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1、二培养基二培养基学以致用学以致用养细菌养细菌养细菌养细菌 水水、碳碳源源、氮氮源源、无无机机盐盐及及生生长长因因子子等等细细菌菌及及其其它它微微生生物物营营养养物物质质的的合合理理配制物配制物1.认识认识化能自养菌化能自养菌氧化硫杆菌氧化硫杆菌氧化硫杆菌氧化硫杆菌的培养基粉末状硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g (NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自来水即可自来水即可）提问：提问：其中各组分作用是什么？其中各组分作用是什么？其中各组分作用是什么？其中各组分作用是什么？空气中的空气中的CO2能源能源磷源、缓冲物磷源、缓冲
2、物碳源是什么？碳源是什么？碳源是什么？碳源是什么？氮源氮源盐盐也可补加一部分碳酸钠。也可补加一部分碳酸钠。也可补加一部分碳酸钠。也可补加一部分碳酸钠。异养细菌异养细菌的培养基中至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖 如一种大肠杆菌培养基葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL2.配制配制 通常通常？加水加水3分类分类提问：提问：提问：提问：根据哪些特性可以给培养基分类？根据哪些特性可以给培养基分类？根据哪些特性可以给培养基分类？根据哪些特性可以给培养基分类？物理状态、用途、组分组成物理状态、用途、组分组成物理状态、
3、用途、组分组成物理状态、用途、组分组成(一一一一)根据物理状态根据物理状态根据物理状态根据物理状态 固体培养基、半固体培养基和液体培养基1 1）液体培养基（）液体培养基（）液体培养基（）液体培养基（“汤汤汤汤”）废水也可看作是一种广义的液体培养基废水也可看作是一种广义的液体培养基废水也可看作是一种广义的液体培养基废水也可看作是一种广义的液体培养基2 2）固体培养基（）固体培养基（）固体培养基（）固体培养基（“团团团团”）人人工工做做法法(与与与与果果果果冻冻冻冻方方方方法法法法一样一样一样一样)向向向向液液液液体体体体培培培培养养养养基基基基中中中中加加加加入入入入2 2左左左左右右右右的的的
4、的琼琼琼琼脂脂脂脂，加加加加热热热热至至至至100100溶溶溶溶解，解，解，解，4040下冷却下冷却下冷却下冷却并凝固并凝固并凝固并凝固。石花菜石花菜石花菜石花菜(红藻）红藻）红藻）红藻）琼脂琼脂琼脂琼脂琼脂主要琼脂主要琼脂主要琼脂主要成份成份半乳聚糖半乳聚糖半乳聚糖半乳聚糖，分子量大，呈网状粘着力强分子量大，呈网状粘着力强分子量大，呈网状粘着力强分子量大，呈网状粘着力强，溶，溶，溶，溶解分散解分散解分散解分散（温度为（温度为（温度为（温度为9696以上）以上）以上）以上）条状琼脂条状琼脂粉末琼脂粉末琼脂琼脂特性琼脂特性 A.A.不能被绝大多数微生物不能被绝大多数微生物不能被绝大多数微生物不能
5、被绝大多数微生物利用、分解液化利用、分解液化利用、分解液化利用、分解液化；提问：提问：提问：提问：有什么好处？有什么好处？有什么好处？有什么好处？不作为额外碳源，干不作为额外碳源，干扰试验，扰试验，保持固体特保持固体特保持固体特保持固体特性性性性 B.B.高压灭菌结构不被破坏高压灭菌结构不被破坏高压灭菌结构不被破坏高压灭菌结构不被破坏，且颜色透明颜色透明颜色透明颜色透明不妨碍观察不妨碍观察不妨碍观察不妨碍观察；C.C.多数微生物在琼脂培养基多数微生物在琼脂培养基多数微生物在琼脂培养基多数微生物在琼脂培养基表面表面表面表面生长并形成独立菌落生长并形成独立菌落生长并形成独立菌落生长并形成独立菌落；
6、提问：提问：提问：提问：有何好处？有何好处？有何好处？有何好处？易于纯化分离易于纯化分离3 3）半固体培养基（）半固体培养基（）半固体培养基（）半固体培养基（“膏膏膏膏”）半半半半流动性介于固体与液体之间流动性介于固体与液体之间流动性介于固体与液体之间流动性介于固体与液体之间 提问：提问：提问：提问：如何制作？如何制作？如何制作？如何制作？在液体培养基中加入在液体培养基中加入在液体培养基中加入在液体培养基中加入0.5%0.5%或更低浓度的琼脂或更低浓度的琼脂或更低浓度的琼脂或更低浓度的琼脂 作用：？作用：？作用：？作用：？半固体培养基中中可以融融入入少少量量的的溶溶解解氧氧，因此这种培养基常被
7、被被被用用用用于于于于培培培培养养养养在在在在较较较较低低低低氧氧氧氧浓浓浓浓度度度度环环环环境境境境下下下下才才才才能能能能最最最最佳佳佳佳生生生生长长长长的细菌。的细菌。的细菌。的细菌。天然的固体培养基天然的固体培养基天然的固体培养基天然的固体培养基土豆块、培养真菌的麸皮、大米、大麦等。（二）根据培养基组分（二）根据培养基组分天然天然天然天然培养基、合成合成合成合成培养基和半合成半合成半合成半合成培养基。1 1）合成）合成）合成）合成合成合成纯化学试剂纯化学试剂纯化学试剂纯化学试剂2 2）天然）天然）天然）天然天然天然？纯生物制品纯生物制品(细胞提取物细胞提取物)如，常用的细菌肉汤培养基细
8、菌肉汤培养基牛肉膏 3g 蛋白胨 5g水 1000mL pH 7.27.4 牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏瘦牛肉经过加瘦牛肉经过加热浓缩抽提的膏状物热浓缩抽提的膏状物（主要作碳源）优点优点稳定、选择性稳定、选择性稳定、选择性稳定、选择性 缺点缺点缺点缺点很多细菌营养需求较为复杂，配方获取较配方获取较配方获取较配方获取较难难难难（二）根据培养基组分（二）根据培养基组分类似物如酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉 优点优点优点优点营养丰富、配制容易营养丰富、配制容易营养丰富、配制容
9、易营养丰富、配制容易 缺点？缺点？缺点？缺点？质量不稳定、选择性差质量不稳定、选择性差；3 3）半合成）半合成）半合成）半合成半不纯不纯不纯不纯优缺点介于前两者之间，因而优缺点介于前两者之间，因而优缺点介于前两者之间，因而优缺点介于前两者之间，因而使用最广使用最广。蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨动动植植物物蛋蛋白白（大大豆豆或或动动物物骨骨粉粉等等）经经初初步步酶酶解形成的短肽（解形成的短肽（主要作氮源主要作氮源）酵母膏酵母膏(三三)根据培养基用途根据培养基用途普通型、选择型、鉴别型普通型、选择型、鉴别型1）普通）普通普适普适有两种制备思路：有两种制备思路：有两种制备思路：有两种制备思路：？肉汤培养
10、基肉汤培养基牛肉膏牛肉膏 3g 蛋白胨蛋白胨 5g水水 1000mL pH 7.27.42）选择性培养基）选择性培养基选择性选择性选择性选择性？待选的细菌能优势生长待选的细菌能优势生长待选的细菌能优势生长待选的细菌能优势生长 投毒法投毒法（“正考试正考试正考试正考试”）常用物质常用物质常用物质常用物质为染料、胆汁酸为染料、胆汁酸为染料、胆汁酸为染料、胆汁酸盐、金属盐类、酸、碱和盐、金属盐类、酸、碱和盐、金属盐类、酸、碱和盐、金属盐类、酸、碱和抗生素。抗生素。抗生素。抗生素。例如欲分离例如欲分离古细菌古细菌古细菌古细菌，培养，培养基中通常加入基中通常加入青霉素青霉素青霉素青霉素（由（由于古细菌的
11、细胞壁不同于于古细菌的细胞壁不同于普通细菌，因而不会被对普通细菌，因而不会被对破坏普通细菌细胞壁结构破坏普通细菌细胞壁结构的青霉素杀死），古细菌的青霉素杀死），古细菌就唯一分离并存活下来。就唯一分离并存活下来。胆汁酸盐胆汁酸盐胆汁酸盐胆汁酸盐抑制革抑制革抑制革抑制革兰氏阳性菌兰氏阳性菌兰氏阳性菌兰氏阳性菌提问：提问：提问：提问：它能选择性生它能选择性生它能选择性生它能选择性生长那种细菌？长那种细菌？长那种细菌？长那种细菌？革兰氏阴性细菌革兰氏阴性细菌革兰氏阴性细菌革兰氏阴性细菌毒毒选择性的抑制剂选择性的抑制剂选择性的抑制剂选择性的抑制剂待选细菌有抗性待选细菌有抗性投其所好法投其所好法（“邪邪邪
12、邪挖墙角挖墙角挖墙角挖墙角”）好好营养、环境因子营养、环境因子营养、环境因子营养、环境因子（1 1）专一性营养源培养法）专一性营养源培养法）专一性营养源培养法）专一性营养源培养法 待选细菌待选细菌待选细菌待选细菌专门需要专门需要专门需要专门需要的的的的某种碳源或氮源某种碳源或氮源例如筛选纤维素分解菌选用纤维素作为培养基中的唯一碳源；各各各各类类类类降降降降解解解解石石石石化化化化废废废废水水水水特特特特殊殊殊殊有有有有机机机机物物物物的的的的细细细细菌菌菌菌筛筛筛筛选选选选通通通通常常常常是是是是以以以以这这这这类类类类有有有有机机机机物物物物为为为为培培培培养养养养基基基基中中中中的的的的唯
13、唯唯唯一一一一碳碳碳碳源源源源，将将将将目目目目的的的的细细细细菌菌菌菌富富富富集集集集筛筛筛筛选选选选下下下下来。来。来。来。（2 2）理化因素控制法）理化因素控制法）理化因素控制法）理化因素控制法 理化因素理化因素理化因素理化因素特殊的温度、特殊的温度、特殊的温度、特殊的温度、氧气、氧气、氧气、氧气、pHpH、盐度等环境、盐度等环境、盐度等环境、盐度等环境条件条件条件条件 主要用于筛选极端环境微主要用于筛选极端环境微主要用于筛选极端环境微主要用于筛选极端环境微生物。生物。生物。生物。如嗜盐、嗜热、嗜冷、嗜酸、嗜碱等的细菌，同时也被用于选择性培养好氧或厌氧细菌。嗜冷菌嗜冷菌嗜热菌嗜热菌3）鉴
14、别培养基）鉴别培养基鉴别鉴别鉴别鉴别明查分别（细菌种类）明查分别（细菌种类）明查分别（细菌种类）明查分别（细菌种类）提供培养环境外还同时具有类似提供培养环境外还同时具有类似提供培养环境外还同时具有类似提供培养环境外还同时具有类似于于于于“验钞机验钞机验钞机验钞机”的作用的作用的作用的作用 方法？方法？鉴鉴鉴鉴加入指示剂（加入指示剂（加入指示剂（加入指示剂（“紫光灯紫光灯紫光灯紫光灯”）别别别别不同菌落制造不同的代谢物（不同菌落制造不同的代谢物（不同菌落制造不同的代谢物（不同菌落制造不同的代谢物（“有无荧光粉有无荧光粉有无荧光粉有无荧光粉”），显色不一），显色不一），显色不一），显色不一3）鉴别
15、培养基）鉴别培养基举例举例水处理中常用的水处理中常用的远藤氏培养基远藤氏培养基远藤氏培养基远藤氏培养基就是典型就是典型大肠菌群大肠菌群内不同种属细菌内不同种属细菌的鉴别培养基。的鉴别培养基。都能生长，但对乳糖的分解能力不同都能生长，但对乳糖的分解能力不同大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌强强，菌落，菌落紫红色带金属光泽紫红色带金属光泽枸橼酸盐杆菌枸橼酸盐杆菌次之次之，菌落呈，菌落呈紫红或深红色紫红或深红色产气杆菌产气杆菌第三第三，菌落呈，菌落呈淡红色淡红色副大肠杆菌副大肠杆菌不能不能分解乳糖，菌落分解乳糖，菌落无色透明无色透明4）富集培养基（加富）富集培养基（加富）加富加富加富加富营养特别丰富营养特别丰
16、富营养特别丰富营养特别丰富针对细菌数量少，或针对细菌数量少，或针对细菌数量少，或针对细菌数量少，或对营养要求对营养要求对营养要求对营养要求苛刻苛刻苛刻苛刻培养不易的细菌培养不易的细菌培养不易的细菌培养不易的细菌 方法？方法？植物提取液、动物组织提取液、土壤植物提取液、动物组织提取液、土壤植物提取液、动物组织提取液、土壤植物提取液、动物组织提取液、土壤浸出液、血和血清等。浸出液、血和血清等。浸出液、血和血清等。浸出液、血和血清等。三、营养物质的吸收和运输三、营养物质的吸收和运输细胞膜的选择吸收细胞膜的选择吸收细胞膜的选择吸收细胞膜的选择吸收 分四种分四种分四种分四种情况情况情况情况水、无机盐、气
17、体、甘水、无机盐、气体、甘水、无机盐、气体、甘水、无机盐、气体、甘油等小分子油等小分子油等小分子油等小分子1被动扩散?推动力推动力推动力推动力?推动力推动力推动力推动力浓度梯度浓度梯度浓度梯度浓度梯度无载体蛋白无载体蛋白无载体蛋白无载体蛋白不不不不 内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗YorN?乞讨乞讨 2促进扩散 促进促进促进促进载体蛋白协助载体蛋白协助载体蛋白协助载体蛋白协助 载体蛋白载体蛋白载体蛋白载体蛋白 细胞外细胞外细胞外细胞外|细胞膜细胞膜细胞膜细胞膜|细胞内细胞内细胞内细胞内糖、氨基酸、金属离子等糖、氨基酸、金属离子等糖、氨基酸、金属离子等糖、氨基酸、金属离子等?推动
18、力推动力推动力推动力浓度梯度浓度梯度浓度梯度浓度梯度有有有有载体蛋白载体蛋白载体蛋白载体蛋白不不不不 内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗YorN?推动力推动力推动力推动力?拉赞助3主动运输运输运输运输运输载体蛋白载体蛋白载体蛋白载体蛋白主动主动主动主动逆逆逆逆浓度梯度方向浓度梯度方向浓度梯度方向浓度梯度方向糖、氨基酸、有机酸糖、氨基酸、有机酸糖、氨基酸、有机酸糖、氨基酸、有机酸 NaNa+、KK+、硫酸根、磷、硫酸根、磷、硫酸根、磷、硫酸根、磷酸根等酸根等酸根等酸根等?推动力推动力推动力推动力ATPATPATPATP放能放能放能放能有有有有载体蛋白载体蛋白载体蛋白载体蛋白消耗消耗
19、消耗消耗 内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗YorN?推动力推动力推动力推动力?抢劫抢劫细胞膜细胞膜细胞外细胞外细胞外细胞外细胞内细胞内细胞内细胞内酶酶1 1磷磷磷磷酸酸酸酸烯烯烯烯醇醇醇醇式丙酮酸式丙酮酸式丙酮酸式丙酮酸酶酶2 2热稳热稳热稳热稳定蛋定蛋定蛋定蛋白白白白丙酮酸丙酮酸丙酮酸丙酮酸葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖高能磷酸高能磷酸高能磷酸高能磷酸促进扩散促进扩散促进扩散促进扩散 高能磷酸基团转移高能磷酸基团转移高能磷酸基团转移高能磷酸基团转移磷酸化磷酸化自由能升自由能升自由能升自由能升高，能量级别、位高，能量级别、位高，能量级别、位高，能量级别、位置的升高。置的升高。置的升高
20、。置的升高。转位转位磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖4.4.基团转位基团转位 基团基团基团基团被转运的营养物被转运的营养物被转运的营养物被转运的营养物 转位转位转位转位？洗钱洗钱 提问：提问：提问：提问：磷酸化的益处？磷酸化的益处？磷酸化的益处？磷酸化的益处？（一）一）一）一）活化活化活化活化参与代谢参与代谢参与代谢参与代谢;（二二二二）防防防防止止止止营营营营养养养养物物物物从从从从细细细细胞胞胞胞内内内内流流流流失失失失（细细细细胞胞胞胞质质质质膜膜膜膜对对对对大大大大多多多多数数数数磷磷磷磷酸化的化合物有高度不渗透性）酸化的化合物有高度不渗透性）酸化的化合物有高度不渗透性）酸化的
21、化合物有高度不渗透性）；（三）（三）（三）（三）保持营养物在细胞内的低浓度保持营养物在细胞内的低浓度保持营养物在细胞内的低浓度保持营养物在细胞内的低浓度(不用主动运输耗能不用主动运输耗能不用主动运输耗能不用主动运输耗能)糖糖糖糖(葡萄糖、甘露糖、果糖及糖的衍生物葡萄糖、甘露糖、果糖及糖的衍生物葡萄糖、甘露糖、果糖及糖的衍生物葡萄糖、甘露糖、果糖及糖的衍生物N N N N乙酰葡萄糖乙酰葡萄糖乙酰葡萄糖乙酰葡萄糖胺胺胺胺)、嘌呤、嘧啶、脂肪酸、嘌呤、嘧啶、脂肪酸、嘌呤、嘧啶、脂肪酸、嘌呤、嘧啶、脂肪酸 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸放能放能放能放能有有有有载体蛋白载体蛋白载体蛋白载体蛋白消耗消耗消耗消耗能量能量能量能量内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗内部能量消耗YorN?推动力推动力推动力推动力?为什么细菌吸收某些营养物（如糖）为什么细菌吸收某些营养物（如糖）要采取不同方式呢？与哪些因素有关？要采取不同方式呢？与哪些因素有关？