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1、滑子菇菌种制作、保藏及使用滑子菇菌种生产流程：滑子菇菌种生产流程：蔗糖、麦芽糖、浓缩酵母、水配制装三角瓶玉米芯、甜菜根、麸皮、酵母、碳酸钙、水灭菌配制母种液体菌种培养基装瓶培养灭菌液体菌种 A液体菌种 B固体菌种培养基培养固体菌种（原种、栽培种）检验、保藏、使用一、一、液体菌种制备液体菌种制备1 1 培养基使用的化学试剂及所占比例：培养基使用的化学试剂及所占比例：蔗糖2.0%麦芽糖1.0%浓缩酵母0.4%2 2 液体培养基的制作步骤：液体培养基的制作步骤：（1）按照制作量及原料配比称取各成分的重量（2）将原料充分在水中溶解（3）将所配溶液的温度降至室温（4）用 1.0%的盐酸溶液将培养液的 P
2、H 值调整至 5.86.0 之间（5）将培养液倒入装有磁棒的三角瓶中，用瓶塞将瓶口塞好，并使用锡箔纸包好瓶塞及瓶口，塞子与瓶壁之间不能留有空隙（6）放入蒸汽灭菌锅中杀菌，温度达 121，灭菌 20 分钟3 3 母种的制备母种的制备用 PDA 培养基制作平板 PDA，将试管斜面的母种接种到 PDA 平板的中央，在 20温度的条件下培养，培养 10 天左右，形成以接种母种为圆心的菌落4 4 种菌种菌接种前，用 0.1%的苯扎溴铵溶液将三角瓶擦拭消毒，将瓶口用酒精灯火焰灼烧灭菌，轻轻打开瓶塞，同时将接种钩灼烧灭菌，在无菌操作下，取适量的母种接种到液体培养基中，（母种取用方法，用灭菌后的接种钩在菌落边
3、缘5mm 以内处，选取菌丝浓密的起毛菌丝作为菌种，大小 2mm*2mm）接种完毕后，盖上瓶塞，并用锡箔纸包好（注意松紧度），在瓶上标注菌种名称、培养开始日期。整个过程中要特别注意防止杂菌污染，科学规范操作。5 5 液体菌种培养条件液体菌种培养条件（1）培养条件：温度 1920，适度67%（2）培养过程及溶液的变化A 接种入母种后 12 天，有少量白色小碎屑状物悬浮于溶液中，培养液橙黄透明B 接种后第 3 天，产生少许菌丝和菌丝球，溶液橙黄透明C 接种后第 45 天，菌丝和菌丝球数量明显增多，有大量菌丝或菌丝球悬浮于溶液中，培养液显深黄色，略显不透明6 6 转瓶接种培养转瓶接种培养（1）方法：为
4、了加快并扩大培养量，将以上培养完毕的液体菌种进行转瓶接种。用吸管吸取待接种液体培养基体积 1%2%的液体菌种，在无菌操作状态下，滴入培养液中，进行培养（2）培养 34 天后，溶液中形成大量的菌丝和菌丝球，颜色深黄色或黄褐色，即可接种入固体培养基中（颜色变为乳白色浑浊状则为杂菌污染，作废弃处理）7 7 液体菌种的检测液体菌种的检测用灭菌后的吸管吸取 0.1ml 的液体菌种，滴入 PDA 平板培养基中央，用弯玻璃棒将其均匀涂布于表面，盖上培养皿盖。标注菌种接种日期、名称、检测日期。放置于 2224的条件下培养 67 天，检查表面是否有杂菌污染，并测定菌落数量（菌落数量在10001500 个/ml
5、之间，PH 值在 5.45.6 之间）二、二、固体菌种制作固体菌种制作1 1 固体菌种培养基的配制原材料及比率固体菌种培养基的配制原材料及比率原料玉米芯：甜菜根：麸皮：酵母：碳酸钙比率83：5：12：0.03：0.001预定含水率：66.5%杀菌后 PH 值：5.35.82 2 制作步骤制作步骤（1）对原材料进行确认，要求新鲜、干燥、无霉变、无杂质，玉米芯粒度在 5mm 以下（2）根据生产量计算并称取原材料，玉米芯的粒度要求 1.7mm5mm 占 70%，1.7mm以下占 30%，甜菜根提前加自身重量46 倍的水浸泡。麸皮、酵母、碳酸钙称取好，加入玉米芯中，作为干料先一起搅拌均匀（3）次日，将
6、浸泡好的甜菜根，倒入提前拌好的干料中，边搅拌边加入甜菜根，同时，加入提前备好的水，是所有的原料充分混合，搅拌均匀。然后，测定湿料水分含量，使之在 66.00%左右，偏差较大，进行调整。PH 值杀菌前在 6.5 左右，如有偏差，用生石灰或者磷酸二氢钾进行调节，杀菌后在 5.55.8 之间。（4）将搅拌好的原料进行装袋，每袋充填量在 800g 左右，将表面用压料板压平，直径为 2cm 的打孔棒打两个孔至料底部，切勿将袋子底部打破，保持袋壁整洁。最后将袋口折叠。（5）制作完毕后，进行杀菌。3 3 种菌种菌（1）杀菌完毕的培养基冷却后进行种菌，使用培养完毕，状态良好的液体菌种（2）种菌前做好各项消毒准
7、备，用 0.1%的苯扎溴铵溶液将三角瓶壁擦拭消毒，在无菌操作状态下，液体菌种倒入提前灭菌的烧杯中，用灭菌后的吸管吸取液体菌种，接种到固体培养基表面（3）种菌完毕后，标注菌种名称及种菌日期。移入菌种培养室培养。4 4 固体菌种培养固体菌种培养（1）培养条件：温度 1920湿度67%二氧化碳浓度2000ppm菌种在培养过程中应避免光照（2）培养过程及菌丝生长A种菌后 23 天，菌丝开始萌发B第 5 天，菌丝大量萌发，并开始向下生长C接种后 30 天左右，基本长满全袋D培养 45 天，即可进行使用或保藏三、固体菌种的检测三、固体菌种的检测检测时间：培养至 35 天左右，菌丝长满全袋后，进行活性、杂菌
8、、细菌的检测。样本数量：随机抽取菌种样本 2 袋1 1 活性检测步骤：活性检测步骤：（1）制作 PDA 平板培养基 3 个。（PDA 配制浓度 24g/L）（2）在无菌操作状态下，用接种钩选取针尖大小的菌种粒，置于 PDA 平板培养基的中心，盖上培养皿盖（3）标注菌种名称、制作日期及检测日期（4）在 2224的环境条件下，培养7 天。测量以菌种为中心，菌丝边缘为圆周的圆的直径大小。直径4cm，菌种活性良好。2 2 杂菌检测方法杂菌检测方法（1）PDA 平板培养基 3 个（2）在无菌操作的状态下，用接种勺把固体菌种搔碎，取一勺均匀散布于PDA 表面，盖上培养皿盖（3）标注菌种名称、制作日期及检测日期同上，培养 7 天后，观察是否有杂菌产生，以确认是否被污染四、菌种的保藏及使用四、菌种的保藏及使用A）保藏条件：温度 16.518湿度 67%通常不需要光照B）菌种使用前的外观要求（1）菌丝已长满培养基（2）菌丝色泽洁白，健壮，绒毛状，生长均一（3）无杂菌污染，无其他杂色C)使用时的要求（1）菌种无霉变，无酸、臭味（2）菌种菌丝纯白，连接成块，培养基不干缩