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1、氧化发酵实验第1页，本讲稿共14页（二）：实验原理 不同的细菌分解利用糖的能力有很大的差别，有的能利用有的不能利用。能利用者分解糖后，有的只产酸不产气，有的既产酸又产气，根据在培养基中加入溴甲酚紫指示剂的颜色变化来判断是否产酸，再根据在单糖发酵管中倒置一小试管是否产生气泡来判断其分解糖时是否产气。只产酸不产气的培养基呈黄色，且试管内无气泡。既产酸又产气的培养基呈黄色且试管内有气泡。不分解糖的细菌培养基加入指示剂后仍为紫色。第2页，本讲稿共14页加入溴甲酚紫指示剂（5.86.8）的颜色变化来判断是否产酸细菌不分解葡萄糖不分解葡萄糖指示剂不变色（指示剂不变色（紫色紫色）分解葡萄糖分解葡萄糖产酸不产
2、气产酸不产气产酸又产气产酸又产气在单糖发酵管中倒置一小试管是否产生气泡来判断是否产气。指示剂变指示剂变黄色黄色，试，试管无气泡管无气泡指示剂变指示剂变黄色黄色，试，试管有气泡管有气泡第3页，本讲稿共14页（三）：实验试剂与器材菌种：大肠埃希菌、伤寒沙门菌。培养基：葡萄糖、乳糖发酵管（内置小倒 管）。其他：酒精灯、火柴、接种针、接种环、记号笔、培养箱等。第4页，本讲稿共14页（四）：实验步骤1：接种针灭菌2：用接种针将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖发酵管内。3：接种针灭菌，将发酵管标记放入35度孵箱培养1824小时4：观察记录实验结果。第5页，本讲稿共14页（五）：实验结果分析观察
3、结果时先确定有无细菌生长（1）：不分解糖 接种管指示剂不变色(紫色）紫色）（2）:分解糖产酸不产气 培养基呈黄色黄色且 液体培养基倒置管内没有气泡没有气泡。（3）：分解糖产酸又产气 培养基呈黄色黄色且液体培养基倒置管内有气泡气泡结果记录：菌名 葡萄糖 乳糖大肠埃希菌伤寒沙门菌第6页，本讲稿共14页（六）：注意事项1：严格做到无菌操作2：接种细菌前，检查糖发酵管小倒管内应无气泡存在，否则不能使用。第7页，本讲稿共14页氧化发酵试验又称O-F试验或Hugh-Ldifson（HL）试验第8页，本讲稿共14页实验器材1.菌种菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌1824H培养物2.培养基培养基 HL葡萄糖培养
4、基3.其他其他 灭菌液体石蜡、酒精灯、打火机、接种针、记号笔、培养箱等。第9页，本讲稿共14页实验原理 细菌在分解葡萄糖的过程中，依据对分子氧需求的不同，可将细菌分为不同的代谢类型。必须有氧分子参加的，即仅在有氧的环境中分解葡萄糖的细菌称为氧化型（O型）；有或无氧分子参与均能分解葡萄糖的细菌成为发酵型（F型）；有或无氧分子参与均不分解葡萄糖的细菌成为产碱型（OF试验阴性）第10页，本讲稿共14页加入溴甲酚紫指示剂（5.86.8）的颜色变化来判断是否产酸，用液体石蜡封管保证无氧状态。细菌仅在仅在有氧有氧的环境中分解葡的环境中分解葡萄糖萄糖有或无氧分子参与有或无氧分子参与均能分均能分解解有或无氧分
5、子参与有或无氧分子参与均不分均不分解解氧化型氧化型(o型）型）发酵型（发酵型（F型）型）产碱型（产碱型（OF试验阴性试验阴性）开管变色，闭开管变色，闭管不变管不变开管变色，开管变色，闭管变色闭管变色开管不变开管不变闭管不变闭管不变开管产酸开闭管都产酸开闭管都不产酸第11页，本讲稿共14页实验方法选取一种细菌接种2支HL培养基，发酵管滴加无菌液体石蜡高度约1CM为闭管；氧化管不加液体石蜡，暴露于空气中为开管，置于35培养箱中培养2448h，观察结果第12页，本讲稿共14页实验结果两管均不变色（不产酸）为产碱型或不分解糖型；两管均变成黄色（产酸）为F型；仅开管变黄（产酸），闭管不变色（不产酸）为O型。第13页，本讲稿共14页谢谢！第14页，本讲稿共14页