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1、编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心仪器分析实验仪器分析实验仪器分析实验仪器分析实验高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法H Highigh P Performance erformance L Liquidiquid C ChromatographyhromatographyFor ShortFor Short：HPLCHPLC厦门大学精品课程厦门大学精品课程厦门大学精品课程厦门大学精品课程仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析(含实验含实验含实验含实验)
2、编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心实验目的实验目的了解了解HPLC仪器基本结构仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使掌握实验仪器的一般使用方法；用方法；加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择；的选择；掌握液相色谱定性定量分析技术。掌握液相色谱定性定量分析技术。实验内容实验内容反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年
3、年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心实验讲解要点实验讲解要点 一一、色谱分离原理色谱分离原理 二二、色谱分析技术色谱分析技术 三三、HPLC仪器和使用方法仪器和使用方法 四四、HPLC和和GC的比较的比较 五五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进一步巩固和提高所学知识和实验技能。一步巩固和提高所学知识和实验技能。一步巩固和提高所学知
4、识和实验技能。一步巩固和提高所学知识和实验技能。编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心一、色谱分离原理一、色谱分离原理色谱法是一类高效分离方法。色谱法是一类高效分离方法。色谱分离原理是什么？色谱分离原理是什么？HPLCHPLC和和GCGC仪器的分离部件是什么？仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？它们有什么不同？HPLCHPLC和和GCGC的主要差别？的主要差别？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验
5、教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心二、色谱分析技术二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。样品或多组分样品分析。常见的色谱定性方法？常见的色谱定性方法？色谱定量分析的依据？色谱定量分析的依据？气相色谱实验采用那种定量分析方法？有气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？何特点？HPLCHPLC和和GCGC的应用特点的应用特点 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化
6、学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心三、三、HPLC仪器和实验技术仪器和实验技术 HPLCHPLC仪器的基本组分？仪器的基本组分？主要部件的工作原理？主要部件的工作原理？HPLCHPLC和和GCGC仪器的比较仪器的比较 HPLCHPLC和和GCGC实验技术的比较实验技术的比较 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？人打过针？为什么没有？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实
7、验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心四、高效液相色谱仪的基本组成四、高效液相色谱仪的基本组成分几个系统？分几个系统？和和GCGC有何不同？有何不同？高压泵工作原理？高压泵工作原理？GCGC是如何进样的？是如何进样的？记录系统和记录系统和GCGC一样一样吗？吗？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心高压泵工作原理（单向阀）高压泵工作原理（单向阀）高压液体有危险吗？高压液体有危险吗？高压泵如何改变流速？高压泵如何改变流速？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教
8、教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心高压泵工作原理（单向阀）高压泵工作原理（单向阀）HPLCHPLC进样针与进样针与GCGC有何不同？有何不同？为什么为什么HPLCHPLC与与GCGC进样要求不同？进样要求不同？六通阀工作原理（流路切换）六通阀工作原理（流路切换）编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心五、五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 什么是正相色谱？什么
9、是反相色谱？什么是正相色谱？什么是反相色谱？什么是键合固定相？什么是键合固定相？预测一下苯和甲苯在预测一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保留反相柱上的保留顺序？顺序？什么是反相色谱疏水机理？什么是反相色谱疏水机理？本实验的主要色谱分析条件有那些？本实验的主要色谱分析条件有那些？流动相组成对保留时间有何影响？举例说流动相组成对保留时间有何影响？举例说明？明？改变检测波长对色谱图有何影响？改变检测波长对色谱图有何影响？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心HPLC的溶剂选择
10、的溶剂选择 本实验采用什么流动相？本实验采用什么流动相？什么是什么是HPLCHPLC级甲醇、乙腈溶剂？级甲醇、乙腈溶剂？如何获得超纯水？如何获得超纯水？本实验所用的流动相如何配制？本实验所用的流动相如何配制？流动相为什么要除气？如何除气？流动相为什么要除气？如何除气？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心六、实验部分六、实验部分 一、溶液配制一、溶液配制1 1 配制标准系列溶液配制标准系列溶液 三组分混标液：每三组分混标液：每mLmL溶液分别含溶液分别含1.00mg1.0
11、0mg苯、甲苯和苯、甲苯和乙苯。乙苯。分别准确移取分别准确移取0.400.40、0.800.80、1.201.20、1.601.60和和2.00mL2.00mL三三组分混标液于组分混标液于10mL10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。容量瓶中，用流动相溶剂定容。2 2 流动相的配制、过滤和除气。流动相的配制、过滤和除气。五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。苯。标准苯测试液。标准苯测试液。未知样品未知样品1 1号、号、2 2号和号和3 3号。号。编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范
12、中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心二、色谱实验条件二、色谱实验条件 A A组：组：Waters HPLCWaters HPLC仪仪色谱柱：色谱柱：Nova Pak C18(3.9150mm,4m)Nova Pak C18(3.9150mm,4m)流动相：流动相：CH3OH-H2O(70/30,v/v)CH3OH-H2O(70/30,v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L20LB B组：组：TSP HPLCTSP HPLC仪仪色谱柱：色谱柱：Hypersil BDS C18(4.
13、0200mm,5m)Hypersil BDS C18(4.0200mm,5m)流动相：流动相：CH3OH-H2O(80/20,v/v)CH3OH-H2O(80/20,v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L20L 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心化学实验教学示范中心三、实验内容与主要步骤三、实验内容与主要步骤1 1 更换流动相。更换流动相。2 2 开动仪器，让色谱柱平衡。开动仪器，让色谱柱平衡。3 3 设置色谱工作站参数。设置色谱工作站参数。4 4 进样、采集色谱图。进样、采集色谱图。1 1）五组分混标液）五组分混标液2 2）标准溶液系列）标准溶液系列3 3）未知样品）未知样品5 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。更换甲醇流动相，清洗色谱柱。7 7 关闭仪器。关闭仪器。