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1、 1 1台州学院医药化工学院台州学院医药化工学院第第11章章光度分析法光度分析法The Photometric Analysis 2学习要求学习要求1.1.了解紫外了解紫外了解紫外了解紫外 可见吸光光度法的特点。可见吸光光度法的特点。可见吸光光度法的特点。可见吸光光度法的特点。2.2.掌握光的吸收定律及其适用范围。掌握光的吸收定律及其适用范围。掌握光的吸收定律及其适用范围。掌握光的吸收定律及其适用范围。3.3.掌握紫外掌握紫外掌握紫外掌握紫外 可见吸光光度法的测定方法。可见吸光光度法的测定方法。可见吸光光度法的测定方法。可见吸光光度法的测定方法。4.4.了解紫外了解紫外了解紫外了解紫外可见吸光
2、光度法仪器测量的误差及测量可见吸光光度法仪器测量的误差及测量可见吸光光度法仪器测量的误差及测量可见吸光光度法仪器测量的误差及测量条件的选择，熟悉紫外条件的选择，熟悉紫外条件的选择，熟悉紫外条件的选择，熟悉紫外可见吸光光度法的应用及有可见吸光光度法的应用及有可见吸光光度法的应用及有可见吸光光度法的应用及有关计算关计算关计算关计算 3教学内容教学内容111概述概述112光吸收的基本定律光吸收的基本定律113分光光度计分光光度计114显色反应及其影响因素显色反应及其影响因素115分光光度法的灵敏度和准确度分光光度法的灵敏度和准确度116分光光度法的应用分光光度法的应用 4光化学分析法：光化学分析法：
3、基于物质光化学性质而建立起来的分析方法，基于物质光化学性质而建立起来的分析方法，分为光谱分析法和非光谱分析法。分为光谱分析法和非光谱分析法。光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。的方法。吸收光谱分析吸收光谱分析发射光谱分析发射光谱分析分子光谱分析分子光谱分析原子光谱分析原子光谱分析11.1 概概 述述 51.1.分光光度法及其特点分光光度法及其特点分光光度法及其特点分光光度法及其特点根根据据被被分分析析物物质质对对光光
4、具具有有选选择择性性吸吸收收的的特特性性而而建建立立的的分析方法称分析方法称吸光光度法吸光光度法。包括比色法和分光光度法。包括比色法和分光光度法。11.1概概述述标准标准系列系列未知未知样品样品目视比色法：利用溶液颜色的深浅测定有色物质的含量目视比色法：利用溶液颜色的深浅测定有色物质的含量目视比色法：利用溶液颜色的深浅测定有色物质的含量目视比色法：利用溶液颜色的深浅测定有色物质的含量分光光度法：利用分光光度计进行比色分析分光光度法：利用分光光度计进行比色分析分光光度法：利用分光光度计进行比色分析分光光度法：利用分光光度计进行比色分析 6分光光度法的特点分光光度法的特点分光光度法的特点分光光度法
5、的特点分分光光光光度度法法主主要要用用于于微微量量分分析析，与与滴滴定定分分析析法法、重重量量分分析析法相比，有以下特点：法相比，有以下特点：(1)方法灵敏度高。方法灵敏度高。10-410-3%(2)准确度较高。准确度较高。相对误差为相对误差为25%(3)操作简便，测定速度快。操作简便，测定速度快。(4)应应用用广广泛泛。几几乎乎所所有有的的无无机机离离子子和和许许多多有有机机化化合合物物都都可可直接或间接地用此法测定。直接或间接地用此法测定。11.1 概概 述述 7光谱区间光谱区间光谱区间光谱区间 射射线线x射射线线紫紫外外光光红红外外光光微微波波无无线线电电波波10-2nm10nm102n
6、m104nm0.1cm10cm103cm105cm可可 见见 光光400750nm方方方方法法法法分分分分类类类类：根根据据光光的的波波长长不不同同，分分光光光光度度法法分分为为可可见见分分光光光光度度法、紫外分光光度法和红外光谱法等。法、紫外分光光度法和红外光谱法等。8远红外吸收光谱：远红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围分子振动光谱，吸收光波长范围2.5 1000 m,主要用于有机化合物结构鉴定。主要用于有机化合物结构鉴定。近红外吸收光谱：近红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围分子振动光谱，吸收光波长范围760 2500nm,主要用于有机化合物结构鉴定。主要用于有机化合物结构鉴
7、定。可见吸收光谱：可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围电子跃迁光谱，吸收光波长范围400 760nm，主要用于有色物质的定量分析。主要用于有色物质的定量分析。紫外吸收光谱：紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围电子跃迁光谱，吸收光波长范围200 400nm（近紫外区）近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。，可用于结构鉴定和定量分析。本章讨论紫外和可见光区的分光光度法。本章讨论紫外和可见光区的分光光度法。92.光的基本性质光的基本性质波动性粒子性 E光的折射光的折射光的折射光的折射光的衍射光的衍射光的衍射光的衍射光的偏振光的偏振光的偏振光的偏振光的干涉光的干涉光的干涉光的干涉光电效应光
8、电效应光电效应光电效应光的波粒二象性光的波粒二象性光的波粒二象性光的波粒二象性光的波粒二象性 10光的波长越短（频率越高），其能量越大。光的波长越短（频率越高），其能量越大。E E：光子的能量光子的能量光子的能量光子的能量(J,(J,焦耳焦耳焦耳焦耳)：光子的频率：光子的频率：光子的频率：光子的频率(Hz,(Hz,赫兹赫兹赫兹赫兹)：光子的波长：光子的波长：光子的波长：光子的波长(cm)(cm)c c：光速光速光速光速(2.9979(2.9979 10101010cm.scm.s-1-1)h h：PlankPlank常数常数常数常数(6.6256(6.6256 1010-34-34J.sJ.s
9、焦耳焦耳焦耳焦耳.秒秒秒秒)光是由光子流组成，光子的能量：光是由光子流组成，光子的能量：2.光的基本性质光的基本性质 11 单色光：单一波长的光单色光：单一波长的光单色光：单一波长的光单色光：单一波长的光(由具有相同能量的光子组成由具有相同能量的光子组成由具有相同能量的光子组成由具有相同能量的光子组成)复合光：由各种单色光组成，白光复合光：由各种单色光组成，白光复合光：由各种单色光组成，白光复合光：由各种单色光组成，白光(太阳光太阳光太阳光太阳光)互补色光互补色光互补色光互补色光:两种光按比例混合得到白光两种光按比例混合得到白光两种光按比例混合得到白光两种光按比例混合得到白光 单色光单色光单色
10、光单色光 复合光复合光复合光复合光 互补色光互补色光互补色光互补色光蓝蓝黄黄紫红紫红绿绿紫紫黄绿黄绿绿蓝绿蓝橙橙红红蓝绿蓝绿物质的颜色与光有着密切的关系！物质的颜色与光有着密切的关系！物质的颜色与光有着密切的关系！物质的颜色与光有着密切的关系！2.光的基本性质光的基本性质 1233物质的颜色与光的关系物质的颜色与光的关系完全吸收完全吸收完全吸收完全吸收完全透过完全透过完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意表观现象示意表观现象示意复合光光的作用方式光的作用方式光的作用方式光的作用方式 13 当复合光照射到物体上时，一部分光
11、被吸收，而当复合光照射到物体上时，一部分光被吸收，而一部分光则被透射过去。即：一部分光则被透射过去。即：入射光入射光=吸收光透射光吸收光透射光吸收光吸收光透射光透射光互补互补互补互补光的互补光的互补：蓝：蓝黄黄 144.物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收M+M+热热热热M+M+荧光或磷光荧光或磷光荧光或磷光荧光或磷光M+h M*基态基态激发态激发态物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足PlankPlank条件条件条件条件S2S1S0S3E2E0E1E3h量子化量子化 选择性吸收选择性吸收与物质的性质及光的性质有关与物质的性质及光的性质有关与物质的性质及光
12、的性质有关与物质的性质及光的性质有关 155.吸收曲线（吸收光谱）吸收曲线（吸收光谱）分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同；分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同；用不同波长的单色光照射某溶液，测吸光度用不同波长的单色光照射某溶液，测吸光度作吸光度作吸光度(A)-(A)-波长波长()()图，得吸收曲线图，得吸收曲线吸光度最大处对应的波长吸光度最大处对应的波长-最大吸收波长最大吸收波长max不同的物质，其吸收曲线形状和不同的物质，其吸收曲线形状和max不同，吸收曲线可以提供物质不同，吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。依
13、据之一。ABA 16吸收曲线：吸收曲线：同种物质浓度不同时，其吸收曲线形同种物质浓度不同时，其吸收曲线形状相似，状相似，max不变。不变。在一定实验条件下在一定实验条件下,Ac，此特性可作为物质定量分析的依此特性可作为物质定量分析的依据。据。在在max处吸光度随浓度变化的幅度最大，处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。171.透光比透光比(率率)与吸光度与吸光度11.2光吸收的基本定律光吸收的基本定律单色光通过溶液单色光通过溶液TT取值为取值为取值为取值为0.0%100.0%0.
14、0%100.0%全部吸收全部吸收全部吸收全部吸收T=0.0%T=0.0%全部透射全部透射全部透射全部透射T=100.0%T=100.0%入射光入射光I0透射光透射光It透光率透光率透光率透光率:吸光度：吸光度：吸光度：吸光度：182.朗伯比耳定律朗伯比耳定律11.2光吸收的基本定律光吸收的基本定律 A-lgT=K b c 式中式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；吸光度；描述溶液对光的吸收程度；b：液层厚度液层厚度(光程长度光程长度)，通常以，通常以cm为单位；为单位；c：溶液中吸光物质的浓度溶液中吸光物质的浓度；K：吸光系数吸光系数(与与c的单位有关的单位有关)；当当 c单单 位位 为为:
15、moldm-3 时时，K称称 为为 摩摩 尔尔 吸吸 光光 系系 数数，单单 位位dm3mol-cm-。1911.2光吸收的基本定律光吸收的基本定律朗伯朗伯比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据应用于各种光度法的吸收测量应用于各种光度法的吸收测量.T T=0.0%=0.0%A A=T T=100.0%=100.0%A A=0.0=0.01.00.50AcA100500T%T 20用邻菲罗啉法测定铁，已知显色的试液中用邻菲罗啉法测定铁，已知显色的试液中Fe2+浓度为浓度为500gdm-3，在波长，在波长510nm处用处用2cm吸收池测得吸收池
16、测得A0.198，计算摩尔吸光系数。铁原子量为计算摩尔吸光系数。铁原子量为55.85解：解：例题例题11-1 21某试液显色后用某试液显色后用2.0cm吸收池测定时吸收池测定时T50.0%，若用，若用1.0cm或或5.0cm吸收池测定，吸收池测定，T及及A各为多少？各为多少？例题例题11-2 22摩尔吸光系数摩尔吸光系数 的讨论的讨论（1）物质的特征常数物质的特征常数；在；在入射光波长入射光波长、温度一定时温度一定时,仅与物仅与物质本身的性质有关质本身的性质有关,不随不随c和和b改变，可作为定性鉴定的参数；改变，可作为定性鉴定的参数；（2）同一物质）同一物质,波长不同时波长不同时值不同，最大吸
17、收波长值不同，最大吸收波长max处的处的摩尔吸光系数以摩尔吸光系数以max表示表示.max表明了该吸收物质最大的吸光表明了该吸收物质最大的吸光能力能力.max越大物质的吸光能力越强越大物质的吸光能力越强，测定该物质的，测定该物质的灵敏度越灵敏度越高高:105,高灵敏；高灵敏；=(610)104,较高灵敏；较高灵敏；105高灵敏；高灵敏；=(610)104较高灵敏；较高灵敏；2104不灵敏。不灵敏。例例:二乙基胺二硫代甲酸钠二乙基胺二硫代甲酸钠(铜试剂，铜试剂，DDTC)光度法测铜，光度法测铜，436=12800Lmol-1cm-1；双硫腙光度法测铜，；双硫腙光度法测铜，495=158000Lm
18、ol-1cm-1，灵敏度谁较高？，灵敏度谁较高？11.5 分光光度法的灵敏度和准确度分光光度法的灵敏度和准确度 37桑德尔桑德尔桑德尔桑德尔(Sandell)(Sandell)灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度:S S 在在在在maxmax 处处、当仪器的检测极限为当仪器的检测极限为当仪器的检测极限为当仪器的检测极限为A A A A=0.001=0.001=0.001=0.001时，单位截面积时，单位截面积时，单位截面积时，单位截面积光程内所能检测出的吸光物质的最低含量光程内所能检测出的吸光物质的最低含量光程内所能检测出的吸光物质的最低含量光程内所能检测出的吸光物质的最低含量(g/cmg/cmg/cmg
19、/cm2 2 2 2)S S越小，灵敏度越高越小，灵敏度越高越小，灵敏度越高越小，灵敏度越高 一般在一般在一般在一般在0.010.0010.010.001 g/cmg/cm2 2 3811.5 分光光度法的灵敏度和准确度分光光度法的灵敏度和准确度2 2 分光光度法误差分光光度法误差与与准确度准确度光度分析法的误差来源：仪器的精度光度分析法的误差来源：仪器的精度,测量方法测量方法,溶液的性质溶液的性质等。为了使等。为了使测定结果测定结果具有较高的灵敏度和准确度，除了要注意具有较高的灵敏度和准确度，除了要注意选择和控制适当的显色反应条件外选择和控制适当的显色反应条件外,还必须注意测量条件的选择。还
20、必须注意测量条件的选择。n测量波长的选择测量波长的选择“吸收最大，干扰最小吸收最大，干扰最小”n吸光度范围的选择吸光度范围的选择0.20.20.80.8n参比溶液的选择参比溶液的选择 39偏离朗伯偏离朗伯比尔定律比尔定律对吸收定律偏离对吸收定律偏离对吸收定律偏离对吸收定律偏离主要原因主要原因主要原因主要原因 入射光的非单色性入射光的非单色性入射光的非单色性入射光的非单色性 吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用 吸光度测量的误差吸光度测量的误差吸光度测量的误差吸光度测量的误差c 40对吸收光谱而言，对吸收光谱而言，b 和和c 固定，固定，反映了反映了 随波长变
21、化的情况，单随波长变化的情况，单一波长，一波长，固定；不同波长，固定；不同波长，不同。因此，非单色光将导致不同。因此，非单色光将导致对吸光定律的偏离。对吸光定律的偏离。在实际工作中，入射光通常具有某一波段复合光。为了避在实际工作中，入射光通常具有某一波段复合光。为了避免非单色光带来的影响，一般免非单色光带来的影响，一般选用峰值波长选用峰值波长进行测定。进行测定。1对应的对应的 1较小较小 2对应的对应的 2较大较大 1 2A或或 非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离 41n入射光波长的选择入射光波长的选择最大吸
22、收原则：最大吸收原则：选选max的光作入射光。此时，灵敏度较高，的光作入射光。此时，灵敏度较高，测定时偏离朗伯测定时偏离朗伯-比耳定律的程度减小，其准确度也较好。比耳定律的程度减小，其准确度也较好。“MR的的吸吸收收最最大大、对对MR测测定定的的干干扰扰最最小小”的的原原则则：当当有有干干扰扰物质存在时，应据此来选择入射光的波长。物质存在时，应据此来选择入射光的波长。例例丁二酮肟比色法测钢中的镍，丁二酮丁二酮肟比色法测钢中的镍，丁二酮肟镍肟镍max470nm，试样中的铁用酒石，试样中的铁用酒石酸钠钾掩蔽后，在酸钠钾掩蔽后，在470nm也有吸收，对也有吸收，对测定有干扰。当测定有干扰。当测测50
23、0nm后，干扰后，干扰较小。因此，可在较小。因此，可在520nm处测定，否则，处测定，否则，要分离铁后才能测定要分离铁后才能测定.42n控制吸光度范围控制吸光度范围适宜的吸光度测量范围适宜的吸光度测量范围:(T:15-65%)或（）或（）最佳的取值点最佳的取值点:当当T=36.8%或或A=0.434为使结果的测量误差较小，准确度较高，应控制为使结果的测量误差较小，准确度较高，应控制A在在0.2-0.8(0.434)范围内。范围内。方法：方法：a.选择不同厚度的吸收池。选择不同厚度的吸收池。b.控制溶液浓度控制溶液浓度,如改变试样如改变试样称量和改变溶液稀释度等。称量和改变溶液稀释度等。ErT
24、关系曲线关系曲线 43吸光度测量的误差吸光度测量的误差吸光定律吸光定律吸光定律吸光定律根据误差传递公式，有根据误差传递公式，有根据误差传递公式，有根据误差传递公式，有 又又又又得得得得浓度测量的浓度测量的浓度测量的浓度测量的相对偏差相对偏差相对偏差相对偏差令令令令得得得得T T=0.368=36.8%36.8%A A=0.434=0.434 仪器测量误差最小仪器测量误差最小仪器测量误差最小仪器测量误差最小吸光度标尺刻度不均匀吸光度标尺刻度不均匀吸光度标尺刻度不均匀吸光度标尺刻度不均匀某钢样含某钢样含某钢样含某钢样含NiNi的质量分数约为的质量分数约为的质量分数约为的质量分数约为0.12%0.1
25、2%，用丁二酮肟光度法，用丁二酮肟光度法，用丁二酮肟光度法，用丁二酮肟光度法(=1.310=1.3104 4LmolLmol-1-1cmcm-1-1)进行测定。试样溶解后，转入进行测定。试样溶解后，转入进行测定。试样溶解后，转入进行测定。试样溶解后，转入100100mLmL容量瓶中，显色，并加水稀释至刻度。取部分试液于波容量瓶中，显色，并加水稀释至刻度。取部分试液于波容量瓶中，显色，并加水稀释至刻度。取部分试液于波容量瓶中，显色，并加水稀释至刻度。取部分试液于波长长长长410nm410nm处用处用处用处用1.0cm1.0cm比色皿测量。如要求此时的测量误差比色皿测量。如要求此时的测量误差比色皿
26、测量。如要求此时的测量误差比色皿测量。如要求此时的测量误差最小，应称取试样多少克？最小，应称取试样多少克？最小，应称取试样多少克？最小，应称取试样多少克？(p337-3)(p337-3)解：希望仪器的相对误差最小，解：希望仪器的相对误差最小，解：希望仪器的相对误差最小，解：希望仪器的相对误差最小，A=A=0.4340.434采用采用采用采用1cm1cm比色皿测定某一试液的吸光度比色皿测定某一试液的吸光度比色皿测定某一试液的吸光度比色皿测定某一试液的吸光度A A，如果试样的浓，如果试样的浓，如果试样的浓，如果试样的浓度为度为度为度为5.0105.010-6-6molmol LL-1-1时，测得时
27、，测得时，测得时，测得A A值为值为值为值为0.0600.060，若改用，若改用，若改用，若改用2cm2cm比色比色比色比色皿时，应该将试样的浓度控制在什么范围时，才能使测量的皿时，应该将试样的浓度控制在什么范围时，才能使测量的皿时，应该将试样的浓度控制在什么范围时，才能使测量的皿时，应该将试样的浓度控制在什么范围时，才能使测量的误差较小。误差较小。误差较小。误差较小。解：希望测量的相对误差较小，解：希望测量的相对误差较小，解：希望测量的相对误差较小，解：希望测量的相对误差较小，A=A=0.20.80.20.8 46n参比溶液的选择参比溶液的选择在吸光度测量中在吸光度测量中,必须将溶液装入由透
28、明材料制成的比色皿必须将溶液装入由透明材料制成的比色皿中中.由于材料及溶剂对由于材料及溶剂对I0将产生一定的反射、吸收、散射将产生一定的反射、吸收、散射等，最终导致等，最终导致It减弱。减弱。参比溶液的作用：参比溶液的作用：使光强度的减弱使光强度的减弱仅仅与溶液中待测物的浓与溶液中待测物的浓度有关。度有关。方方法：法：用光学性质及厚度相同的比色皿盛纯试剂作参比，用光学性质及厚度相同的比色皿盛纯试剂作参比，调节仪器，使透过比色皿的调节仪器，使透过比色皿的A=0或或T=100%。参比液选用原则：参比液选用原则：47n参比液选用原则：参比液选用原则：待待待待测测测测离离离离子子子子(M)M)显色剂显
29、色剂显色剂显色剂(R(R)参比溶液的选用参比溶液的选用参比溶液的选用参比溶液的选用无色无色无色无色无色无色无色无色纯溶剂或蒸馏水纯溶剂或蒸馏水纯溶剂或蒸馏水纯溶剂或蒸馏水有色有色有色有色无色无色无色无色试样空白（不加显色剂的待测试液）试样空白（不加显色剂的待测试液）试样空白（不加显色剂的待测试液）试样空白（不加显色剂的待测试液）无色无色无色无色有色有色有色有色试剂空白（不加试剂空白（不加试剂空白（不加试剂空白（不加MM的显色剂）的显色剂）的显色剂）的显色剂）有色有色有色有色有色有色有色有色将将将将试试试试样样样样加加加加适适适适当当当当掩掩掩掩蔽蔽蔽蔽剂剂剂剂，将将将将MM掩掩掩掩蔽蔽蔽蔽起起
30、起起来来来来，然后加入显色剂作参比溶液然后加入显色剂作参比溶液然后加入显色剂作参比溶液然后加入显色剂作参比溶液 481 1.单组分含量测定单组分含量测定标准曲线法标准曲线法标准曲线法标准曲线法11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用a.a.配制一系列浓度不同的标准溶液，配制一系列浓度不同的标准溶液，配制一系列浓度不同的标准溶液，配制一系列浓度不同的标准溶液，在最佳条件下测其吸光度在最佳条件下测其吸光度在最佳条件下测其吸光度在最佳条件下测其吸光度A A。b.b.作作作作A-cA-c图，得标准曲线图，得标准曲线图，得标准曲线图，得标准曲线(或称工作曲线或称工作曲线或称工作曲线或称工作曲线)，c.
31、c.用相同的方法测定被测液的吸光度用相同的方法测定被测液的吸光度用相同的方法测定被测液的吸光度用相同的方法测定被测液的吸光度A Ax x，从标准曲线上找出对应的被测液浓度从标准曲线上找出对应的被测液浓度从标准曲线上找出对应的被测液浓度从标准曲线上找出对应的被测液浓度c cx x。49 标准对照法标准对照法标准对照法标准对照法11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用标准对照法只需一份标准溶液即可计算出试液的浓度，简单方便。标准对照法只需一份标准溶液即可计算出试液的浓度，简单方便。标准对照法只需一份标准溶液即可计算出试液的浓度，简单方便。标准对照法只需一份标准溶液即可计算出试液的浓度，简单方便。
32、将试液和某个浓度标准溶液在相同条件进行显色、定容，将试液和某个浓度标准溶液在相同条件进行显色、定容，将试液和某个浓度标准溶液在相同条件进行显色、定容，将试液和某个浓度标准溶液在相同条件进行显色、定容，分别测定它们的吸光度，按下式计算被测液的浓度：分别测定它们的吸光度，按下式计算被测液的浓度：分别测定它们的吸光度，按下式计算被测液的浓度：分别测定它们的吸光度，按下式计算被测液的浓度：50吸收系数法吸收系数法吸收系数法吸收系数法将试液进行显色、定容后测定它的吸光度，将试液进行显色、定容后测定它的吸光度，将试液进行显色、定容后测定它的吸光度，将试液进行显色、定容后测定它的吸光度，按下式计算被测溶液的
33、浓度：按下式计算被测溶液的浓度：按下式计算被测溶液的浓度：按下式计算被测溶液的浓度：通过文献查得被测物的吸光系数通过文献查得被测物的吸光系数通过文献查得被测物的吸光系数通过文献查得被测物的吸光系数 ，此法在，此法在，此法在，此法在有机化合物的紫外分析中应用较广，有机化合物的紫外分析中应用较广，有机化合物的紫外分析中应用较广，有机化合物的紫外分析中应用较广，尤其适用尤其适用尤其适用尤其适用于无标准品可供比较测定的情况。于无标准品可供比较测定的情况。于无标准品可供比较测定的情况。于无标准品可供比较测定的情况。51示差法示差法示差法示差法特点：特点：特点：特点：适用于被测组分含量高的溶液，适用于被测
34、组分含量高的溶液，适用于被测组分含量高的溶液，适用于被测组分含量高的溶液，以标准溶液作空白以标准溶液作空白以标准溶液作空白以标准溶液作空白(浓度比样品浓度稍小一些，浓度比样品浓度稍小一些，浓度比样品浓度稍小一些，浓度比样品浓度稍小一些，c cs sccx x)原理：原理：原理：原理：A A相对相对相对相对=A=A=b bc cx x-b bc cs s=b b c cAccxA示差光度法需要发射强度较大的光源，示差光度法需要发射强度较大的光源，示差光度法需要发射强度较大的光源，示差光度法需要发射强度较大的光源，才能将高浓度参比液的吸光度调至零才能将高浓度参比液的吸光度调至零才能将高浓度参比液的
35、吸光度调至零才能将高浓度参比液的吸光度调至零 计算：计算：计算：计算：52示差法提高准确度的实质示差法提高准确度的实质示差法提高准确度的实质示差法提高准确度的实质常规法常规法常规法常规法TxT0 5 1050100 落在测量落在测量落在测量落在测量误差误差误差误差较较较较 大大大大 的范围的范围的范围的范围T0 5 1050100TrTsTs 落在测量落在测量落在测量落在测量误差误差误差误差较较较较 小小小小 的范围的范围的范围的范围 532 2.多组分含量测定多组分含量测定 吸收光谱互不重叠吸收光谱互不重叠吸收光谱互不重叠吸收光谱互不重叠,单向重叠单向重叠单向重叠单向重叠,双向重叠双向重叠双
36、向重叠双向重叠 11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用a.a.分别在分别在分别在分别在 1 1和和和和 2 2处测溶液的吸光度，得处测溶液的吸光度，得处测溶液的吸光度，得处测溶液的吸光度，得X X，Y Y两组分的含量。两组分的含量。两组分的含量。两组分的含量。b.b.c.c.b bc ca a 543.3.配合物组成的测定配合物组成的测定摩尔比法摩尔比法摩尔比法摩尔比法(饱和法饱和法饱和法饱和法)M+nR MRn11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用固定金属离子固定金属离子M浓度浓度,改变配位剂改变配位剂R浓度，测吸光度，作浓度，测吸光度，作A-cR/cM图图,外推法外推法得一交点得一
37、交点,从交点向横坐标作垂线从交点向横坐标作垂线,对应对应的的cR/cM比值即是配位比比值即是配位比n n。该法简单该法简单,快速快速,对对离解度小、配位比高离解度小、配位比高的配合物的配合物,结果满意。结果满意。cMRncR 55 摩尔连续变化法摩尔连续变化法摩尔连续变化法摩尔连续变化法M+nRM+nR MRMRn n11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用c cMM+c cR R=常数常数常数常数,cM/c从从01测得测得-c曲线曲线,当当A达到最大达到最大时时,即配合物浓度最大即配合物浓度最大B,外外推至推至B,当溶液中络合物当溶液中络合物MRn浓度浓度最大时最大时,cR/cM的比值为的比值为n。如如f=0.5表示表示M与与R按按1:1络合，络合，即即n=1。cM/c 56c cMM/c c为为为为0.330.33，即，即，即，即c cMM/c cR R=0.33/0.67=0.33/0.67，表明配合物组成比为表明配合物组成比为表明配合物组成比为表明配合物组成比为MM R=1R=1 2 2。