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1、色谱柱的制备第1页，本讲稿共11页实验目的实验目的了解色谱柱的制备过程。了解色谱柱的制备过程。练习用真空泵抽法装填色谱柱。练习用真空泵抽法装填色谱柱。第2页，本讲稿共11页实验原理实验原理1.的分离是在色谱柱中进行的，制备一根分离的分离是在色谱柱中进行的，制备一根分离性能好的色谱柱，是完成色谱分析的键。性能好的色谱柱，是完成色谱分析的键。2.一根填充柱的步骤：一根填充柱的步骤：1.选择固定相（选择固选择固定相（选择固定液、载体、确定配比）定液、载体、确定配比）;2.涂渍固定液涂渍固定液3.装填装填柱子柱子4.老化柱子。老化柱子。第3页，本讲稿共11页仪器和试剂仪器和试剂仪器仪器;90色谱仪、真
2、空泵、分液漏斗、圆底烧瓶、色谱仪、真空泵、分液漏斗、圆底烧瓶、量筒、烧杯、不锈钢柱量筒、烧杯、不锈钢柱2mx4mm、玻璃棉、玻璃棉、纱布等。纱布等。试剂：邻苯二甲酸二壬酯、试剂：邻苯二甲酸二壬酯、6201红色硅藻土红色硅藻土(6080目目)、丙酮。、丙酮。第4页，本讲稿共11页操作步骤操作步骤制备一根制备一根2mx4mm不锈钢螺旋柱不锈钢螺旋柱固定液：邻苯二甲酸二壬酯；固定液：邻苯二甲酸二壬酯；载体：载体：6201红色硅藻土红色硅藻土(6080目目)；配比：配比：5%。第5页，本讲稿共11页清洗和干燥色谱柱管清洗和干燥色谱柱管用用20%左右的氢氧化钠温热溶液反复抽洗柱管左右的氢氧化钠温热溶液反
3、复抽洗柱管34次，用自来水抽洗，再用次，用自来水抽洗，再用10%盐酸抽洗至盐酸抽洗至中性。中性。试漏烘干。将柱子一端堵住，另一端通入气体，试漏烘干。将柱子一端堵住，另一端通入气体，用肥皂水检漏。若无漏气，再将柱管用蒸馏水用肥皂水检漏。若无漏气，再将柱管用蒸馏水清洗至无氯离子，抽去水后放入烘箱中清洗至无氯离子，抽去水后放入烘箱中120烘烘干。干。第6页，本讲稿共11页载体预处理载体预处理称取称取100g6080目的目的6201红色硅藻土担体于红色硅藻土担体于400ml烧杯中，加入烧杯中，加入6mol/L的盐酸溶液，浸泡的盐酸溶液，浸泡2030min，然后用水洗至中性，抽滤后转移，然后用水洗至中性
4、，抽滤后转移入蒸发皿中，在入蒸发皿中，在105c烘箱内烘干至烘箱内烘干至46h。取。取出冷却后，用出冷却后，用6080目标准分子筛出去过粗或目标准分子筛出去过粗或过细的筛分，并保存在干燥器中备用。过细的筛分，并保存在干燥器中备用。（若为已经预处理过的市售载体，则不必酸洗，（若为已经预处理过的市售载体，则不必酸洗，只要烘干即可）。只要烘干即可）。第7页，本讲稿共11页确定固定液、担体及溶剂量确定固定液、担体及溶剂量先计算出柱管的容积在过量先计算出柱管的容积在过量20%40%即为载体的量（即为载体的量（Ms）;柱管容积：柱管容积：Vc=dL/4=3.140.4200/4=25.6(ml);实际用量
5、实际用量:Vs=25.6(1+0.4)=35.84mL=36mL。用量筒量取粒度合格的担体用量筒量取粒度合格的担体36mL，并称出担体的质量（，并称出担体的质量（ms）。）。由担体的量根据配比确定固定液的质量（由担体的量根据配比确定固定液的质量（mL）。）。配比即固定液与固定相之比，配比为配比即固定液与固定相之比，配比为5%，即：，即：Ml=Ms（5/100）在分析天平上用在分析天平上用100mL烧杯称出烧杯称出mlg固定液。固定液。溶剂用量溶剂用量:一般以体积计，为载体体积的一般以体积计，为载体体积的0.81.2倍即可。倍即可。第8页，本讲稿共11页涂渍固定液涂渍固定液活化担体活化担体-配制
6、溶液配制溶液-涂渍涂渍-除溶剂除溶剂-干燥干燥第9页，本讲稿共11页装填柱子装填柱子 在柱子的一端塞上一小段玻璃棉，用一块纱布在柱子的一端塞上一小段玻璃棉，用一块纱布包扎后，通过三通活塞开关和缓冲瓶接真空泵包扎后，通过三通活塞开关和缓冲瓶接真空泵减压抽气，柱管另一端接一小漏斗，向漏斗中减压抽气，柱管另一端接一小漏斗，向漏斗中连续加固定相，并用小木棒轻轻敲打柱管，边连续加固定相，并用小木棒轻轻敲打柱管，边抽边敲，不要使固定相断流。当固定相不在进抽边敲，不要使固定相断流。当固定相不在进入时，取下漏斗，在此端塞入一小段玻璃棉，入时，取下漏斗，在此端塞入一小段玻璃棉，做好进气端和出气端的标记。做好进气端和出气端的标记。第10页，本讲稿共11页老化老化将柱子的进口段接到色谱仪的汽化室（原来接将柱子的进口段接到色谱仪的汽化室（原来接漏斗的一端），另一端连接一段细管线后放空，漏斗的一端），另一端连接一段细管线后放空，通氮气，缓慢升温至通氮气，缓慢升温至110c,在此温度下维持在此温度下维持48h,冷却后将柱子的另一端与检测器相连，冷却后将柱子的另一端与检测器相连，再次升温老化直至走基线平稳，说明老化处理再次升温老化直至走基线平稳，说明老化处理完成，可用于分析。完成，可用于分析。第11页，本讲稿共11页