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1、色谱柱的正确使用与维护天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.1 1第1页，本讲稿共13页很多情况下，高效液相色谱系统出现故障的根本原因在于色谱柱色谱柱出现不正常的现象，而与仪器本身无关！天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.2 2第2页，本讲稿共13页打开新色谱柱的包装打开包装，首先用打开包装，首先用“运输试剂运输试剂”冲洗色谱柱冲洗色谱柱1212小时，流小时，流速速0.5ml/min0.5ml/min。大约相当于。大约相当于10201020倍的柱体积。倍的柱体积。所谓所谓“运输试剂运输试剂”是指色
2、谱柱出厂后柱管内封存的是指色谱柱出厂后柱管内封存的试剂，每种柱子所用的试剂不相同。试剂，每种柱子所用的试剂不相同。对于常用的对于常用的C18C18柱，这种试剂采用甲醇即可。其它类型的柱，这种试剂采用甲醇即可。其它类型的色谱柱看其相应说明书而定。色谱柱看其相应说明书而定。色谱柱如果长期不用，冲洗干净之后，也应该用该种色谱柱如果长期不用，冲洗干净之后，也应该用该种“运输试剂运输试剂”充满，然后用堵头封好保存。充满，然后用堵头封好保存。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP TECHCOMP LTD.LTD.3 3第3页，本讲稿共13页色谱柱的测试新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色
3、谱仪上进行性能测试：使用色谱柱附带的检验报告上的测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效，看是否达到要求。并且，在以后的使用过程中，应时常对色谱柱进行测试，以随时判断其柱效好坏。注意记录新柱子在常规分析条件下的操作压力！天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.4 4第4页，本讲稿共13页色谱柱的平衡正式做实验之前，用流动相平衡色谱柱，直到获得稳定的基线。缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间来平衡。每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的补偿，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOM
4、P LTD.TECHCOMP LTD.5 5第5页，本讲稿共13页色谱柱的使用使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动离子性流动相中有一定的溶解度）相中有一定的溶解度）大多数反相色谱柱的大多数反相色谱柱的pHpH稳定范围是稳定范围是2 27.57.5，尽量不超，尽量不超过该色谱柱的过该色谱柱的pHpH范围范围避免流动相组成及极性的剧烈变化避免流动相组成及极性的剧烈变化流动相使用前必须经脱气和过滤处理流动相使用前必须经脱气和过滤处理压力升高是需要更换预柱的信号压力升高是需要更换预柱的信号 天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TE
5、CHCOMP LTD.6 6第6页，本讲稿共13页色谱柱使用之后非常简单，但是非常重要：冲洗冲洗!对于常用的C18反相柱，如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相（含有酸、碱、盐的流动相），应在实验完毕后用水将柱子冲洗干净，然后保存于甲醇或乙腈之中。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.7 7第7页，本讲稿共13页色谱柱堵塞的原因（1）溶剂中的不溶物溶剂中的不溶物 应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45m0.45m）样品中的不溶物样品中的不溶物 应对样品进行膜过滤（孔径不超过应对样品进行膜过滤（孔径不超过0
6、.45m0.45m）泵、进样器等中的不溶物泵、进样器等中的不溶物 在泵和进样器之间、进样器和柱子之间安装在线过滤器在泵和进样器之间、进样器和柱子之间安装在线过滤器天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.8 8第8页，本讲稿共13页色谱柱堵塞的原因（2）由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀 用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱 在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉淀在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉
7、淀在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉淀在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉淀 检查样品溶液和流动相是否互溶检查样品溶液和流动相是否互溶 由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀 将色谱柱密封紧，并保持室温恒定将色谱柱密封紧，并保持室温恒定 由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀
8、使用相近填料的预柱（保护柱），并定期更换使用相近填料的预柱（保护柱），并定期更换天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.9 9第9页，本讲稿共13页色谱柱堵塞的修复（1）步骤1：使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）应用溶解性强的溶剂（如水）进行冲洗步骤2：先断开检测器，使用对样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗。对于反相色谱柱，可使用甲醇、乙睛、四氢呋喃、氯仿、庚烷等。在此条件下，应避免溶剂的pH 低于2 或高于8。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.1010第10页，本讲稿共13页色谱柱堵塞的修复（2
9、）若经过步骤若经过步骤1 1 和步骤和步骤2 2 后，压力仍没下降，进行步骤后，压力仍没下降，进行步骤3 3步骤3：断开检测器，将色谱柱反方向放置，然后检查柱压（1 1）若压力稳定下降，进行步骤若压力稳定下降，进行步骤4 4（2 2）若压力不下降，进行步骤若压力不下降，进行步骤5 5步骤4：保持色谱柱反方向连接，用低于0.5 ml/min 流速冲洗12 小时，然后换回正常方向，重复步骤1、步骤2即可。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP TECHCOMP LTD.LTD.1111第11页，本讲稿共13页色谱柱堵塞的修复（3）步骤步骤5 5：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。但柱连
10、接：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。但柱连接端的拆卸或重装会导致柱效下降（有效塔板数下降和不对端的拆卸或重装会导致柱效下降（有效塔板数下降和不对称峰等）。若步骤称峰等）。若步骤5 5 不能降低柱压，进行步骤不能降低柱压，进行步骤6 6。步骤步骤6 6：若进口端的填料发生堵塞，柱子将不可能被彻：若进口端的填料发生堵塞，柱子将不可能被彻底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料，重新填充，底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料，重新填充，进行有限的柱效恢复。在多数情况下，柱效将严重地下进行有限的柱效恢复。在多数情况下，柱效将严重地下降。降。步骤步骤7 7：若步骤：若步骤6 6 无法改善柱子性能，那么柱子已无无法改善柱子性能，那么柱子已无法修复，只能更换新柱子。法修复，只能更换新柱子。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP LTD.TECHCOMP LTD.1212第12页，本讲稿共13页其他注意的问题在对-NH2改性的色谱柱（氨基柱）进行再生时，由于-NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。天美科技有限公司天美科技有限公司 TECHCOMP TECHCOMP LTD.LTD.1313第13页，本讲稿共13页