药物分析第六章.pptx

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1、会计学1药物分析第六章药物分析第六章第六章 芳酸类药物的分析学习目标 掌握水杨酸、苯甲酸类药物化学结构与分析方法间的关系；鉴别与含量测定的方法；特殊杂质的检验方法与杂质限量计算；两步滴定法和双相测定法的原理。熟悉紫外分光光度法、高效液相色谱法在芳酸类药物中的应用。了解其他芳酸类药物的分析。第1页/共40页第六章 芳酸类药物的分析本章目录本章目录 概述概述 第一节 水杨酸类药物分析水杨酸类药物分析 第二节 苯甲酸类药物分析苯甲酸类药物分析第2页/共40页第六章 芳酸类药物的分析 羧基直接与芳香环相连的化合物称芳酸。芳酸及其酯类药物的结构特点是：结构中有羧基、酯键和苯环；有些药物有酚羟基、芳伯氨基

2、 概概概概 述述述述第3页/共40页第六章 芳酸类药物的分析第一节 水杨酸类药物分析水杨酸类药物水杨酸类药物结构理化性质鉴 别检 查含量测定第4页/共40页 第六章 芳酸类药物分析药物结构理化性质与分析方法在乙醇中易溶，在水中溶解度小，多以醇为溶剂分析；具游离羧基，呈酸性；含酯键，不稳定，易水解；水解后生成游离的酚羟基，可与铁离子发生呈色反应 有苯环，在紫外光区有吸收 阿司匹林结构与理化性质的关系第5页/共40页 第六章 芳酸类药物分析酸性：用于定性、定量反应酚羟基：FeCl3呈色反应苯环：紫外吸收水杨酸第6页/共40页 第六章 芳酸类药物分析芳酸碱金属盐：水溶性大，显弱碱性酚羟基，有何性质？

3、芳伯氨基：重氮化偶合反应苯环有何性质?对氨基水杨酸钠第7页/共40页 第六章 芳酸类药物分析酯键：水解，可生成酚羟基和醋酸酯键：水解，可生成酚羟基和羧基酰胺键：水解，可生成芳伯氨基苯环苯环贝诺酯返返 回回 第8页/共40页 第六章 芳酸类药物分析一、鉴别试验1.三氯化铁反应 含酚羟基结构的药物在中性或弱酸性条件下，可与Fe3 反应，形成有色配位化合物。（1）水杨酸：加三氯化铁试液1滴，即呈紫色。（2）阿司匹林：煮沸水解后，放冷，加三氯化铁试 液1滴，呈紫堇色。（3）贝诺酯：加入氢氧化钠试液，煮沸，放冷，滤液调成微 酸性，加三氯化铁试液2滴，呈紫堇色。第9页/共40页 第六章 芳酸类药物分析反应

4、式如下：贝诺酯和阿司匹林需水解，生成水杨酸，才能发生该反应（紫堇色）第10页/共40页 第六章 芳酸类药物分析2.重氮化偶合反应 贝诺酯由阿司匹林和对乙酰氨基酚酯化而成。在酸性条件下加热水解，生成对氨基酚，呈芳香第一胺反应。供试品稀盐酸，煮沸，放冷，滤过滤液猩红色亚硝酸钠、碱性-萘酚第11页/共40页 第六章 芳酸类药物分析第12页/共40页 第六章 芳酸类药物分析3.3.紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法 贝诺酯溶液，在240nm 的波长处有最大吸收，按干燥品计算，吸收系数（）为 730 760。4.4.红外吸收光谱法红外吸收光谱法 水杨酸、阿司匹林、贝诺酯、对氨基水杨酸钠均采用红外吸收光谱法，供

5、试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。对氨基水杨酸钠水溶液还可呈钠盐鉴别反应。第13页/共40页 第六章 芳酸类药物分析二、杂质检查（一）阿司匹林的杂质检查 阿司匹林原料主要控制的特殊杂质有“溶液的澄清度”“水杨酸”“易炭化物”第14页/共40页 第六章 芳酸类药物分析1.溶液的澄清度 本项目主要检查碳酸钠试液中不溶性杂质。这些杂质是未反应的酚类、或副反应产生的无游离羧基的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。阿司匹林有羧基，溶解于碳酸钠试液。醋酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯 第15页/共40页 第六章 芳酸类药物分析2.游离水杨酸 水杨酸可由合成过程中乙酰化不完全或阿司匹林在贮藏过程

6、中水解产生。水杨酸对人体有毒，并有刺激性，其进一步氧化产物使药物变色，影响药物的质量。故应严格控制阿司匹林中的水杨酸。中国药典（2010）采用高效液相法测定。第16页/共40页 第六章 芳酸类药物分析【实例分析实例分析】阿司匹林中游离水杨酸检查阿司匹林中游离水杨酸检查游离水杨酸 照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相；检测波长为303nm。理论板数按水杨酸峰计算不低于5000，阿司匹林主峰与水杨酸主峰分离度应符合要求。供试品溶液的制备 取本品约100mg，精密称定，置10ml量瓶中，

7、加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（临用前新配）。对照品溶液的制备 取水杨酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 立即精密量取供试品溶液、对照品溶液各10l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显水杨酸色谱峰，按外标法以峰面积计算供试品中水杨酸含量，含水杨酸不得过0.1%。第17页/共40页 第六章 芳酸类药物分析 原则上，制剂不必重复检查原料药项下检查的杂质，但在制剂制备或制剂贮存过程中，有可能再引入的

8、杂质，应检查控制。阿司匹林片在制备或贮存过程中，因酯键易水解，而生成水杨酸，故阿司匹林片剂、栓剂均要检查水杨酸。第18页/共40页 第六章 芳酸类药物分析3.易炭化物 本项目检查被硫酸碳化而呈色的低分子有机杂质 第19页/共40页 第六章 芳酸类药物分析(4)有关物质 照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为276nm。阿司匹林峰的保留时间约为8分钟，理论板数按阿司匹林峰计算不低于5000，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。时间

9、（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0.0100060.02080第20页/共40页 第六章 芳酸类药物分析测定法 取本品约0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液；精密量取对照溶液10ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得灵敏度试验溶液。分别精密量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各10l，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，除小于灵敏度

10、试验溶液中阿司匹林主峰面积的单个杂质峰、溶剂峰及水杨酸峰不计外，其余各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积（0.5%）。第21页/共40页 第六章 芳酸类药物分析（二）对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查 间氨基酚易被氧化，氧化产物导致药物变色，并且对人体有毒性作用，应严格控制其限量 间氨基酚引入的途径有二：一是未反应完全的原料；二是对氨基水杨酸钠遇热或日光照射脱羧 第22页/共40页 第六章 芳酸类药物分析 【检查】有关物质 避光操作。取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.7mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻

11、度，摇匀，作为对照溶液A。另取间氨基酚对照品适量，精密称定，加流动相稀释制成每1ml中含1.2g的溶液，作为对照品溶液B。照含量测定项下的色谱条件，检测波长为280nm测定，理论板数按对氨基水杨酸钠峰计算应不低于3000，对氨基水杨酸钠峰与杂质峰之间的分离度应符合要求。取对照溶液A 20l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基水杨酸钠色谱峰的峰高为满量程的2025。另精密量取供试品溶液、对照溶液A与对照品溶液B各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色谱图中如有与间氨基酚峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得过0.25%，其他单个杂质

12、峰面积不得大于对照溶液A主峰面积的1/10（0.1%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液A主峰面积（1.0%）。第23页/共40页 第六章 芳酸类药物分析三、含量测定1.酸碱滴定法1.基本原理：阿司匹林结构中有羧基有酸性（Ka105），可用氢氧化钠滴定液直接滴定。滴定生成的乙酰水杨酸钠偏碱性，故用酚酞为指示剂 第24页/共40页 第六章 芳酸类药物分析【实例分析实例分析】阿司匹林原料的含量测定阿司匹林原料的含量测定 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L

13、)相当于18.02mg 的C9H8O4。阿司匹林的百分含量式中 V:氢氧化钠滴定液消耗的体积，ml；T：滴定度（18.02mg）；F:滴定液浓度校正系数；W：供试品取样量。第25页/共40页 第六章 芳酸类药物分析注意事项：（1）中性乙醇：阿司匹林在乙醇中溶解度大，不易水解；乙 醇中有微量乙酸等物质，故应制成中性（对酚酞指示液 显中性）；（2）为防止阿司匹林在滴定过程中水解，一要快速滴定，二 要剧烈振摇，防止局部碱过浓；（4）滴定终点后，因乙酰水杨酸钠逐渐水解，会使粉红色褪 去，所以要注意判断终点第26页/共40页 第六章 芳酸类药物分析2.高效液相色谱法 阿司匹林片和阿司匹林肠溶片中除了加入

14、少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，在制剂的过程中也会有水解产物水杨酸、醋酸产生，如果制剂含量测定采用直接酸碱滴定法，则所加枸橼酸或酒石酸以及水解产物水杨酸、醋酸就会消耗氢氧化钠滴定液，使测定结果偏高，所以不能采用直接酸碱滴定法。中国药典（2010）中阿司匹林的制剂，对氨基水杨酸钠原料和制剂，贝诺酯原料和制剂均采用高效液相法。以阿司匹林片剂含量分析为例介绍。第27页/共40页 第六章 芳酸类药物分析 照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相；检测波长为276nm。理论板数按阿司匹林峰计算不低于

15、3000，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。测定法 取本品20片，精密称定，充分研细，精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林10mg），置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解，并用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用有机相滤膜（孔径：0.45）滤过，精密量取续滤液10l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照品约20mg，精密称定，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解，并用1%冰醋酸的甲醇稀释到刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。第28页/共40页第六章 芳酸及其酯类药物的分析第二节 苯甲酸类药物的分析 苯甲酸及其钠盐结构理化性质鉴

16、 别检 查含量测定第29页/共40页第六章 芳酸药物的分析药物结构理化性质与分析方法 2.羧基4.苯环3.芳酸1.在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在水中微溶，在沸水中溶解；其钠盐在水中易溶，乙醇中略溶2.酸性，用于定量 3.三氯化铁呈色反应4.共轭双键，紫外吸收 1.溶解性一、苯甲酸及其钠盐的结构、主要理化性质与分析方法返返 回回 第30页/共40页第六章 芳酸药物的分析二、苯甲酸及其钠盐分析（一）鉴别试验 1.1.三氯化铁反应三氯化铁反应 在碱性溶液和苯甲酸钠在中性溶液，苯甲酸与三氯化铁试液生成沉淀。第31页/共40页第六章 芳酸药物的分析2.分解产物的反应分解产物的反应 苯甲酸钠升华试验：苯甲酸

17、钠固体，加硫酸，加热，可见白色苯甲酸凝结在试管内壁。此反应收载于中国药典（2005年版）附录“一般鉴别试验”中。3.红外光谱法红外光谱法 供试品红外光吸收图谱与对照的图谱比较应一致。第32页/共40页第六章 芳酸药物的分析(二二)含量测定含量测定1.苯甲酸直接酸碱滴定法苯甲酸直接酸碱滴定法 基本原理：苯甲酸酸性较强，水中溶解度小，而其钠盐在水中溶解度大，故以中性稀乙醇为溶剂,可用氢氧化钠滴定液直接滴定。终点产物为苯甲酸钠，偏碱性，以酚酞为指示剂。第33页/共40页第六章 芳酸药物的分析【实例分析实例分析】苯甲酸的含量测定苯甲酸的含量测定 取苯甲酸约0.25g,精密称定，得0.2478g。加中性

18、稀乙醇（对酚酞指示液显中性）25ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1033mol/L)滴定，消耗滴定液19.72ml，每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于12.21mg 的C7H6O2。第34页/共40页第六章 芳酸药物的分析分析：苯甲酸的百分含量 F 苯甲酸的百分含量 100.4第35页/共40页第六章 芳酸药物的分析2.苯甲酸钠的双相滴定法苯甲酸钠的双相滴定法 基本原理：苯甲酸钠易溶于水，苯甲酸易溶于乙醚，在乙醚和水组成双相体系中，用盐酸直接滴定水相的苯甲酸钠，生成的苯甲酸溶于乙醚，降低了水相的酸性，增大滴定突越，使滴定完全，终点易于判定，定量准确。第36页/

19、共40页第六章 芳酸药物的分析【实例分析实例分析】苯甲酸钠的双相滴定法苯甲酸钠的双相滴定法 取苯甲酸钠约1.5g，精密称定得1.574g，置分液漏斗中，加水25ml，振摇使溶解。加乙醚50ml，甲基橙指示液 2滴，用盐酸滴定液(0.5012mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色；分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml 洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液(0.5012mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续的橙红色，消耗盐酸滴定液21.52ml。已知每1ml盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5NaO2。第37页/共40页第六章 芳酸药物的分析分析：开始滴定时，由于水层中有高浓度的苯甲酸钠，在用乙醚振摇提前过程中，少量的苯甲酸钠溶解于乙醚中。分离水和醚层后，用水洗乙醚层，目的是将溶于乙醚的微量的苯甲酸钠回提取到水中，合并水提取液，继续滴定，使苯甲酸钠滴定完全，减少损失。第38页/共40页第六章 芳酸药物的分析苯甲酸钠的百分含量 98.76 第39页/共40页