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1、临床检验影响因素第1页，本讲稿共36页临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下：第2页，本讲稿共36页一一.临床标本的收集和保存临床标本的收集和保存第3页，本讲稿共36页用于用于用于用于ELISAELISA测定的临床标本最为常用的是血清（浆），测定的临床标本最为常用的是血清（浆），测定的临床标本最为常用的是血清（浆），测定的临床标本最为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测
2、目的，也用到唾液、脑脊液、尿有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激激素、特种蛋
3、白、细胞因子和治疗药物等。对用于激激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨在早晨在早晨在早晨4 46 6点之间，会有一峰值出现：生长激素、点之间，会有一峰值出现：生长激素、点
4、之间，会有一峰值出现：生长激素、点之间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（促黄体激素（促黄体激素（促黄体激素（LHLH）和促卵泡激素（）和促卵泡激素（）和促卵泡激素（）和促卵泡激素（FSHFSH）均以阵发性）均以阵发性）均以阵发性）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。连的时间间隔
5、内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原服药后的最适时间抽血检测。用于传染
6、性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面：方面要考虑以下几个方面：方面要考虑以下几个方面：方面要考虑以下几个方面：第4页，本讲稿共36页（1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此
7、，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。第5页，本讲稿共36页（2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。第6页，本讲稿共36页（3）血清标本如是以无菌操作分离，则可以在28下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70以下。第7页，本讲稿共36页（4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻
8、融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。第8页，本讲稿共36页（5）标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。第9页，本讲稿共36页二、试剂准备二、试剂准备第10页，本讲稿共36页在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是
9、对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在因此在ELISAELISA测定中试剂的准备最为关键的是，在实验开始前，将试测定中试剂的准备最为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置2020分钟以上后，再进行测分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目
10、前的商品地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISAELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以此外，当试剂盒以OPDOPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。时配制。第11页，本讲稿共36页三、加血清样本及反应试剂三、加血清样本及反应试剂第12页，本讲稿共36页在现在的在现在的ELISAELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一商品试剂盒
11、中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴
12、加，除了试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。第13页，本讲稿共36页四、温育四、温育
13、第14页，本讲稿共36页温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37和室温，其次是43和28。第15页，本讲稿共36页温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为3730分钟1小时，进口ELISA试剂盒则通常为3712小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在
14、实际测定操作中一定要注意以下几点：第16页，本讲稿共36页（1 1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至度从室温升至3737，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始
15、计时，这样就很容易造成实际测定问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。这可能就与南方冬天室内温中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后度较低有关，此时微孔板转入温箱后3737温育时间不够，以致弱阳性样温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证本测定为阴性。因此，为保证3737下足够的温育时间，临床实验室下足够的温育时间，临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间
16、孔内温度才能达到箱后需要多长时间孔内温度才能达到3737，从而适当延长板条在温，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。测量观察即可。第17页，本讲稿共36页（2）温育温度的选择。在有的）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37下1小时，另一种则为43下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2 28 8下反应24小时。较高的反应温度，由
17、于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，建议在临床ELISA测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。第18页，本讲稿共36页（3 3）“边缘效应边缘效应”的排除。以前在使用的排除。以前在使用9696孔板的孔板的ELISAELISA测测定中，常发现有定中，常发现有“边缘效应边缘效应”，即外周孔显色较中心，即外周孔显色较中心孔深，产生这种孔深，产生这种“边缘效应边缘效应”的原因可能为的原因可能为9696孔板周孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究
18、证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规身为不良热导体，在实验室的常规ELISAELISA测定中，将板测定中，将板从室温（通常在从室温（通常在2525左右）置于左右）置于3737温箱，板也升温时，温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如至温育温度（如3737），就可以很容易地排除），就可以很容易地排除“边缘效应边缘
19、效应”，并且可提高测定的重复性。，并且可提高测定的重复性。第19页，本讲稿共36页总而言之，在临床ELISA测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。第20页，本讲稿共36页五、洗板五、洗板第21页，本讲稿共36页固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特
20、异将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证成份分离开来，以保证ELISAELISA测定的特异性。因此，洗板对于测定的特异性。因此，洗板对于ELISAELISA测定来说，也是极其关键的一步。以测定来说，也是极其关键的一步。以HRPHRP作为标记酶的作为标记酶的ELISAELISA试试剂盒中使用的洗板液一般为含剂盒中使用的洗板液一般为含0.05%Tween200.05%Tween20的中性的中性PBSPBS，Tween20Tween20为为一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团，其在洗涤中的作一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团，其在洗涤中的作用机
21、理是，借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸附于聚苯乙烯用机理是，借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相而进入液相，这样就可达到去掉非特异吸附物的目的，但由于抗体或而进入液相，这样就可达到去掉非特异吸附物的目的，但由于抗体或抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被动吸
22、附于固相，因此要注意非离子去垢剂的使用浓度，洗板液中动吸附于固相，因此要注意非离子去垢剂的使用浓度，洗板液中Tween20Tween20浓度高于浓度高于0.2%0.2%，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响试验的测定下限影响试验的测定下限第22页，本讲稿共36页在临床实验室中，ELISA测定的洗板一般有两种方式，即手工和洗板机洗板。手工洗板即是在每次反应温育后，将反应液吸出或甩干，然后在板孔中加满洗液，放置23 3分钟后，将洗液吸出或甩干，再在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤34 4次，最后次，最后在吸水纸上拍干，即可进行下一步测定操作。洗板机在吸水纸上
23、拍干，即可进行下一步测定操作。洗板机洗板则是将上述手工操作改由洗板机进行，使用洗板洗板则是将上述手工操作改由洗板机进行，使用洗板机洗板的一个特点是，每次洗板后不能拍干，故有较机洗板的一个特点是，每次洗板后不能拍干，故有较多的液体残留，液体残留量小的洗板机洗板至彻底所多的液体残留，液体残留量小的洗板机洗板至彻底所需的次数要少于残留量大的洗板机。需的次数要少于残留量大的洗板机。第23页，本讲稿共36页六、显色六、显色第24页，本讲稿共36页在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制
24、。一般商品试剂盒显色反应条件为37或室温反应1530分钟。从理论上说，3730分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37下反应2530分钟后，终止反应比色测定。第25页，本讲稿共36页此外，在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性，即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中，观察是否有显色出现，如有，则说明底物已变质。以OPDOPD为底为底物，配好后应为无色，否则就不能使用。以物，配好后应为无色，否则就不能使用。以TMBTMB为底物，整个显色反应过程无需避光，而
25、以OPD为底物，则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后，加入酸终止反应，振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。第26页，本讲稿共36页七、比色七、比色第27页，本讲稿共36页ELISAELISA的比色测定由酶标仪进行，有的同行可能会认为，既然由酶标仪进行，那么此时便可以万事大吉了，其实不然，因为当代较为先进的酶标仪器仪表，均有较多的功能，使用不当，会得到令人难以理解的结果。如使用酶标仪比色测定后，有许多阴性测定孔的吸光度值为负数或测定假阳性率大大增加等等。这主要是没有正确地理解和使用酶标仪所致。至于如何正确理解和使用酶标仪详见后面
26、有关章节。此处，只是强调下面两点：第28页，本讲稿共36页（1）比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。由于有的临床实验室在进行ELISA测定时，以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。第29页，本讲稿共36页（2 2）单波长或双波长比色选择的问题。中档以上的酶标仪基本上都同时具有单）单波长或双波长比色选择的问题。中档以上的酶标仪基本上都同时具有单波长和双波长比色功能。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有最大吸收的波长和双波长比色功能。所谓的单波长比色
27、即是通常的以对显色具有最大吸收的波长如波长如450nm450nm或或492nm492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm450nm和非和非敏感波长如敏感波长如630nm630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的
28、吸光度即为脏物的吸光度一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点，一般不必设空白孔。如在使用双波长比色时，仍设空白孔，特异显色测定吸光度的影响的优点，一般不必设空白孔。如在使用双波长比色时，仍设空白孔，
29、就可能会造成前面提到的测定孔吸光度为负数的现象。由于就可能会造成前面提到的测定孔吸光度为负数的现象。由于ELISAELISA测定中单个空白孔的非特异测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，故而在得到不同吸光度测定值，故而在ELISAELISA测定比色时，最好是使用双波长比色。测定比色时，最好是使用双波长比色。第30页，本讲稿共36页八、结果判定临床临床ELISAELISA测定按其表示测定结果的方式分为定性测定按其表示测定结果的方式分为
30、定性和定量测定两大类。定性测定只是对标本中是否含有和定量测定两大类。定性测定只是对标本中是否含有待测抗原或抗体作出待测抗原或抗体作出“有有”或或“无无”的结论，分别用的结论，分别用“阳性阳性”和和“阴性阴性”来表示。可见定性测定通常是用来表示。可见定性测定通常是用于传染性病原体的抗原或抗体的测定，以判断特定病于传染性病原体的抗原或抗体的测定，以判断特定病原体感染的存在与否。而定量测定则是对标本中待测原体感染的存在与否。而定量测定则是对标本中待测抗原的多少进行量值测定，以具体数值表示。定量测抗原的多少进行量值测定，以具体数值表示。定量测定基本上是用于非病原体抗原物质的测定，如激素、定基本上是用于
31、非病原体抗原物质的测定，如激素、细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等。细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等。ELISAELISA定性定性测定的测定的“阳性阳性”和和“阳性阳性”的判定依据是试剂盒所确的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值（定的阳性判定值（Cut-offCut-off）。定量测定的）。定量测定的“量值量值”依依据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线（又称标准曲线）。（又称标准曲线）。第31页，本讲稿共36页下面再解释一下在下面再解释一下在ELISAELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写。定性测定结果判定中常用的一些缩写。（1
32、 1）S/COS/CO：其中：其中S S为为Sample(Sample(样本样本)或或Specimen(Specimen(标本标本)的的简写，表示的是标本测定的吸光度值，简写，表示的是标本测定的吸光度值，COCO为为Cut-offCut-off值的值的简写。除竞争抑制法外，其它简写。除竞争抑制法外，其它ELISAELISA定性测定模式中，当定性测定模式中，当S/COS/CO值大于或等于值大于或等于1 1时，标本的测定为阳性，小于时，标本的测定为阳性，小于1 1时为阴性。时为阴性。（2 2）S/NS/N或或P/NP/N：其中：其中S S同（同（1 1），），N N为为Negative(Negat
33、ive(阴性对照阴性对照)的简写，的简写，P P为为PatientPatient（患者）的简写。较早的试剂盒很多都（患者）的简写。较早的试剂盒很多都使用使用S/NS/N或或P/N2.1P/N2.1为阳性判定标准，现仍有一些试剂盒为阳性判定标准，现仍有一些试剂盒使用这种方式。这种方式与使用这种方式。这种方式与S/COS/CO方式无根本性区别，只不方式无根本性区别，只不过是前者将阴性对照（过是前者将阴性对照（N N）的）的2.12.1倍视为倍视为Cut-offCut-off值而已。值而已。第32页，本讲稿共36页九、结果报告及解释临床临床ELISAELISA测定结果的报告较为简单。定性测定报阴性或
34、测定结果的报告较为简单。定性测定报阴性或阳性即可；定量测定则报出具体的数值。结果解释比较起来阳性即可；定量测定则报出具体的数值。结果解释比较起来要复杂的多，它要求实验室技术人员对所测定的项目有较为要复杂的多，它要求实验室技术人员对所测定的项目有较为全面的知识基础。现在，检验不再是单纯的实验室测定，而全面的知识基础。现在，检验不再是单纯的实验室测定，而已成为一门临床医学学科，即检验医学，这就要求从事医学已成为一门临床医学学科，即检验医学，这就要求从事医学检验工作的检验医师，对所做的测定项目除了知其然，还要检验工作的检验医师，对所做的测定项目除了知其然，还要知其所以然，否则就难免为时代所淘汰。知其
35、所以然，否则就难免为时代所淘汰。综上所述，尽管综上所述，尽管ELISAELISA测定的操作步骤非常简单，但测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。问题及原因归纳总结于下表。第33页，本讲稿共36页 临床临床临床临床ELISAELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因测定中可能会出现的问题及可能的原因测定中可能会出现的问题及可能的原因测定中可能会出现的问题及可能的原因第34页，本讲稿共36页第35页，本讲稿共36页谢谢大家!第36页，本讲稿共36页