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1、会计学1细菌的革兰染色法细菌的革兰染色法二、实验原理二、实验原理二、实验原理二、实验原理革兰氏染色法（革兰氏染色法（革兰氏染色法（革兰氏染色法（Gram,Gram,Gram,Gram,丹麦，丹麦，丹麦，丹麦，1884188418841884年）年）年）年）（1 1 1 1）是细菌学上最常用的鉴别染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将，染色后，可将，染色后，可将，染色后，可将细菌分为细菌分为细菌分为细菌分为G G G G+菌和菌和菌和菌和G G G G-菌。菌。菌。菌。（2 2 2 2）机理）机理）机理）机理 主要因为两类细菌细胞
2、壁结构和成分不同。主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。G G G G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（菌细胞壁：肽聚糖含量高（菌细胞壁：肽聚糖含量高（菌细胞壁：肽聚糖含量高（90909090）、交联程度高、）、交联程度高、）、交联程度高、）、交联程度高、肽聚糖层厚、肽聚糖层厚、肽聚糖层厚、肽聚糖层厚、脂类含量少脂类含量少脂类含量少脂类含量少用乙醇不易脱色；用乙醇不易脱色；用乙醇不易脱色；用乙醇不易脱色；G G G G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（菌细胞壁：肽聚糖含量低（菌细胞壁：肽聚糖含量低（菌细胞壁：肽聚糖含量低（101010
3、10）、交联程度低，）、交联程度低，）、交联程度低，）、交联程度低，肽聚糖层薄、肽聚糖层薄、肽聚糖层薄、肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高外壁层脂类含量较高外壁层脂类含量较高外壁层脂类含量较高用乙醇易脱色。用乙醇易脱色。用乙醇易脱色。用乙醇易脱色。第1页/共9页第2页/共9页三、实验材料三、实验材料三、实验材料三、实验材料1.1.1.1.菌种菌种菌种菌种（1 1 1 1）枯草芽孢杆菌（）枯草芽孢杆菌（）枯草芽孢杆菌（）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilisBacillus subtilisBacillus subtilisBacillus subtilis）（2 2 2 2）大肠杆菌（）
4、大肠杆菌（）大肠杆菌（）大肠杆菌（Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli）培养培养培养培养24h24h24h24h，用于革兰氏染色。，用于革兰氏染色。，用于革兰氏染色。，用于革兰氏染色。2.2.2.2.染色液和试剂染色液和试剂染色液和试剂染色液和试剂 草草草草酸酸酸酸铵铵铵铵结结结结晶晶晶晶紫紫紫紫染染染染液液液液、卢卢卢卢革革革革氏氏氏氏碘碘碘碘液液液液、95%95%95%95%酒酒酒酒精精精精、番番番番红红红红染染染染液液液液、生理盐水、乙醚生理盐水、乙醚生理盐水、乙醚生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油
5、。乙醇溶液、香柏油。乙醇溶液、香柏油。乙醇溶液、香柏油。3.3.3.3.器材器材器材器材 废废废废液液液液缸缸缸缸、洗洗洗洗瓶瓶瓶瓶、载载载载玻玻玻玻片片片片、接接接接种种种种环环环环、酒酒酒酒精精精精灯灯灯灯、擦擦擦擦镜镜镜镜纸纸纸纸、显微镜等。显微镜等。显微镜等。显微镜等。第3页/共9页四、实验方法四、实验方法四、实验方法四、实验方法1.1.1.1.革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色（1 1 1 1）步骤）步骤）步骤）步骤 取一干净载玻片取一干净载玻片取一干净载玻片取一干净载玻片在两端各加一滴生理盐水在两端各加一滴生理盐水在两端各加一滴生理盐水在两端各加一滴生理盐水无无无无菌操作取菌
6、种菌操作取菌种菌操作取菌种菌操作取菌种涂于生理盐水中（涂于生理盐水中（涂于生理盐水中（涂于生理盐水中（成菌膜成菌膜成菌膜成菌膜）自然干燥自然干燥自然干燥自然干燥火焰固定火焰固定火焰固定火焰固定初染初染初染初染（结晶紫，结晶紫，结晶紫，结晶紫，1min1min1min1min）水洗水洗水洗水洗媒染媒染媒染媒染（碘液，碘液，碘液，碘液，1min1min1min1min）水洗水洗水洗水洗脱脱脱脱色色色色（乙醇，乙醇，乙醇，乙醇，20-30s20-30s20-30s20-30s）水洗水洗水洗水洗复染复染复染复染（蕃红，蕃红，蕃红，蕃红，2min2min2min2min）水洗水洗水洗水洗自然干燥自然干燥
7、自然干燥自然干燥观察。观察。观察。观察。第4页/共9页第5页/共9页 革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌第6页/共9页（2 2）注意事项）注意事项n n选用对数期的细菌；选用对数期的细菌；n n载玻片要洁净无油迹；载玻片要洁净无油迹；n n涂片时，滴生理盐水不要过多，涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄；宜薄；n n酒精脱色：是革兰氏染色成败的酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，关键，要求脱至流出的乙醇不带要求脱至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗。颜色为止，立即水洗。第7页/共9页五、实验作业五、实验作业1.1.分别绘出分别绘出枯草杆菌枯草杆菌和和大肠杆菌大肠杆菌的的形态图，并注明两菌的革兰氏染形态图，并注明两菌的革兰氏染色的结果。色的结果。第8页/共9页