症 4苯丙酮酸尿症和其他先天性代谢缺陷病苯丙酮酸尿症和其他先天性代谢缺陷病 5莱莱-纳纳(Lesch-Nyhan)综合征综合征 6家族性高胆固醇血症家族性高胆固醇血症 7囊性纤维化病囊性纤维化病 2/28/202360二、恶性肿瘤基因治疗研究二、恶性肿瘤基因治疗研究 常用基因治疗策略：常用基因治疗策略：1.1.基因增补基因增补2.2.基因干预技术基因干预技术3.3.自杀基因治疗自杀基因治疗分子化疗分子化疗4
31、.4.肿瘤的免疫基因治疗肿瘤的免疫基因治疗5.5.提高化疗效果的辅助基因治疗提高化疗效果的辅助基因治疗 （药物增敏基因治疗；耐药基因治疗）（药物增敏基因治疗；耐药基因治疗）2/28/202361第一例基因治疗 -腺苷脱氨酶缺乏症l生理：腺苷脱氨酶是一种细胞内酶，在核酸代生理：腺苷脱氨酶是一种细胞内酶，在核酸代谢中起重要作用，使淋巴细胞中的脱氧腺苷脱谢中起重要作用，使淋巴细胞中的脱氧腺苷脱氨成为脱氧肌苷，最后代谢为尿酸，排出体外。氨成为脱氧肌苷，最后代谢为尿酸，排出体外。l病理：腺苷脱氨酶缺乏病理：腺苷脱氨酶缺乏脱氧腺苷不能脱氨脱氧腺苷不能脱氨脱氧腺细胞内堆积脱氧腺细胞内堆积淋巴细胞死亡淋巴细胞
32、死亡机体免疫机体免疫功能缺乏。功能缺乏。2/28/202362l腺苷脱氨酶基因位于腺苷脱氨酶基因位于2020号染色体长臂号染色体长臂l19831983年腺苷脱氨酶基因被克隆年腺苷脱氨酶基因被克隆l应用逆转录病毒可将该基因送入缺乏腺苷脱应用逆转录病毒可将该基因送入缺乏腺苷脱氨酶基因的淋巴细胞氨酶基因的淋巴细胞l新输入的腺苷脱氨酶基因可在原来没有此基新输入的腺苷脱氨酶基因可在原来没有此基因的淋巴细胞中表达因的淋巴细胞中表达ADA缺乏症的基因治疗缺乏症的基因治疗ADA2/28/202363第一个成功接受基因治疗的人第一个成功接受基因治疗的人Ashanti de SilvaAshanti de Sil
33、va 其其在在前前十十个个月月先先后后注注射射了了7次次，治治疗疗后后ADA蛋蛋白白水水平平由由最最初初的的1%水水平平上升到上升到25%。2/28/202364三、病毒性疾病的基因治疗研究三、病毒性疾病的基因治疗研究 可用基因治疗的策略可用基因治疗的策略 1 1调节机体免疫应答调节机体免疫应答 2.2.基因干预，抑制病毒复制基因干预，抑制病毒复制 2/28/202365 第六节第六节 基因治疗的问题与展望基因治疗的问题与展望1.1.安全性问题安全性问题 19991999年出现首例基因治疗失败事件。年出现首例基因治疗失败事件。目目前前只只限限于于体体细细胞胞，提提倡倡间间接接体体内内法法、主主要要用用于于单单基基因因遗遗传传病病治治疗疗、疗疗效效显显著著并并经过动物实验验证等。经过动物实验验证等。2/28/2023661.1.2.2.社会伦理问题社会伦理问题l禁止用于生殖细胞禁止用于生殖细胞l防止不当应用（如体育上）防止不当应用（如体育上）2/28/2023671.1.3.3.技术问题技术问题l目的基因及调控元件选择；目的基因及调控元件选择；l安全高效载体构建及转移技术；安全高效载体构建及转移技术；l靶细胞选择靶细胞选择2/28/2023682/28/202369