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1、革兰氏染色法革兰氏染色法实验目的实验目的 学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。实验原理实验原理 革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦病理学家丹麦病理学家Hans Christian Gram Hans Christian Gram 于于18841884年年创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。第1页/共12页第一步：初染第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫结晶紫使菌体着上蓝紫色；色；第二步：媒
2、染第二步：媒染:碘和结晶紫形成大碘和结晶紫形成大分子复合物，能被细胞壁阻留在细胞内；分子复合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三步：酒精脱色第三步：酒精脱色:细胞壁成分和构造细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应不同，出现不同的反应G G+菌：菌：细胞细胞不能被酒精脱色，仍呈紫蓝色；不能被酒精脱色，仍呈紫蓝色；G G-菌：菌：酒精将细胞脱色，细胞无色；酒精将细胞脱色，细胞无色；第四步第四步:番红复染番红复染，G G-菌呈红色，菌呈红色，G G+菌呈紫蓝菌呈紫蓝色。色。革兰氏染色革兰氏染色原理原理第2页/共12页实验器材实验器材1 1）菌种：菌种：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 2 2）
3、染色剂：染色剂：结晶紫，番红结晶紫，番红3 3）器材：器材：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸等双层瓶、擦镜纸等革兰氏染色法革兰氏染色法第3页/共12页实验步骤实验步骤混合涂片法涂片、干燥、固定混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染结晶紫初染1min1min，水洗，水洗 碘液媒染碘液媒染1min1min，水洗，水洗 用滤纸吸去残水后，将玻片倾斜，在白色背景下，用用滤纸吸去残水后，将玻片倾斜，在白色背景下，用95%95%乙醇脱色，直至流出的乙醇无色时，立即水洗乙醇脱色，直至流出的乙醇无色时，立即水洗 番红复染番红复染2min2min，水洗水洗 干燥后，
4、镜检干燥后，镜检注：注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被染乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成阴性菌成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成阴性菌革兰氏染色法第4页/共12页实验结果 阳性菌（蓝紫色）阳性菌（蓝紫色）阴性菌（红色）阴性菌（红色）第5页/共12页细菌芽孢染色法细菌芽孢染色法实验目的实验目的 学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆菌的形态特征。菌的形态特征。实验原理实验原理 芽孢：芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小
5、体，是细菌菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。的休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。第6页/共12页芽孢染色法原理 用弱碱性染料孔雀绿在用弱碱性染料孔雀绿在加热条件加热条件下染色，使染料下染色，使染料不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体易于区
6、分。使芽孢和菌体易于区分。第7页/共12页实验器材实验器材 1 1）菌种：菌种：枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 2 2）染色剂：染色剂：5%5%孔雀绿水溶液、孔雀绿水溶液、0.5%0.5%番红水溶液番红水溶液 3 3）器材：器材：显微镜、滴管、酒精灯、载玻片、接种环等显微镜、滴管、酒精灯、载玻片、接种环等细菌芽孢染色法细菌芽孢染色法第8页/共12页实验步骤实验步骤1 1）改良的）改良的Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法制备菌悬液制备菌悬液 孔雀绿染液孔雀绿染液(2(2滴滴)水浴加热染色水浴加热染色15-20 min 15-20 min 取取1 1小滴，涂小滴，涂片，固定片，固定 水洗水洗 番红染液复染番红染液复染2-3min2-3min，倾去染液，水洗，倾去染液，水洗 镜检镜检2 2）Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法涂片固定涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色孔雀绿染液在微火上加热染色5min 5min 水洗水洗 番红染液复番红染液复染染2min 2min 水洗水洗 镜检镜检细菌芽孢染色法细菌芽孢染色法第9页/共12页实验结果芽孢（绿色）芽孢（绿色）营养细胞（红色）营养细胞（红色）第10页/共12页第11页/共12页感谢您的观看！第12页/共12页