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1、会计学1临床检验方法确认与性能验证临床检验方法确认与性能验证临床检验方法确认与性能验证临床检验方法确认与性能验证n n概念概念n n目的目的n n具体操作具体操作n n其他其他第1页/共102页一一.概念概念n n确认（确认（validation）n n验证（验证（verification）第2页/共102页确认（确认（validation）n n在实验室当前条件下，证实所得检验结果是否可以满足临床需要，能为患者提供可靠的的临床结果过程。本质上实际就是误差评价（error assessment），如果误差太大将会造成结果不正确的解释！n n确认的手段应是是实际的或是模拟的！第3页/共102页验
2、证（验证（verification）n n实验室按厂商说明的方法能否得到预期结果n n验证的手段可以是下述活动，如：变换方法进行计算；将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较；进行试验和演示；发布文件前的评审。第4页/共102页ISO15189的概念的概念确认确认确认确认（validationvalidation）通过提供客观证据通过提供客观证据对特定对特定对特定对特定的预期用途或应用要求的预期用途或应用要求的预期用途或应用要求的预期用途或应用要求已得到满足的认定。已得到满足的认定。注：注：“已确认已确认”一词用于表示相应的状态。一词用于表示相应的状态。确确 认所使用的条件可以是实际的或是模
3、拟的。认所使用的条件可以是实际的或是模拟的。验证验证验证验证（verificationverification）通过提供客观证据对通过提供客观证据对规定规定规定规定要求要求要求要求已得到满足的认定已得到满足的认定注：注：“已验证已验证”一词用于表示相应的状态。一词用于表示相应的状态。认定可包括下述活动，如：认定可包括下述活动，如：变换方法进行计算；将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较；变换方法进行计算；将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较；进行试验和演示；发布文件前的评审。进行试验和演示；发布文件前的评审。第6页/共102页二二.目的目的n n结果互认结果互认n n医院实验室管理办
4、法医院实验室管理办法n nCLIA88n nCNAS-CL02第7页/共102页三三.具体操作具体操作（一）统计学基础知识（二）检验方法分类（三）方法的选择（四）常用物质（五）一些基本术语（六）质量规范（七）具体操作第13页/共102页（一）统计学基础知识（一）统计学基础知识n n概述概述n n临床检验结果质量检验数据的分类临床检验结果质量检验数据的分类n n统计方法的分类统计方法的分类n n随机变量及其分布随机变量及其分布n n正态分布正态分布n n抽样分布抽样分布n n大数定律和中心极限定律大数定律和中心极限定律n n平均数与标准差平均数与标准差n n均数的抽样误差与均数的抽样误差与t t
5、分布分布n n两均数差别的统计学意义检验两均数差别的统计学意义检验n n方差分析方差分析n n直线回归与相关直线回归与相关n n观察值一致性观察值一致性第14页/共102页（二）检验方法分类（二）检验方法分类（二）检验方法分类（二）检验方法分类n n决定性方法决定性方法（definitive method）：经详尽研究尚未发现 不准确度不准确度或不确定性不确定性原因的方法；n n参考方法（reference method）：经详尽研究证实其不准确度与不 精密度可以忽略的方法；n n常规方法常规方法（routine method）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。第15页/共102页（
6、三）方法的选择（三）方法的选择（三）方法的选择（三）方法的选择n n足够特异、灵敏、精密度好n n校准可溯源n n有实验证据（杂志、自）n n与其他检验项目相比有点何在 第16页/共102页（四）常用物质（四）常用物质（四）常用物质（四）常用物质n n1.标准物质/参考物质（reference material）n n2.校准品（calibrator）n n3.质控物质控物/控制品控制品（control material）第17页/共102页1.1.标准物质标准物质标准物质标准物质n n概念：又称参考物质（概念：又称参考物质（reference material reference mater
7、ial），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，标准物质的定值结果一般表示为：标准值物质，标准物质的定值结果一般表示为：标准值 总不确定度。总不确定度。“标准物质证书标准物质证书“是介绍标准物质的技术是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质（文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质（certified certified reference material,CRM reference material,
8、CRM），其特性值由建立了溯源性的程序确定，可溯源至准确复现该特性值的计量单位，），其特性值由建立了溯源性的程序确定，可溯源至准确复现该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。n n作用：校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值作用：校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值n n分类：分类：一级标准物质一级标准物质一级标准物质一级标准物质（primary reference material primary reference material）：稳定、均一，采用高度准确、可靠的若干方法定值，可）：稳定、均一，采用高度准确、
9、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国内最高水平的有证用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国内最高水平的有证标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如：标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如：人血清无机成分分析标准物质（人血清无机成分分析标准物质（GBW09135 GBW09135）和）和血清胆固醇标准物质（血清胆固醇标准物质（GBW 09138 GBW 09138）。）。二级标准物质二级标准物质二级标准物质二级标准物质（secondary reference materi
10、al secondary reference material）：用一级标准物质校准，）：用一级标准物质校准，参考方法定值。如：参考方法定值。如：红细胞微粒标准物质红细胞微粒标准物质 GBW GBW（E E）090001 090001、胆红素标准物质、胆红素标准物质 GBW GBW（E E）090002 090002、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质 GBW GBW（E E）090004 090004 和纯化血红蛋白标准物质和纯化血红蛋白标准物质 GBW GBW（E E）090011 090011。第18页/共102页2.校准品校准品第19页/共102页第20页/共1
11、02页3.3.质控品质控品质控品质控品n n概念：n n分类：定值质控品 非定值质控品 检测系统配套的控制品检测系统配套的控制品 正确度控制品正确度控制品第21页/共102页质控品概念质控品概念n n具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均 一 和稳定的质控物，其瓶间变异 必须小于监测系统预期的变异，其常规检测应有助于确认报告范围。第22页/共102页定值质控品定值质控品第23页/共102页定值质控品定值质控品第24页/共102页n n但是公司的定值是从保护自己利益出发的。它标示的预期范围只是想告诉用户，只要你的测定值但是公司的定值是从保护自己利益出发的。它标
12、示的预期范围只是想告诉用户，只要你的测定值在范围，说明它的控制品是好的。因此不要将预期范围认为是控制的允许范围！在范围，说明它的控制品是好的。因此不要将预期范围认为是控制的允许范围！n n不定值控制品质量和定值的一样，只是厂商没有邀请实验室为控制品定值，在说明书上除定值内不定值控制品质量和定值的一样，只是厂商没有邀请实验室为控制品定值，在说明书上除定值内容外，其余都有，还告诉了用户高值或低值，当然更便宜！容外，其余都有，还告诉了用户高值或低值，当然更便宜！n n但无论定值或不定值，用户在使用时，须使用自己的检测系统建立自己的均值和标准差！但无论定值或不定值，用户在使用时，须使用自己的检测系统建
13、立自己的均值和标准差！但无论定值或不定值，用户在使用时，须使用自己的检测系统建立自己的均值和标准差！但无论定值或不定值，用户在使用时，须使用自己的检测系统建立自己的均值和标准差！只是只是定值控制品有一个预期的范围便于用户对照！但仅为对照，若两者相似不能说明用户结果准确，定值控制品有一个预期的范围便于用户对照！但仅为对照，若两者相似不能说明用户结果准确，不相似也不说明结果有问题。不相似也不说明结果有问题。n n国内限于条件国产控制品很少，由经销商推出的国外控制品真正属于定值的也不多，定值控制品国内限于条件国产控制品很少，由经销商推出的国外控制品真正属于定值的也不多，定值控制品因为价格贵，用户不接
14、受，但用户又要求是定值的控制品，因此不少经销商要求生产厂商提供一因为价格贵，用户不接受，但用户又要求是定值的控制品，因此不少经销商要求生产厂商提供一个公司自己检测的值，附在不定值控制品上，变成用户可接受的个公司自己检测的值，附在不定值控制品上，变成用户可接受的“定值定值”控制品！至于定控制品！至于定值所用的检测系统，方法学原理、仪器、试剂盒来源、操作程序都无可奉告！此时如果用户值所用的检测系统，方法学原理、仪器、试剂盒来源、操作程序都无可奉告！此时如果用户的靶值和的靶值和“所为定值所为定值”相差甚远，我们应该可以理解，并不是控制品质量有问题造成的！相差甚远，我们应该可以理解，并不是控制品质量有
15、问题造成的！第25页/共102页n n检测系统配套的控制品检测系统配套的控制品检测系统配套的控制品检测系统配套的控制品n n为了使用户及时了解检测系统的质量状况，大的诊断产品厂商（国际上六大），除提供为了使用户及时了解检测系统的质量状况，大的诊断产品厂商（国际上六大），除提供仪器、试剂、校准品外，还提供检测系统专用的控制品，必要时还为使用相同检测系统仪器、试剂、校准品外，还提供检测系统专用的控制品，必要时还为使用相同检测系统的用户提供相同批号的控制品，同时组织质量服务！此类控制品专用性强。如罗氏的的用户提供相同批号的控制品，同时组织质量服务！此类控制品专用性强。如罗氏的正常与病理控制品正常与病
16、理控制品Precinorm/PrecipathPrecinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校准品定值程序获得！，它的控制品定值完全按照校准品定值程序获得！而且定值一旦发现中间环节出错，还在网上为用户提供更新！而且定值一旦发现中间环节出错，还在网上为用户提供更新！n n正确度控制品正确度控制品正确度控制品正确度控制品n n为了随时保证检测系统对病人样本的检测结果具有溯源性，此时引入了正确度控制品，为了随时保证检测系统对病人样本的检测结果具有溯源性，此时引入了正确度控制品，ISO17511ISO17511标准定义正确度控制品为：用于评估检测系统检测偏倚的参考物质。而且有专标准定义
17、正确度控制品为：用于评估检测系统检测偏倚的参考物质。而且有专门的定值过程，该定制过程比校准品定值还要严格，门的定值过程，该定制过程比校准品定值还要严格，与定值控制品的定值属于相同检测与定值控制品的定值属于相同检测与定值控制品的定值属于相同检测与定值控制品的定值属于相同检测系统测定值的简单统计处理一定要分开！系统测定值的简单统计处理一定要分开！系统测定值的简单统计处理一定要分开！系统测定值的简单统计处理一定要分开！第26页/共102页（五）一些基本术语（五）一些基本术语（五）一些基本术语（五）一些基本术语n n准确度n n正确度n n精密度n n溯源性第27页/共102页nna.a.准确度与误差
18、准确度与误差准确度与误差准确度与误差nn准确度（准确度（accuracyaccuracy）的完整表达应是）的完整表达应是检测检测准确度（准确度（accuracy of measurementaccuracy of measurement）：检测结果与被测量）：检测结果与被测量真值真值或约定真值（可接受参照值）之间的一致程度（或约定真值（可接受参照值）之间的一致程度（GB/T3358.1GB/T3358.1、GB/T6379GB/T6379）.nn可接受参照值：用来做比较的经协商同意的值，它可以是理论值（真值），赋值，公认值或由程序确定的值。准确度不能直接得出，只能用可接受参照值：用来做比较的经
19、协商同意的值，它可以是理论值（真值），赋值，公认值或由程序确定的值。准确度不能直接得出，只能用偏离（偏离（偏离（偏离（deviationdeviation）也就是误也就是误差从反面衡量差从反面衡量nn误差：测量值与真值之间的偏离，包括误差：测量值与真值之间的偏离，包括RERE和和SESE。误差是用来度量不准确度的。误差是用来度量不准确度的。nn这样对于检测结果只做一次时，结果的偏离这样对于检测结果只做一次时，结果的偏离nn即不准确度即不准确度=分析过程的不正确度分析过程的不正确度+分析过程的不精密度分析过程的不精密度nn也即不准确度也即不准确度=总误差总误差=分析过程的随机误差分析过程的随机误
20、差+分析过程的系统误差分析过程的系统误差nnb.b.正确度与偏倚正确度与偏倚正确度与偏倚正确度与偏倚nn正确度（正确度（truneestrunees）即真实度，完整表达检测真实度：）即真实度，完整表达检测真实度：大量检测结果得到的均值大量检测结果得到的均值大量检测结果得到的均值大量检测结果得到的均值与可接受参考值之间的一致程度（与可接受参考值之间的一致程度（GB/T6379GB/T6379），用偏倚（），用偏倚（biasbias）来表示）来表示,即测试结果的期望即测试结果的期望与真值（可接受参考值）之差。（与真值（可接受参考值）之差。（GB/T6379GB/T6379）nn系统误差系统误差系统
21、误差系统误差：在可重复的条件下，大量检测结果的均值与真值之差：在可重复的条件下，大量检测结果的均值与真值之差nn偏倚表示的是一种系统误差。偏倚表示的是一种系统误差。nnc.c.精密度和标准差精密度和标准差精密度和标准差精密度和标准差nn精密度（精密度（precisionprecision），完整表达检测精密度：在规定条件下独立测试结果之间一致程度（），完整表达检测精密度：在规定条件下独立测试结果之间一致程度（GB/T6379GB/T6379）。用标准差或变异系数来表示。分为两种，）。用标准差或变异系数来表示。分为两种，“重复性重复性（repeatabilityrepeatability）”相同
22、条件下执行连续测量结果之间的一致性程度，又称为序列内精密度和批内精密度。相同条件下执行连续测量结果之间的一致性程度，又称为序列内精密度和批内精密度。“再现性（再现性（reproducibilityreproducibility）”在改变测量条件下执行测量结果之在改变测量条件下执行测量结果之间的一致性程度。间的一致性程度。nn随机误差随机误差随机误差随机误差（random errorrandom error）：在可重复的条件下，对相同的被测量无数次检测结果的均值，与检测结果的差异。用）：在可重复的条件下，对相同的被测量无数次检测结果的均值，与检测结果的差异。用标准差标准差标准差标准差和和变异系数
23、变异系数变异系数变异系数度量。度量。nnd.d.总误差总误差总误差总误差nn总误差（总误差（total error,TEtotal error,TE）:能影响分析准确度的确定误差的组合能影响分析准确度的确定误差的组合【CLSI EP15-A2CLSI EP15-A2】,即偏倚和不精密度的和。即偏倚和不精密度的和。nn基于科学原理的理论或确定值基于科学原理的理论或确定值nn基于一些国家或组织的实验工作的指定值或认证值基于一些国家或组织的实验工作的指定值或认证值nn基于科学或工程组织赞助下合作实验工作中的同意值或认证值。基于科学或工程组织赞助下合作实验工作中的同意值或认证值。nn以上三点不能获得时
24、，则用可获得的期望，即规定测量总体的均值。以上三点不能获得时，则用可获得的期望，即规定测量总体的均值。第28页/共102页溯源性溯源性 通过一条连续的比较连，使通过一条连续的比较连，使FPS检测结果与检测结果与国际或国家的参考系统（在参考实验室，国际或国家的参考系统（在参考实验室，使用参考方法，参考品得到的结果）联系使用参考方法，参考品得到的结果）联系起来的特性起来的特性第29页/共102页（六）质量规范（六）质量规范（六）质量规范（六）质量规范n n质量规范简史质量规范简史 1963年加拿大临床化学家David Tonks建议用参考区间的宽度1/4表示允许误差。1968年临床化学家Roy B
25、arnett博士提出标准差表示允许误差。1976年CAP举办的分析目标讨论会议，Westgard提出了以“允许总误差”作为规定质量的最佳形式，一直沿用至今。第30页/共102页 19991999年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的“建立全球分析质量规范建立全球分析质量规范建立全球分析质量规范建立全球分析质量规范”，其结果提出了，其结果提出了，其结果提出了，其结果提出了“质量规范（质量规范（质量规范（质
26、量规范（quality specificationsquality specifications）”的层次结构：的层次结构：的层次结构：的层次结构：n n1.1.评价在特定情况下分析性能对临床结果的影响评价在特定情况下分析性能对临床结果的影响n n2.2.评价在一般情况下分析性能对临床决策的影响评价在一般情况下分析性能对临床决策的影响n n3.3.基于生物学变异的规范基于生物学变异的规范基于生物学变异的规范基于生物学变异的规范n n4.4.基于临床医生观点的分析基于临床医生观点的分析n n5.5.已发表专业推荐已发表专业推荐n n来自国家和国际的专家组来自国家和国际的专家组n n来自地方组织或
27、某个国家来自地方组织或某个国家n n6.6.基于法规和基于法规和EQAEQA的质量规范的质量规范n n法规机构法规机构法规机构法规机构n n能力验证（能力验证（PTPT）和（或）室间质评计划（）和（或）室间质评计划（EQASEQAS）组织者）组织者n n7.7.基于当前分析技术的目标基于当前分析技术的目标n n有时间质量质量评价或能力验证计划数据证实有时间质量质量评价或能力验证计划数据证实n n由当前发表方法学性能文章由当前发表方法学性能文章第31页/共102页3.基于生物学变异的规范。基于生物学变异的规范。第32页/共102页用法用法n nCVCVA A1/2CV1/2CVI In nB B
28、A A1/41/4（CVCVI I2 2+CV+CVGG2 2）1/21/2n nCVCV仪器之间仪器之间仪器之间仪器之间1/3CV1/3CVI In nTE1.65CVTE1.65CVA A+B+BA A(0.05)(0.05)TE2.33CV TE2.33CVA A+B+BA A(0.01)(0.01)n n不精密度不精密度不精密度不精密度CVCV：用于室内质控精密度分析用于室内质控精密度分析用于室内质控精密度分析用于室内质控精密度分析 用于方法学性能验证：用于方法学性能验证：用于方法学性能验证：用于方法学性能验证：1.1.与客观比较与客观比较与客观比较与客观比较 2.2.与厂家比较与厂家
29、比较与厂家比较与厂家比较n n偏差偏差偏差偏差BiasBias：用于方法学比较，即考核真实度。：用于方法学比较，即考核真实度。：用于方法学比较，即考核真实度。：用于方法学比较，即考核真实度。n n允许总误差允许总误差允许总误差允许总误差TeaTea：用于：用于：用于：用于EQAEQA第33页/共102页第34页/共102页5.5.已发表专业推荐已发表专业推荐已发表专业推荐已发表专业推荐第35页/共102页6.6.基于法规和基于法规和基于法规和基于法规和EQAEQA的质量规范的质量规范的质量规范的质量规范第36页/共102页第37页/共102页（七）具体操作（七）具体操作（七）具体操作（七）具体
30、操作n n内容n n常用的方案n n具体方案第38页/共102页方法确认方法确认方法确认方法确认n n内容：总是包括可报告范围、精密度、准确度和参考区间。某些研究还应包括检出限（或灵敏度）、特异度、干扰和回收以及校准品确认。CLIA规则规定对不同复杂程度分不同复杂程度分类的方法需要确认不同的特征类的方法需要确认不同的特征。对不太复杂的方法，要求很少的研究。对于自建检测系统或实验室修改的方法需要更多的实验。第39页/共102页方法验证方法验证n n除应验证仪器的安装和检验程序的操作外n n对于定量方法 应验证：测量精密度：包括重复性和再现性、患者结果与以前方法或参考程序之间的一致性、应验证：测量
31、精密度：包括重复性和再现性、患者结果与以前方法或参考程序之间的一致性、在整个分析测量范围内被测量的回收、高浓度的携带污染、干扰或非特异性（溶血、脂血、在整个分析测量范围内被测量的回收、高浓度的携带污染、干扰或非特异性（溶血、脂血、黄疸、容器添加剂、药物）、参考区间。黄疸、容器添加剂、药物）、参考区间。n n对于定性方法 应验证阳性和阴性及临界值上和下标本的再现性和重复性、患者结果的一致性、携带污染、应验证阳性和阴性及临界值上和下标本的再现性和重复性、患者结果的一致性、携带污染、干扰或非特异性。干扰或非特异性。第40页/共102页常用的方案常用的方案1.1.相关机构：相关机构：NCCLA/CLS
32、INCCLA/CLSI、CLIACLIA2.2.具体方案具体方案n n定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价:CLSI EP10CLSI EP10n n定性测试性能评估定性测试性能评估定性测试性能评估定性测试性能评估：CLSI EP12CLSI EP12n n基质效应的评价基质效应的评价基质效应的评价基质效应的评价：CLSI EP14CLSI EP14n n精密度和正确度性能的用户验证：精密度和正确度性能的用户验证：精密度和正确度性能的用户验证：精密度和正确度性能的用户验证：CLSI EP15-ACLSI EP15-An n使用使用使用
33、使用ROCROC曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价：CLSI GP10CLSI GP10n n总误差估计总误差估计总误差估计总误差估计 :CLSI EP21-A:CLSI EP21-A：临床实验方法总分析误差的估计：临床实验方法总分析误差的估计n n精密度评价精密度评价精密度评价精密度评价:EP5-AEP5-A，临床化学设备精密性能的评价，临床化学设备精密性能的评价，临床化学设备精密性能的评价，临床化学设备精密性能的评价n n准确度评价：准确度评价：准确度评价：准确度评价：方法比较试验方法比较试验EP9-AEP9-A
34、，使用病人样本进行方法比较和偏倚估计，使用病人样本进行方法比较和偏倚估计，使用病人样本进行方法比较和偏倚估计，使用病人样本进行方法比较和偏倚估计 回收实验回收实验 干扰试验干扰试验EP7-PEP7-P，临床化学干扰试验，临床化学干扰试验，临床化学干扰试验，临床化学干扰试验n n总误差估计总误差估计总误差估计总误差估计 :CLSI EP21-A:CLSI EP21-A：临床实验方法总分析误差的估计：临床实验方法总分析误差的估计n n患者结果可报告范围（即线性范围）的验证：患者结果可报告范围（即线性范围）的验证：患者结果可报告范围（即线性范围）的验证：患者结果可报告范围（即线性范围）的验证：EP6
35、-AEP6-A：定量分析方法线性的评价：定量分析方法线性的评价：定量分析方法线性的评价：定量分析方法线性的评价 n n临床可报告范围的确立临床可报告范围的确立临床可报告范围的确立临床可报告范围的确立n n参考范围参考范围参考范围参考范围 ：NCCLS/CLSI C28-ANCCLS/CLSI C28-A ：临床实验室如何定义和确定参照区间临床实验室如何定义和确定参照区间n n交叉污染交叉污染交叉污染交叉污染:NCCLS/CLSI EP10-ANCCLS/CLSI EP10-A n n分析灵敏度分析灵敏度分析灵敏度分析灵敏度:CLSI EP17-ACLSI EP17-A：检出限和定量下限确定方案
36、：检出限和定量下限确定方案n n分析特异性分析特异性分析特异性分析特异性:NCCLA/CLSI EP7-A:NCCLA/CLSI EP7-A:临床化学干扰试验临床化学干扰试验临床化学干扰试验临床化学干扰试验 第41页/共102页评价检验结果的准确度评价检验结果的准确度n n除按ISO/IEC l7025对实验室质量体系评价外，在实际工作中我们常用以下几种方法来核验、评价检验结果的准确度。n n用标准物质评价检验结果的准确度（t检验）n n用标准方法评价分析结果的准确度n n回收率试验第42页/共102页Westgard确定不精密度的方法确定不精密度的方法n n考虑因素考虑因素1.1.实验周期：
37、实验周期：2020天以内天以内2.2.样本基质样本基质3.3.检测材料数量和浓度水平：检测材料数量和浓度水平：MDLMDL4.4.检测样本个数：检测样本个数：2020次次5.5.数据计算：数据计算：CV/SCV/S6.6.可接受性能准则可接受性能准则 S Sw-runw-run/S/Sw-dayw-day1/4TEa1/4TEa S SI-runI-run1/3TEa1/3TEa7.7.厂家声明的验证厂家声明的验证8.8.推荐的最低程度研究推荐的最低程度研究9.9.基于未来的考虑基于未来的考虑第43页/共102页厂家声明的验证厂家声明的验证厂家声明的验证厂家声明的验证 CLIA CLIA并没有
38、严格地要求实验室确定性能的可接受性。更确切地，并没有严格地要求实验室确定性能的可接受性。更确切地，CLIACLIA主张实验室应验证厂家精密主张实验室应验证厂家精密度的声明。这可由度的声明。这可由F F检验检验检验检验完成，如下：完成，如下：n n1.1.从厂家声明材料（通常包括在仪器的文件中）中获得用于从厂家声明材料（通常包括在仪器的文件中）中获得用于n n重复性实验的预期标准差和测量个数，如基于重复性实验的预期标准差和测量个数，如基于3131次测量的标次测量的标n n准差（准差（s s）为）为3mg/dl3mg/dl。n n2.2.从你的重复实验获得的标准差和测量结果个数，如基于从你的重复实
39、验获得的标准差和测量结果个数，如基于2121n n个测量的标准差为个测量的标准差为4mg/dl4mg/dl。n n3.3.计算计算F F值，较大值，较大s s平方除较小平方除较小s s平方，即平方，即=16/9=16/9=n n1.781.78。n n4.4.查查F F值表，查分子自由度为值表，查分子自由度为2020，分母自由度为，分母自由度为3030的临界的临界F Fn n值，其值为值，其值为1.931.93。n n5.5.在这一实例中，计算的在这一实例中，计算的F F值小于临界值小于临界F F值，其表示实验室观值，其表示实验室观n n测的测的s s与厂家声明的与厂家声明的s s之间没有真正
40、的差异。之间没有真正的差异。n n6.6.结论结论已验证厂家的声明。已验证厂家的声明。第44页/共102页推荐的最低程度研究推荐的最低程度研究推荐的最低程度研究推荐的最低程度研究n n选择至少选择至少2 2个不同浓度控制物代表了研究项目的低和高的医个不同浓度控制物代表了研究项目的低和高的医 学决定性浓度。每一个浓度在一批内或一天内对每一控制物学决定性浓度。每一个浓度在一批内或一天内对每一控制物 检测检测2020个样本获得短期的不精密度估计值。计算每一控制物个样本获得短期的不精密度估计值。计算每一控制物 的均值、标准差和变异系数。在进行更进一步实验之前确定的均值、标准差和变异系数。在进行更进一步
41、实验之前确定 短期不精密度是否可接受。短期不精密度是否可接受。n n在在2020个不同天对两个控制物的每一种分析个不同天对两个控制物的每一种分析1 1个样本，确定长个样本，确定长 期的不精密度。计算每一材料的均值、标准差和变异系数。期的不精密度。计算每一材料的均值、标准差和变异系数。确定长期不精密度是否可接受。确定长期不精密度是否可接受。第45页/共102页基于未来的考虑基于未来的考虑基于未来的考虑基于未来的考虑 采用更为详细的实验设计提供关于短期和长期变异量的信息。这些设计采用更为详细的实验设计提供关于短期和长期变异量的信息。这些设计通常使用方差分析（通常使用方差分析（analysis of
42、variance,ANOVA)analysis ofvariance,ANOVA)，如，如CLSICLSI精密度方案所精密度方案所精密度方案所精密度方案所阐述阐述阐述阐述EP5EP5方案预期用于厂家的精密度评价，而方案预期用于厂家的精密度评价，而方案预期用于厂家的精密度评价，而方案预期用于厂家的精密度评价，而EP15EP15方案预期用于临床实方案预期用于临床实方案预期用于临床实方案预期用于临床实验室用户进行的评价。验室用户进行的评价。验室用户进行的评价。验室用户进行的评价。EP15EP15明确指出在明确指出在5 5天的时间内每天最少是采用天的时间内每天最少是采用3 3个个重复测量，给出总的重复
43、测量，给出总的1515个测量值。为了估计总的不精密度，计算提供确个测量值。为了估计总的不精密度，计算提供确定批内和批间分量的方式，然后将其结合来提供总的不精密度。在定批内和批间分量的方式，然后将其结合来提供总的不精密度。在EP15EP15附录中描述了所需要的计算，以及一组数据实例显示如何验证厂附录中描述了所需要的计算，以及一组数据实例显示如何验证厂家的声明。给出的家的声明。给出的EP15EP15允许仅只有允许仅只有允许仅只有允许仅只有5 5天的数据就可进行精密度验证，很天的数据就可进行精密度验证，很天的数据就可进行精密度验证，很天的数据就可进行精密度验证，很有可能它将成为许多实验室采用的方案。
44、有可能它将成为许多实验室采用的方案。有可能它将成为许多实验室采用的方案。有可能它将成为许多实验室采用的方案。第46页/共102页CLSI EP5-A2 定量方法精密度性能评价Evaluation of Precision Performance of Quantitative Methods;Approved GuidelineSecond Edition第47页/共102页精密度的内容精密度的内容n n批内精密度（重复性：repeatability）n n批间精密度n n日内精密度n n日间精密度n n实验室内精密度（within-laboratory precision）第48页/共102
45、页实验方法实验方法n n试剂和校准物：同一批号n n样本：基质与临床样本相似，2个以上浓度 （参考医学决定水平）。n n实验天数：20天以上n n实验次数：每天2批，每批2个样本，每个 样本重复2次第49页/共102页Westgard确定偏倚的方法确定偏倚的方法n n概述概述 由新方法（试验方法）和可比较方法同时分析患者样本的实验，基于两方法观测的差值估计系统误差。由新方法（试验方法）和可比较方法同时分析患者样本的实验，基于两方法观测的差值估计系统误差。n n考虑因素考虑因素n n1.1.可比较方法可比较方法n n2.2.患者标本数量患者标本数量n n3.3.单次或双份测量单次或双份测量n n
46、4.4.时间周期时间周期n n5.5.标本稳定性标本稳定性n n6.6.数据分析数据分析n n7.7.图形显示数据图形显示数据n n8.8.计算适当的统计量计算适当的统计量n n9.9.可接受性能标准可接受性能标准n n10.10.厂家声明的验证厂家声明的验证n n11.11.推荐的最低程度的研究推荐的最低程度的研究n n12.12.未来的发展方向未来的发展方向第50页/共102页1.1.可比较方法可比较方法可比较方法可比较方法 “可比较方法可比较方法”并不意味方法已证明其正确性。大多数常规实验方法归为此类。必须仔细解释并不意味方法已证明其正确性。大多数常规实验方法归为此类。必须仔细解释试验方
47、法和常规方法之间的任何差异。如果差别很小，则两方法具有相同的相对的准确度。试验方法和常规方法之间的任何差异。如果差别很小，则两方法具有相同的相对的准确度。如果如果差别很大差别很大差别很大差别很大并医学上不可接受，则需要识别哪一方法是不准确的。可并医学上不可接受，则需要识别哪一方法是不准确的。可采用回收和干扰采用回收和干扰采用回收和干扰采用回收和干扰实验实验提供这一额外的信息。提供这一额外的信息。第51页/共102页2.2.患者标本数量患者标本数量患者标本数量患者标本数量 两个方法检测最少两个方法检测最少4040份不同的患者标本。选择的这些份不同的患者标本。选择的这些标本覆盖整个方法的可报告范围
48、标本覆盖整个方法的可报告范围标本覆盖整个方法的可报告范围标本覆盖整个方法的可报告范围及代表及代表方法在常规应用预期疾病的浓度范围。检测标本的实际个数没有标本的质量重要。方法在常规应用预期疾病的浓度范围。检测标本的实际个数没有标本的质量重要。第52页/共102页3.3.单次或双份测量单次或双份测量单次或双份测量单次或双份测量n n双份测定双份测定n n不同的批、或至少不同的顺序（而不是在同一样本杯中来回重复）不同的样本（或杯）不同的批、或至少不同的顺序（而不是在同一样本杯中来回重复）不同的样本（或杯）第53页/共102页4.4.时间周期时间周期时间周期时间周期n n一般建议最少5天n n每天检测
49、2至5个患者标本第54页/共102页5.5.标本稳定性标本稳定性标本稳定性标本稳定性n n一般由试验和可比较方法在两个小时内对标本进行检测，除非标本有很短的稳定性第55页/共102页6.6.数据分析数据分析数据分析数据分析n n方式存在争论和讨论第56页/共102页7.7.图形显示数据图形显示数据图形显示数据图形显示数据 差值图（差值图（difference plotdifference plot）比对图比对图”（comparison plotcomparison plot）第57页/共102页8.8.计算适当的统计量计算适当的统计量计算适当的统计量计算适当的统计量n n1.1.以比较方法测定
50、值以比较方法测定值XcXc为横坐标，试验方法测定值为横坐标，试验方法测定值YcYc为纵坐标，采用直线回归或最小二乘法为纵坐标，采用直线回归或最小二乘法拟合直线，建立回归方拟合直线，建立回归方Yc=a+bXcYc=a+bXc，并由此计算在，并由此计算在MDLMDL时的时的时的时的SESE，SE=Yc-XcSE=Yc-Xcn n2.2.另一常计算的指标是相关系数另一常计算的指标是相关系数r r，主要用于，主要用于评价数据范围是否足够宽评价数据范围是否足够宽评价数据范围是否足够宽评价数据范围是否足够宽以便提供斜率和截距更以便提供斜率和截距更好的估计。而不是判断方法的可接受性。当好的估计。而不是判断方