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1、 ABO ABO血型鉴定血型鉴定实验原理正定型 根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A、抗B血清室温下与被检红细胞在盐水中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有血型抗体相对应的抗原，来判断和鉴定被检者的血型。第1页/共26页反定型 用已知标准A，B，O型红细胞分别与被检血清反应，若出现凝集，证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。根据血清中存在的血型抗体和Landsteiner定律判断和鉴定被检者血型。第2页/共26页试剂器材试剂标准抗A、抗B血型定型试剂5%（体积比）A，B，型标准红细胞生理盐水悬液。生理盐水器材 试管、
2、试管架、记号笔、吸管、离心机、玻片、显微镜标本 5%被检红细胞生理盐水悬液，血清或血浆第3页/共26页操作步骤正定型试管法：1：标记试管 取试管两支，分别标记抗A，抗B。2：加定型试剂 将抗A、抗B试剂各1滴分别加入抗A，抗B试管中。3：加入红细胞悬液 各加5%被检者红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀，以1000r/min离心1min。4：观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。第4页/共26页5：判断结果 凝集判断标准：完全凝集者，上层液无色清亮，底部有红细胞凝块，呈花边状，
3、轻弹试管凝块不散开。完全不凝集的试管，上层液无色清亮，血细胞均匀沉积管底，边缘整齐，重悬细胞后成均匀的红色悬液。第5页/共26页试管法：1：标记试管 取试管3支，分别标记A，B，O。2：加入样本血清或血浆 血样经2500r/min离心3min分离出血浆或血清，在A，B，O试管中分别加1滴血浆或血清，3：加标准红细胞悬液 再分别加入5%A型、B型、型标准红细胞生理盐水悬液各1滴，混匀，以1000r/min离心1min。4：观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。反定型第6页/共26
4、页红细胞的ABOABO正反定型结果判断正向定型 反向定型抗A 抗B 抗A,B A细胞B细胞O细胞 -+-O+-+-+-A-+-B+-AB判断结果第7页/共26页注意事项：1.严格标记，器材干燥洁净，防止溶血，避免交叉污染。2.试管法出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并有补体激活。3.46个月以内婴儿反定型可能不凝集或凝集很弱，年老体弱者抗原较弱，最好用试管法鉴定血型。4.亚型红细胞抗原较弱，凝集较弱。5.防止冷凝集素的干扰。6.某些疾病可能使红细胞定型困难：严重的肠道细菌感染出现类B抗原；血清中存在病理性冷凝集素；部分高球蛋白与异常球蛋白症患者。第8页/共26页毛细血管采血标准操作程序 操作步
5、骤1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜,6月以下婴幼儿通常选拇指内侧或足跟两侧采血。2 轻轻按摩采血部位。3 用棉签蘸取消毒液消毒局部皮肤、待干。第9页/共26页4 紧捏刺血部位,使其自然充血。5 用无菌刺针穿刺,动作应迅速,深度23mm,稍加挤压以血液流出为宜。6 用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。8 采血完毕,用干棉球压住伤口,止血3min。第10页/共26页标本要求1 除特殊情况外，不在耳垂采血。采血应避开冻疮、炎症、损伤、水肿等部位。2采血后轻轻挤压血液顺畅流出，避免过度挤压，混入组织液易致凝固。3进行多项检验时,采血次序为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、涂片
6、等。出血时间、凝血时间用APTT、PT和PLT计数联合取代。第11页/共26页二、交叉配血实验二、交叉配血实验u分类 1.“主侧”配血 2.“次侧”配血第12页/共26页献血者 受血者红细胞 红细胞血清 血清供血者红细胞与受血者血清反应（主侧交叉配血）受血者红细胞与供血者血清反应（次侧交叉配血）其目的是检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。第13页/共26页交叉配血实验技术交叉配血实验技术u1.盐水介质法u2.酶介质法 u3.抗人球蛋白介质法u4.凝聚胺法u5.微柱凝胶免疫技术第14页/共26页实验原理 盐水介质法（Immediatespin，IS）是利用天然IgM类血型抗体与对
7、应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反应，通过离心观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者血清之间有无凝集现象，判断供血者与受血者之间有无ABO血型不合的情况。第15页/共26页酶技术利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应主要用于一些不完全抗体的检测第16页/共26页第17页/共26页凝聚胺技术利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，形成可逆凝集，加入解聚液仅可使非特异性聚集分散，而发生抗原抗体特异性反应凝集不会散开。第18页/共26页凝胶
8、卡式检测法的工作原理将红细胞悬液和血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在微柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性游离的红细胞，挤过装有过滤介质的微柱到达底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性 第19页/共26页第20页/共26页试剂器材1：试剂 生理盐水2：器材 试管，试管架、记号笔、一次性塑料吸管，玻片、离心机，显微镜，3：标本 患者、献血员静脉血第21页/共26页操作步骤1：患者标本准备 分离血清，标记为PS（patient serum）配制5患者红细胞生理盐水悬液，标记为PC（patient cell）：献血员标本准备分离血清，标记为DS（donor s
9、erum）配制5献血员红细胞生理盐水悬液，标记为DC（donor cell）第22页/共26页交叉配血1.取两支试管，分别标明主，次，即主侧配血管和次侧配血管。2.在主侧配血管中加PS 1滴，滴，3.在次侧配血管中加DS 1滴，滴，4.混匀，1000r/min离心1min。5.观察结果 先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻摇动，观察管底反应物有无凝集，重悬液在低倍镜下观察有无红细胞凝集。第23页/共26页判断结果：凝集结果判断：判断标准同正定型试管法配血是否相合判断标准：ABO同型配血，主侧，次侧均无溶血及凝集，血型相合，可以输血；主，次侧任何一管发生溶血或凝集，不可输血，应寻找原因。异型配血时（指O型血输给A，B，AB型），主侧无凝集无溶血，次侧有凝集，无溶血，可以输入少量血。如主侧，次侧均凝集或主侧凝集，均需要查找原因，不能输血。第24页/共26页思考题如何根据正反定型判断ABO血型第25页/共26页谢谢您的观看！第26页/共26页