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1、1 1 1 1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。的简单染色法。的简单染色法。的简单染色法。2 2 2 2、初步认识细菌的形态特征。、初步认识细菌的形态特征。、初步认识细菌的形态特征。、初步认识细菌的形态特征。3 3 3 3、学习细菌的革兰氏染色原理和方法学习细菌的革兰氏染色原理和方法4 4、了解细菌的特殊形态结构：、了解细菌的特殊形态结构：芽孢、荚膜的染色芽孢、荚膜的染色5 5 5 5、学习训练无菌操作技术。、学习训练无菌操作技术。、学习训练无菌操
2、作技术。、学习训练无菌操作技术。实验目的第1页/共27页 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、
3、碱常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细因此碱性
4、染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。对比，在显微镜下更易于识别。对比，在显微镜下更易于识别。对比，在显微镜下更易于识别。实验原理1 1 1 1 细菌的简单染色细菌的简单染色细菌的简单染色细菌的简单染色第2页/共27页常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。红等。红
5、等。红等。当细菌分解糖类产酸使培养基当细菌分解糖类产酸使培养基当细菌分解糖类产酸使培养基当细菌分解糖类产酸使培养基pHpHpHpH下降时，细菌所下降时，细菌所下降时，细菌所下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。酸性染料染色。酸性染料染色。酸性染料染色。第3页/共27页1 1 1 1、菌种、菌种、菌种、菌种枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌1212121218h18h18h18h培养物培养物培养物培养物金黄色葡
6、萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌24h24h24h24h培养物培养物培养物培养物2 2 2 2、染色剂、染色剂、染色剂、染色剂吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液齐氏石碳酸复红染液齐氏石碳酸复红染液齐氏石碳酸复红染液齐氏石碳酸复红染液实验材料 第4页/共27页涂片干燥 固定染色水洗干燥镜检操作步骤 四、实验步骤四、实验步骤无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作第5页/共27页1 1、涂片、涂片 取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾
7、取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作从枯草杆菌（菌操作从枯草杆菌（菌操作从枯草杆菌（菌操作从枯草杆菌（1d1d1d1d）斜面上挑取少许菌苔于水）斜面上挑取少许菌苔于水）斜面上挑取少许菌苔于水）斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。滴中，混合并涂成薄膜。滴中，混合并涂成薄膜。滴中，混合并涂成薄膜。如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取如用菌悬液或液体培养物，可用接种环
8、挑取1-1-1-1-2 2 2 2环直接涂于载玻片上。环直接涂于载玻片上。环直接涂于载玻片上。环直接涂于载玻片上。Notes:1Notes:1Notes:1Notes:1）载玻片要洁净无油迹载玻片要洁净无油迹载玻片要洁净无油迹载玻片要洁净无油迹 2 2 2 2）滴生理盐水和取菌不宜过多）滴生理盐水和取菌不宜过多）滴生理盐水和取菌不宜过多）滴生理盐水和取菌不宜过多 3 3 3 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。操作步骤（操作步骤（操作步骤（操作步骤（continuedcontinuedcontinuedcontinu
9、ed）第6页/共27页菌悬液菌悬液菌悬液菌悬液涂片涂片涂片涂片干燥干燥干燥干燥滴加无菌滴加无菌滴加无菌滴加无菌水水水水固定固定固定固定取菌苔取菌苔取菌苔取菌苔涂片涂片涂片涂片操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤（continuedcontinuedcontinuedcontinued）第7页/共27页3 3 3 3、固定、固定、固定、固定固定的目的：固定的目的：固定的目的：固定的目的：1 1 1 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态；）使细胞质凝固，以固定细胞形态；）使细胞质凝固，以固定细胞形态；）使细胞质凝固，以固定细胞形态；2 2 2 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。）并使菌体牢固地附着在载玻片
10、上。）并使菌体牢固地附着在载玻片上。）并使菌体牢固地附着在载玻片上。固定方法：固定方法：固定方法：固定方法：热固定：涂面朝上，通过火焰数次热固定：涂面朝上，通过火焰数次热固定：涂面朝上，通过火焰数次热固定：涂面朝上，通过火焰数次注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态否则会改变甚至破坏细胞形态否则会改变甚至破坏细胞形态否则会改变甚至破坏细胞形态操作步骤（操作步骤（操作步骤（操作步骤（continuedcontinuedcontinuedcon
11、tinued）2 2 2 2、干燥、干燥、干燥、干燥 室温自然干燥室温自然干燥室温自然干燥室温自然干燥第8页/共27页4 4 4 4、染色、染色、染色、染色 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。美蓝染色美蓝染色美蓝染色美蓝染色1-2min1-2min1-2min1-2min；石碳酸复红染色约；石碳酸复红染色约；石碳酸复红染色约；石碳酸复红染色约1min1
12、min1min1min。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤（continuedcontinuedcontinuedcontinued）5 5 5 5、水洗、水洗、水洗、水洗倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。Note:Note:Note:Note:水洗时，不要直
13、接冲洗涂面，而应使水从载水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。第9页/共27页7 7 7 7、镜检、镜检、镜检、镜检 细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。操作步骤（操作步骤（操作步骤（操作步骤
14、（continuedcontinuedcontinuedcontinued）6 6 6 6、干燥、干燥、干燥、干燥自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。第10页/共27页7 7 7 7、镜检（、镜检（、镜检（、镜检（continuedcontinuedcontinuedcontinued）Notes:Notes:Notes:Notes:1)1)必须等涂片完全干后才可滴加香柏油必须等涂片完全干后才可滴加香柏油必须等涂片完全干后才可滴加香柏油必须等涂片完全干后才可滴加香
15、柏油2)2)油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，否则可能损害镜头否则可能损害镜头否则可能损害镜头否则可能损害镜头3 3 3 3）擦油镜镜头方法：分三步）擦油镜镜头方法：分三步）擦油镜镜头方法：分三步）擦油镜镜头方法：分三步 A A A A）先用擦镜纸揩去）先用擦镜纸揩去）先用擦镜纸揩去）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油镜头上的香柏油镜头上的香柏油镜头上的香柏油 B B B B）从双层瓶的下层沾少许二）从双层瓶的下层沾少许二）从双层瓶的下层沾少许二）从双层瓶的下层沾少许二甲苯滴在另一片擦镜纸上
16、甲苯滴在另一片擦镜纸上甲苯滴在另一片擦镜纸上甲苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头；，擦拭镜头；，擦拭镜头；，擦拭镜头；C C C C）再用）再用）再用）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。操作步骤（continued）第11页/共27页2 2、革兰氏染色、革兰氏染色、革兰氏染色、革兰氏染色 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排
17、列状况，但不能鉴别微生单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。物以及它的特殊构造等。物以及它的特殊构造等。物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：也称鉴别染色法。常用的有：也称鉴别染色法。常用的有：也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色
18、法、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。第12页/共27页革兰氏染色（Gram stain）1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（G-）革兰氏染色步骤:1）结晶紫初染；2）碘液媒染；3）酒精脱色；4）番红复染第13页/共27页 G G菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其
19、脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。实验原理实验原理第14页/共27页细菌的特殊形态结构细菌的特殊形态结构细菌的特殊形态结构细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体第15页/共27页实验材料实验材料实验材料实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
20、、枯草芽孢杆菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（2d2d2d2d）、）、）、）、胶质芽胞杆菌胶质芽胞杆菌胶质芽胞杆菌胶质芽胞杆菌 革兰氏染色液一套革兰氏染色液一套革兰氏染色液一套革兰氏染色液一套第16页/共27页实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤 革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢染色枯草杆菌的芽孢染色枯草杆菌的芽孢染色枯草杆菌的芽孢染色 荚膜的染色荚膜的染色荚膜的染色荚膜的染色 绘图、写实验报告绘图、写实验报告绘图、写实验报告绘图、写实验报告第17页/共27页革兰氏染色的革兰氏染色的步
21、骤步骤1.1.1.1.涂片涂片涂片涂片2.2.2.2.初染初染初染初染：在做好的涂面上滴加：在做好的涂面上滴加：在做好的涂面上滴加：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染草酸铵结晶紫染液，染草酸铵结晶紫染液，染草酸铵结晶紫染液，染1 1 1 1分钟，分钟，分钟，分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。倾去染液，流水冲洗至无紫色。倾去染液，流水冲洗至无紫色。倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.3.3.3.媒染媒染媒染媒染：先用新配的路哥氏碘：先用新配的路哥氏碘：先用新配的路哥氏碘：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂液冲去残水，而后用其覆盖涂液冲去残水，而后用其覆盖涂液冲去残水，而后用其覆盖涂面面
22、面面1 1 1 1分钟，后水洗。分钟，后水洗。分钟，后水洗。分钟，后水洗。4.4.4.4.脱色脱色脱色脱色：除去残水后，滴加：除去残水后，滴加：除去残水后，滴加：除去残水后，滴加95%95%95%95%酒精进行脱色约酒精进行脱色约酒精进行脱色约酒精进行脱色约1515151520202020秒，后秒，后秒，后秒，后立即用流水冲洗。立即用流水冲洗。立即用流水冲洗。立即用流水冲洗。5.5.5.5.复染复染复染复染：滴加番红染色液，染：滴加番红染色液，染：滴加番红染色液，染：滴加番红染色液，染3 3 3 3分钟，水洗后用吸水纸吸干。分钟，水洗后用吸水纸吸干。分钟，水洗后用吸水纸吸干。分钟，水洗后用吸水
23、纸吸干。6.6.6.6.镜检镜检镜检镜检：观察染色结果并绘图。：观察染色结果并绘图。：观察染色结果并绘图。：观察染色结果并绘图。第18页/共27页Figure 1-A Gram Figure 1-A Gram stain of Gram+stain of Gram+StaphylococcusStaphylococcus cells.cells.Figure 2-Gram Figure 2-Gram stain of Gram stain of Gram E.coliE.coli cells cells第19页/共27页3 枯草杆菌芽孢的染色1 1 1 1、制备菌液：加、制备菌液：加、制备菌液
24、：加、制备菌液：加2-42-42-42-4滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取菌体菌体菌体菌体4 4 4 4环于试管中充分混匀。环于试管中充分混匀。环于试管中充分混匀。环于试管中充分混匀。2 2 2 2、加染色液：加孔雀绿、加染色液：加孔雀绿、加染色液：加孔雀绿、加染色液：加孔雀绿3 3 3 3滴于滴于滴于滴于1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 离心管中。离心管中。离心管中。离心管中。3 3 3 3、加热：沸水浴，、加热：沸水浴，、加热：沸水浴，、加热：沸水浴，15-
25、2015-2015-2015-20分钟。分钟。分钟。分钟。4 4 4 4、涂片：用接种环从、涂片：用接种环从、涂片：用接种环从、涂片：用接种环从离心管离心管中取一环菌涂于一干净载玻片上，中取一环菌涂于一干净载玻片上，中取一环菌涂于一干净载玻片上，中取一环菌涂于一干净载玻片上，制成涂片。制成涂片。制成涂片。制成涂片。5 5 5 5、干燥、火焰固定、干燥、火焰固定、干燥、火焰固定、干燥、火焰固定6 6 6 6、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。7 7 7 7、复染：加复红染色、复染：
26、加复红染色、复染：加复红染色、复染：加复红染色1-21-21-21-2分钟。水洗，吸水纸吸干。分钟。水洗，吸水纸吸干。分钟。水洗，吸水纸吸干。分钟。水洗，吸水纸吸干。、镜检：、镜检：、镜检：、镜检：10 x 10 x 10 x 10 x，40 x 40 x 40 x 40 x、100X100X100X100X（油镜）观察。（油镜）观察。（油镜）观察。（油镜）观察。第20页/共27页4细菌荚膜的染色荚膜荚膜负染色法：负染色法：负染色法：负染色法：1 1 1 1、制片：取洁净的载玻、制片：取洁净的载玻、制片：取洁净的载玻、制片：取洁净的载玻片一块，加一滴黑墨水，片一块，加一滴黑墨水，片一块，加一滴
27、黑墨水，片一块，加一滴黑墨水，取少量的菌体放入墨水滴取少量的菌体放入墨水滴取少量的菌体放入墨水滴取少量的菌体放入墨水滴中混匀并涂片。中混匀并涂片。中混匀并涂片。中混匀并涂片。2 2 2 2、刮片：另取一载玻片，、刮片：另取一载玻片，、刮片：另取一载玻片，、刮片：另取一载玻片，以三十度角将其边缘浸入以三十度角将其边缘浸入以三十度角将其边缘浸入以三十度角将其边缘浸入黑素中向右端拖动，将黑黑素中向右端拖动，将黑黑素中向右端拖动，将黑黑素中向右端拖动，将黑素涂成一薄层。素涂成一薄层。素涂成一薄层。素涂成一薄层。3 3 3 3、镜检：、镜检：、镜检：、镜检：10 x 10 x 10 x 10 x，40
28、x 40 x 40 x 40 x 物物物物镜观察（注意物镜不要接镜观察（注意物镜不要接镜观察（注意物镜不要接镜观察（注意物镜不要接触黑素，触黑素，触黑素，触黑素，不要用油镜不要用油镜不要用油镜不要用油镜观察）观察）观察）观察）第21页/共27页本实验安排本实验安排简单染色：枯草芽孢（简单染色：枯草芽孢（1d1d）。）。革革兰兰氏氏染染色色：大大肠肠杆杆菌菌、金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌、本本人斜面菌株。人斜面菌株。荚膜染色：胶质芽孢杆菌。荚膜染色：胶质芽孢杆菌。芽孢染色：枯草芽孢（芽孢染色：枯草芽孢（2d2d）另另 外外，每每 大大 组组 选选 两两 人人 从从 斜斜 面面 挑挑 取取 枯枯
29、草草 芽芽 孢孢（2d2d）于离心管，水浴锅中煮沸。）于离心管，水浴锅中煮沸。每人每人第22页/共27页思考题思考题简单染色简单染色:(1)(1)你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节?(2)(2)如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？过高、时间太长，又会怎样呢？革兰氏染色革兰氏染色:(1)(1)你你认认为为哪哪些些环环节节会会影影响响革革兰兰氏氏染染色色结结果果的的正正确确性性?其其中中最最关关键键的的环节是什么环节是什么?(2)(2)现现有
30、有一一株株细细菌菌宽宽度度明明显显大大于于大大肠肠杆杆茵茵的的粗粗壮壮杆杆菌菌，请请你你鉴鉴定定其其革革兰兰氏氏染染色色反反应应。你你怎怎样样运运用用大大扬扬杆杆菌菌和和金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌为为对对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。(3)(3)进进行行革革兰兰氏氏染染色色时时，为为什什么么特特别别强强调调菌菌龄龄不不能能太太老老，用用老老龄龄细细菌染色会出现什么问题？菌染色会出现什么问题？第23页/共27页思考题思考题荚膜染色法:(1)通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？芽孢染色法:(1)说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?第24页/共27页思考题思考题芽孢染色法(1)说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?(2)若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？第25页/共27页本次实验课结束本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！下次实验再见！下次实验再见！第26页/共27页感谢您的观看！第27页/共27页