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1、大豆蛋白的提取及大豆蛋白的提取及与含量测定与含量测定在此处键入欢迎信息，长短均可。最好包括本站点的内容简介。一、一、目的要求目的要求 1.1.学学习习掌掌握握离离心心机机、752N752N、天天平平的的使使用方法和注意事项；用方法和注意事项；2.2.学学习习掌掌握握大大豆豆蛋蛋白白的的提提取取及及制制备备丙丙酮干粉的原理和方法；酮干粉的原理和方法；3 3.学学习习计计算算蛋蛋白白质质收收率率,测测定定蛋蛋白白质质含量含量二、实验原理（一）1.1.1.1.大大大大豆豆豆豆蛋蛋蛋蛋白白白白的的的的等等等等电电电电点点点点为为为为4.5-5.04.5-5.04.5-5.04.5-5.0是是是是酸酸酸
2、酸性性性性蛋蛋蛋蛋白白白白，尽尽尽尽管管管管大大大大豆豆豆豆中中中中含含含含有有有有水水水水溶溶溶溶蛋蛋蛋蛋白白白白、盐盐盐盐溶溶溶溶蛋蛋蛋蛋白白白白、碱碱碱碱溶溶溶溶蛋蛋蛋蛋白白白白和和和和醇醇醇醇溶溶溶溶蛋蛋蛋蛋白白白白，但但但但其其其其主主主主要要要要成成成成分分分分为为为为碱碱碱碱溶溶溶溶蛋蛋蛋蛋白白白白，本本本本实实实实验验验验为为为为节节节节省省省省丙丙丙丙酮酮酮酮用用用用量量量量只只只只进行碱提；进行碱提；进行碱提；进行碱提；2.2.2.2.丙丙丙丙酮酮酮酮（有有有有机机机机溶溶溶溶剂剂剂剂）可可可可降降降降低低低低溶溶溶溶液液液液的的的的介介介介电电电电常常常常数数数数、破破破
3、破坏坏坏坏蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的水水水水化化化化膜膜膜膜，故故故故可可可可使使使使蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质在在在在一一一一定定定定条条条条件件件件下下下下沉沉沉沉淀淀淀淀析析析析出出出出；调调调调节节节节蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质溶溶溶溶液液液液的的的的pHpHpHpH值值值值到到到到等等等等电电电电点点点点附附附附近近近近，有有有有利利利利于于于于蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的沉淀。的沉淀。的沉淀。的沉淀。三、试剂、材料及仪器三、试剂、材料及仪器 1.1.0.2%0.2%0.2%0.2%的的的的NaOHNaOHNaOHNaOH；2.2.2.2.6mol/L6mol/L6mol/L6mol
4、/L的的的的HClHClHClHCl；3.1mol/L3.1mol/L3.1mol/L3.1mol/L的的的的HClHClHClHCl 4.4.4.4.化学纯级丙酮化学纯级丙酮化学纯级丙酮化学纯级丙酮 5.5.5.5.市售大豆粉市售大豆粉市售大豆粉市售大豆粉 6.6.6.6.精密精密精密精密pH pH pH pH 试纸试纸试纸试纸 7.7.天平天平天平天平 8.8.8.8.离心机（普通）离心机（普通）离心机（普通）离心机（普通）9.9.9.9.离心内、外套管离心内、外套管离心内、外套管离心内、外套管 10.10.10.10.烧杯烧杯烧杯烧杯 11.11.11.11.搅拌棒搅拌棒搅拌棒搅拌棒四、
5、实验步骤提提提提取取取取：.称称称称取取取取3 3 3 3克克克克大大大大豆豆豆豆粉粉粉粉，用用用用0.2%0.2%0.2%0.2%NaOHNaOHNaOHNaOH 30303030毫毫毫毫升升升升。（先先先先加加加加入入入入调调调调成成成成糊糊糊糊状状状状，再再再再用用用用少少少少量量量量多多多多次次次次地地地地慢慢慢慢慢慢慢慢地地地地加加加加入入入入（边边边边加加加加边边边边搅搅搅搅拌拌拌拌）NaOHNaOHNaOHNaOH溶溶溶溶液液液液），室室室室温温温温下下下下搅搅搅搅拌拌拌拌抽抽抽抽提提提提15151515minminminmin，于于于于6000r/min6000r/min600
6、0r/min6000r/min离离离离心心心心7min 7min 7min 7min,小小小小心心心心留留留留取取取取上上上上清清清清液液液液，弃弃弃弃脂脂脂脂层层层层和和和和沉沉沉沉淀淀淀淀，如如如如上上上上清清清清液液液液有有有有漂漂漂漂浮浮浮浮物物物物，再经过滤；再经过滤；再经过滤；再经过滤；留出上清液留出上清液留出上清液留出上清液2 2 2 2毫升稀释毫升稀释毫升稀释毫升稀释50505050、100100100100倍做含量测定倍做含量测定倍做含量测定倍做含量测定三、实验步骤制制制制干干干干粉粉粉粉：量量量量上上上上清清清清液液液液的的的的体体体体积积积积，加加加加入入入入等等等等体体
7、体体积积积积在在在在冰冰冰冰箱箱箱箱中中中中预预预预冷冷冷冷的的的的丙丙丙丙酮酮酮酮，先先先先用用用用6 6 6 6mol/Lmol/Lmol/Lmol/L的的的的HClHClHClHCl调调调调pHpHpHpH至至至至6.06.06.06.0，再再再再用用用用1 1 1 1mol/Lmol/Lmol/Lmol/L的的的的HClHClHClHCl小小小小心心心心调调调调pHpHpHpH至至至至4.5-5.04.5-5.04.5-5.04.5-5.0，于于于于4000400040004000r/minr/minr/minr/min离离离离心心心心15151515minminminmin，(留留留
8、留取取取取沉沉沉沉淀淀淀淀物物物物)，并并并并用用用用少少少少量量量量丙丙丙丙酮酮酮酮反反反反复复复复(至至至至少少少少两两两两次次次次)搅搅搅搅拌拌拌拌洗洗洗洗涤涤涤涤（在在在在离离离离心心心心管管管管中中中中进进进进行行行行），加加加加入入入入丙丙丙丙酮酮酮酮后后后后一一一一定定定定将将将将沉沉沉沉淀淀淀淀搅搅搅搅拌拌拌拌充充充充分分分分，加加加加入入入入丙丙丙丙酮酮酮酮目目目目的的的的使使使使沉沉沉沉淀淀淀淀脱脱脱脱水水水水。得得得得到到到到白白白白色色色色粉粉粉粉末末末末状状状状的的的的大大大大豆豆豆豆蛋蛋蛋蛋白白白白粉粉粉粉（上上上上清清清清液液液液回回回回收收收收），用用用用干干干
9、干净净净净的的的的滤滤滤滤纸纸纸纸吸吸吸吸干干干干、平平平平铺铺铺铺在在在在表表表表面面面面皿皿皿皿上上上上，放放放放入入入入40404040度度度度烘烘烘烘箱箱箱箱干干干干燥燥燥燥，待待待待整整整整个个个个实实实实验验验验结结结结束束束束后，再称重并计算产率。后，再称重并计算产率。后，再称重并计算产率。后，再称重并计算产率。Folin酚法测定蛋白质含量l l目的要求目的要求l l掌握掌握掌握掌握FolinFolinFolinFolin酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理l l蛋蛋蛋蛋白
10、白白白质质质质浓浓浓浓度度度度可可可可以以以以从从从从它它它它们们们们的的的的物物物物理理理理化化化化学学学学性性性性质质质质，如如如如比比比比重重重重、紫紫紫紫外外外外吸吸吸吸收收收收，折折折折射射射射率率率率等等等等测测测测定定定定而而而而得得得得知知知知；或或或或用用用用化化化化学学学学方方方方法法法法，如如如如定定定定氮氮氮氮、双双双双缩缩缩缩脲脲脲脲反反反反应应应应，FolinFolinFolinFolin酚酚酚酚试试试试剂剂剂剂反反反反应应应应等等等等方方方方法法法法来来来来计计计计算算算算。其其其其中中中中双双双双缩缩缩缩脲脲脲脲法法法法和和和和FolinFolinFolinFo
11、lin酚酚酚酚法法法法是是是是一一一一般般般般实实实实验验验验室室室室中中中中常常常常用用用用的的的的方方方方法法法法，它它它它们们们们操操操操作作作作简简简简便便便便，迅迅迅迅速速速速，不不不不需需需需要要要要复复复复杂杂杂杂而而而而昂昂昂昂贵贵贵贵的的的的仪仪仪仪器器器器。FolinFolinFolinFolin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏100100100100倍。倍。倍。倍。l lFolinFolinFolinFolin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双
12、酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。l l由由由
13、由于于于于蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质中中中中含含含含有有有有带带带带酚酚酚酚基基基基的的的的酪酪酪酪氨氨氨氨酸酸酸酸还还还还原原原原呈呈呈呈兰兰兰兰色色色色，溶溶溶溶液液液液兰兰兰兰色色色色的的的的深深深深浅浅浅浅与与与与蛋蛋蛋蛋白白白白浓浓浓浓度度度度有有有有较较较较好好好好的的的的线线线线性性性性关关关关系系系系。因因因因此此此此用用用用FolinFolinFolinFolin酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。l l样样样样品品品品中中中中含含含含酚酚酚酚类类类类化化化化合合合合物物物物及及及及柠柠
14、柠柠檬檬檬檬酸酸酸酸均均均均有有有有干干干干扰扰扰扰作作作作用用用用，如如如如果果果果样样样样品品品品酸酸酸酸度度度度较较较较高高高高则则则则显显显显色色色色较较较较浅浅浅浅，要要要要提提提提高高高高碳碳碳碳酸酸酸酸钠钠钠钠一一一一氢氢氢氢氧氧氧氧化化化化钠钠钠钠的的的的浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸的色氨酸的浓度。浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸的色氨酸的浓度。浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸的色氨酸的浓度。浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸的色氨酸的浓度。l lFolinFolinFolinFolin酚酚酚酚法法法法有有有有不不不不少少少少具具具具有有有有操操操操作作作作方方方方法法法法，但但但但
15、基基基基本本本本原原原原理理理理都都都都是是是是一一一一个个个个，只只只只是是是是在在在在各各各各溶溶溶溶液液液液的的的的浓浓浓浓度度度度及及及及填填填填加加加加量量量量上上上上，保保保保温温温温的的的的温温温温度度度度及及及及保保保保温温温温时时时时间间间间上上上上有有有有所所所所不不不不同同同同而而而而已已已已，本本本本实实实实验验验验所所所所介介介介绍绍绍绍的的的的是是是是本本本本室室室室常常常常用用用用的的的的，灵敏度较高的操作方法。灵敏度较高的操作方法。灵敏度较高的操作方法。灵敏度较高的操作方法。试剂和器材1 1、材料：、材料：l l本本本本实实实实验验验验所所所所提提提提取取取取大
16、大大大豆豆豆豆蛋蛋蛋蛋白白白白水水水水提提提提取取取取液液液液，经经经经合合合合适适适适稀稀稀稀释释释释至至至至可测定范围。可测定范围。可测定范围。可测定范围。2 2、试剂、试剂、试剂、试剂：l（1 1 1 1）0.030.030.030.03mol/L PH7.8mol/L PH7.8mol/L PH7.8mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。的磷酸缓冲液。的磷酸缓冲液。的磷酸缓冲液。l l（2 2 2 2）200200200200g/mlg/mlg/mlg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。的标准酪（牛血清）蛋白溶液。的标准酪（牛血清）蛋白溶液。的标准酪（牛血清）蛋白溶液。l l（3 3 3
17、3）FolinFolinFolinFolin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10101010g g g gl lNaoHNaoHNaoHNaoH溶于溶于溶于溶于400400400400mlmlmlml水中，再加水中，再加水中，再加水中，再加50505050gNa2CO3gNa2CO3gNa2CO3gNa2CO3；l l称称称称 取取取取 0.50.50.50.5g g g g酒酒酒酒 石石石石 酸酸酸酸 钾钾钾钾 钠钠钠钠 溶溶溶溶 于于于于 80808080mlH2OmlH2OmlH2OmlH2O中中中中，再再再
18、再 加加加加0.250.250.250.25gCuSO4gCuSO4gCuSO4gCuSO4；以以以以上上上上两两两两溶溶溶溶液液液液混混混混合合合合定定定定容容容容到到到到500500500500mlmlmlml，冰冰冰冰箱保存可用一个月。箱保存可用一个月。箱保存可用一个月。箱保存可用一个月。l(4)、FolinFolinFolinFolin试试试试剂剂剂剂乙乙乙乙：在在在在2 2 2 2升升升升磨磨磨磨口口口口回回回回流流流流装装装装置置置置的的的的烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶内内内内，加加加加钨钨钨钨酸酸酸酸钠钠钠钠（NaWO42H2ONaWO42H2ONaWO42H2ONaWO42H2O）100g
19、100g100g100g，钼钼钼钼 酸酸酸酸 钠钠钠钠（NaMoO2M2ONaMoO2M2ONaMoO2M2ONaMoO2M2O）25g25g25g25g，蒸蒸蒸蒸 馏馏馏馏 水水水水700700700700mlmlmlml，85%85%85%85%的的的的磷磷磷磷酸酸酸酸50505050mlmlmlml，浓浓浓浓盐盐盐盐酸酸酸酸100100100100mlmlmlml，充充充充分分分分混混混混合合合合后后后后，小小小小火火火火回回回回流流流流10101010小小小小时时时时，再再再再加加加加硫硫硫硫酸酸酸酸锂锂锂锂（Li2SO4Li2SO4Li2SO4Li2SO4）150g150g150g1
20、50g，蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水50505050mlmlmlml及及及及数数数数滴滴滴滴溴溴溴溴。然然然然后后后后开开开开口口口口沸沸沸沸腾腾腾腾15151515minminminmin，以以以以驱驱驱驱除除除除过过过过量量量量的的的的溴溴溴溴，冷冷冷冷却却却却后后后后定定定定容容容容到到到到1000100010001000mlmlmlml，过过过过滤滤滤滤后后后后呈金黄色，于棕色并中保存，可使用多年。呈金黄色，于棕色并中保存，可使用多年。呈金黄色，于棕色并中保存，可使用多年。呈金黄色，于棕色并中保存，可使用多年。l l上上上上述述述述制制制制备备备备的的的的FolinFolinFolinFo
21、lin试试试试剂剂剂剂乙乙乙乙的的的的贮贮贮贮备备备备液液液液浓浓浓浓度度度度一一一一般般般般在在在在2 2 2 2mol/Lmol/Lmol/Lmol/L左左左左右右右右，几几几几种种种种操操操操作作作作方方方方案案案案都都都都是是是是把把把把FolinFolinFolinFolin试试试试剂剂剂剂乙乙乙乙稀稀稀稀释释释释至至至至1 1 1 1mol/Lmol/Lmol/Lmol/L的的的的酸酸酸酸度度度度作作作作为为为为应应应应用用用用液液液液，我我我我们们们们是是是是把把把把贮贮贮贮备备备备液液液液于于于于作作作作用用用用前前前前稀稀稀稀释释释释18181818倍倍倍倍，使使使使之之之之
22、浓浓浓浓度度度度为为为为0.10.10.10.1mol/Lmol/Lmol/Lmol/L略略略略高高高高。这这这这种种种种稀稀稀稀释释释释18181818倍倍倍倍后后后后的的的的FolinFolinFolinFolin试试试试剂剂剂剂乙乙乙乙就就就就是是是是下下下下文文文文称称称称之之之之为为为为应应应应用用用用液液液液，FolinFolinFolinFolin试试试试剂剂剂剂乙乙乙乙贮贮贮贮备备备备液液液液浓浓浓浓度度度度的的的的标标标标定定定定，一一一一般般般般是是是是以以以以酚酚酚酚酞酞酞酞为为为为指指指指示示示示剂剂剂剂，用用用用FolinFolinFolinFolin试试试试剂剂剂剂
23、乙乙乙乙去去去去滴滴滴滴定定定定1 1 1 1mol/Lmol/Lmol/Lmol/L左左左左右右右右的的的的标标标标准准准准NaOHNaOHNaOHNaOH溶溶溶溶液液液液，当当当当溶溶溶溶液液液液颜颜颜颜色色色色由由由由红红红红变变变变为为为为紫紫紫紫灰灰灰灰色色色色，再再再再突突突突然然然然变变变变成成成成黑黑黑黑绿绿绿绿既既既既为为为为终终终终点点点点。如如如如果果果果用用用用NaOHNaOHNaOHNaOH去去去去滴滴滴滴定定定定FolinFolinFolinFolin乙乙乙乙，终终终终点点点点不不不不太太太太好好好好掌握，溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。掌握，溶
24、液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。掌握，溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。掌握，溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。3、器材：l l试管试管试管试管10101010支支支支l l试管架一个试管架一个试管架一个试管架一个l l移液管：（移液管：（移液管：（移液管：（5 5 5 5mlmlmlml、1ml1ml1ml1ml）l l移液管架移液管架移液管架移液管架l l洗瓶洗瓶洗瓶洗瓶l l恒温水浴恒温水浴恒温水浴恒温水浴l l7 7 7 752N52N52N52N型分光光度计型分光光度计型分光光度计型分光光度计 操作方法l l标准曲线的制作：标准曲
25、线的制作：标准曲线的制作：标准曲线的制作：l l标准酪蛋白溶液：用标准酪蛋白溶液：用标准酪蛋白溶液：用标准酪蛋白溶液：用0.030.030.030.03mol/Lmol/Lmol/Lmol/L的磷酸缓冲液溶解的酪蛋白，浓度为的磷酸缓冲液溶解的酪蛋白，浓度为的磷酸缓冲液溶解的酪蛋白，浓度为的磷酸缓冲液溶解的酪蛋白，浓度为200200200200g/mlg/mlg/mlg/ml。用一支用一支用一支用一支0.50.50.50.5mlmlmlml移液管分别取上述标准酪蛋溶液移液管分别取上述标准酪蛋溶液移液管分别取上述标准酪蛋溶液移液管分别取上述标准酪蛋溶液0 0 0 0ml,0.1mlml,0.1ml
26、ml,0.1mlml,0.1ml，0.2ml0.2ml0.2ml0.2ml，0.4ml0.4ml0.4ml0.4ml，0.6ml0.6ml0.6ml0.6ml，0.8ml0.8ml0.8ml0.8ml，1.0ml1.0ml1.0ml1.0ml各加到一支试管中去，将此吸管用各加到一支试管中去，将此吸管用各加到一支试管中去，将此吸管用各加到一支试管中去，将此吸管用0.030.030.030.03mol/LPH7.8mol/LPH7.8mol/LPH7.8mol/LPH7.8的磷酸缓冲液，反复洗净，再用同一支移液管（防止未经标的磷酸缓冲液，反复洗净，再用同一支移液管（防止未经标的磷酸缓冲液，反复洗净
27、，再用同一支移液管（防止未经标的磷酸缓冲液，反复洗净，再用同一支移液管（防止未经标定吸量管的相对误差的影响）取上述缓冲液将每支试管中的溶液补加至定吸量管的相对误差的影响）取上述缓冲液将每支试管中的溶液补加至定吸量管的相对误差的影响）取上述缓冲液将每支试管中的溶液补加至定吸量管的相对误差的影响）取上述缓冲液将每支试管中的溶液补加至1 1 1 1mlmlmlml。再在另一支试管中加入再在另一支试管中加入再在另一支试管中加入再在另一支试管中加入1 1 1 1mlmlmlml缓冲液作空白对照。于上述试管中各加入缓冲液作空白对照。于上述试管中各加入缓冲液作空白对照。于上述试管中各加入缓冲液作空白对照。于
28、上述试管中各加入1 1 1 1mlFolinmlFolinmlFolinmlFolin试剂甲并不时地进行振荡，试剂甲并不时地进行振荡，试剂甲并不时地进行振荡，试剂甲并不时地进行振荡，10101010minminminmin后再加入后后再加入后后再加入后后再加入后1 1 1 1inininin试剂乙的应用液试剂乙的应用液试剂乙的应用液试剂乙的应用液4 4 4 4毫升。立既摇匀放入毫升。立既摇匀放入毫升。立既摇匀放入毫升。立既摇匀放入55555555水溶中保湿水溶中保湿水溶中保湿水溶中保湿5 5 5 5minminminmin。取出后用自来水冷却取出后用自来水冷却取出后用自来水冷却取出后用自来水冷
29、却1 1 1 1minminminmin。于波于波于波于波长长长长650650650650nmnmnmnm进行比色测定各管的进行比色测定各管的进行比色测定各管的进行比色测定各管的ODODODOD值，以蛋白质的浓度为横坐标，值，以蛋白质的浓度为横坐标，值，以蛋白质的浓度为横坐标，值，以蛋白质的浓度为横坐标，ODODODOD值为纵坐值为纵坐值为纵坐值为纵坐标，既可得到标准曲线。标，既可得到标准曲线。标，既可得到标准曲线。标，既可得到标准曲线。Folin-Folin-Folin-Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：酚法测定
30、蛋白质含量工作曲线的制作：取取取取7 7 7 7支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定定定定 试管号试管号1234567蛋白质标准液（蛋白质标准液（ml）（mg)0 00.10.020.20.040.40.080.60.120.80.161.00.2PH7.8的的buffer（ml）10.90.80.60.40.20Folin-甲试剂甲试剂 （ml）1111111于室温下不停地振荡于室温下不停地振荡10min
31、 Folin-乙应用液（乙应用液（ml）4444444立即摇匀，在立即摇匀，在55恒温水浴中保温恒温水浴中保温5min，用流水冷却用流水冷却1min后，测后，测A650A A650650值值 2 2 2 2、样品测定：取两支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品、样品测定：取两支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品、样品测定：取两支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品、样品测定：取两支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液液液液1 1 1 1mlmlmlml（不加不加不加不加bufferbufferbufferbuffer），），），），其他操作同工作曲线（可取两支试管编其他操作同工作曲线（可取两支试管
32、编其他操作同工作曲线（可取两支试管编其他操作同工作曲线（可取两支试管编号号号号8 8 8 8、9 9 9 9，与工作曲线同时进行反应和比色测定）；，与工作曲线同时进行反应和比色测定）；，与工作曲线同时进行反应和比色测定）；，与工作曲线同时进行反应和比色测定）；试管号试管号89蛋白质稀释液（蛋白质稀释液（ml）（mg)1 1PH7.8的的buffer（ml）0 0Folin-甲试剂甲试剂 （ml）1 1于室温下不停地振荡于室温下不停地振荡10min Folin-乙应用液（乙应用液（ml）4 4立即摇匀，在立即摇匀，在55恒温水浴中保温恒温水浴中保温5min，用流水冷却用流水冷却1min后，测后，
33、测A650A650值值l l蛋白质浓度的计算：蛋白质浓度的计算：蛋白质浓度的计算：蛋白质浓度的计算：l l A650A650A650A650值对应的值对应的值对应的值对应的mgmgmgmg数数数数(Pr)Pr)Pr)Pr)Pr(mg/ml)=Pr(mg/ml)=Pr(mg/ml)=Pr(mg/ml)=稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数l l PrPrPrPr溶液的溶液的溶液的溶液的mlmlmlml数数数数 l l思考题思考题l l1 1 1 1、采用、采用、采用、采用FolinFolinFolinFolin的酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物的酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物的
34、酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物的酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物质对测定结果有干扰？质对测定结果有干扰？质对测定结果有干扰？质对测定结果有干扰？l l2 2 2 2、作为标准蛋白的酪蛋白在应用时有何要求。、作为标准蛋白的酪蛋白在应用时有何要求。、作为标准蛋白的酪蛋白在应用时有何要求。、作为标准蛋白的酪蛋白在应用时有何要求。五、注意事项五、注意事项l l（一）（一）（一）（一）使用离心机的方法及注意事项：使用离心机的方法及注意事项：使用离心机的方法及注意事项：使用离心机的方法及注意事项：l l 离离离离心心心心机机机机的的的的工工工工作作作作原原原原理理理理是是是是：在在在
35、在离离离离心心心心力力力力场场场场的的的的作作作作用用用用下下下下，可可可可加加加加速速速速悬悬悬悬浮浮浮浮液液液液中中中中固固固固体体体体颗颗颗颗粒粒粒粒沉沉沉沉降降降降或或或或漂漂漂漂浮浮浮浮的的的的速速速速度度度度，从从从从而而而而将将将将不不不不同同同同的的的的物物物物质质质质分分分分离离离离；离离离离心心心心机机机机是是是是生生生生化化化化实实实实验验验验中中中中经经经经常常常常用用用用于于于于提提提提取取取取、分分分分离离离离、纯纯纯纯化化化化的的的的常常常常用用用用设设设设备备备备，其其其其操操操操作作作作中中中中的的的的关关关关键键键键环环环环节节节节是是是是平平平平衡衡衡衡，
36、具具具具体体体体的的的的使使使使用用用用方方方方法法法法及及及及注注注注意意意意事事事事项项项项如如如如下下下下（由由由由在在在在各各各各室室室室上上上上课课课课的的的的教教教教师师师师结结结结合合合合本本本本室室室室离离离离心心心心机机机机进行现场指导）进行现场指导）进行现场指导）进行现场指导）：l 五、注意事项（离心机使用注意）五、注意事项（离心机使用注意）1 1.检查离心内、外套管应完整不漏，洗净离心管；检查离心内、外套管应完整不漏，洗净离心管；检查离心内、外套管应完整不漏，洗净离心管；检查离心内、外套管应完整不漏，洗净离心管；2.2.2.2.待离心的物质装入离心管的量不应超过离心内套管
37、体积的待离心的物质装入离心管的量不应超过离心内套管体积的待离心的物质装入离心管的量不应超过离心内套管体积的待离心的物质装入离心管的量不应超过离心内套管体积的2/32/32/32/3；3.3.3.3.将将将将一一一一对对对对离离离离心心心心管管管管（含含含含内内内内、外外外外套套套套管管管管）放放放放在在在在台台台台秤秤秤秤上上上上平平平平衡衡衡衡，可可可可调调调调节节节节离离离离心心心心管管管管内内内内容容容容物物物物的量，也可在内、外管间加水缓冲平衡；的量，也可在内、外管间加水缓冲平衡；的量，也可在内、外管间加水缓冲平衡；的量，也可在内、外管间加水缓冲平衡；4.4.4.4.检检检检查查查查离
38、离离离心心心心机机机机可可可可正正正正常常常常工工工工作作作作后后后后，将将将将一一一一对对对对平平平平衡衡衡衡好好好好的的的的离离离离心心心心管管管管按按按按对对对对称称称称的的的的位位位位置置置置放放放放在在在在离离离离心机中；心机中；心机中；心机中；5.5.5.5.盖盖盖盖好好好好离离离离心心心心机机机机盖盖盖盖，打打打打开开开开电电电电源源源源开开开开关关关关，慢慢慢慢慢慢慢慢拨拨拨拨动动动动变变变变速速速速旋旋旋旋钮钮钮钮（从从从从0 0 0 0开开开开始始始始），使使使使速速速速度度度度逐逐逐逐渐渐渐渐增增增增加加加加，记记记记时时时时，离离离离心心心心结结结结束束束束后后后后，一
39、一一一定定定定先先先先将将将将变变变变速速速速旋旋旋旋钮钮钮钮慢慢慢慢慢慢慢慢拨拨拨拨到到到到0 0 0 0位位位位，再再再再关关关关电电电电源源源源；待待待待离离离离心心心心机机机机停停停停止止止止运运运运转转转转后后后后，再再再再打打打打开开开开离离离离心心心心机机机机盖盖盖盖，取取取取出出出出离离离离心心心心管管管管，不不不不许许许许用用用用手手手手强强强强行行行行使使使使离离离离心机停止转动！心机停止转动！心机停止转动！心机停止转动！6 6 6 6用用用用完完完完后后后后，将将将将内内内内外外外外套套套套管管管管洗洗洗洗净净净净，倒倒倒倒立立立立放放放放置置置置，使使使使其其其其干干干
40、干燥燥燥燥，并并并并在在在在使使使使用用用用的的的的登登登登记记记记薄薄薄薄签签签签名。名。名。名。7.7.7.7.使用过程中，如出现故障，一定请本室的实验员排除，不许擅自处理。使用过程中，如出现故障，一定请本室的实验员排除，不许擅自处理。使用过程中，如出现故障，一定请本室的实验员排除，不许擅自处理。使用过程中，如出现故障，一定请本室的实验员排除，不许擅自处理。制丙酮干粉时的注意事项制丙酮干粉时的注意事项加入丙酮及加酸调加入丙酮及加酸调加入丙酮及加酸调加入丙酮及加酸调pHpHpHpH时，都要边时，都要边时，都要边时，都要边 加边搅加边搅加边搅加边搅丙酮一定要远离明火丙酮一定要远离明火调调调调pHpHpHpH时，不许调过头时，不许调过头时，不许调过头时，不许调过头.制丙酮干粉，要少量多次加入丙酮后，将沉淀充分搅起。制丙酮干粉，要少量多次加入丙酮后，将沉淀充分搅起。制丙酮干粉，要少量多次加入丙酮后，将沉淀充分搅起。制丙酮干粉，要少量多次加入丙酮后，将沉淀充分搅起。