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1、；伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基原理原理一般用来鉴定大肠杆菌。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下：制作伊红美蓝培
2、养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10 稀释。取 0.1 毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。将划线后的培养皿倒置37温箱中培养 1824 小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。配置方法配置方法蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 2030g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml0.5%美蓝水溶液 13ml储备培养基的制备先将琼脂加至 900ml 蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml
3、，调整 PH 为 7.27.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌 20min，贮存于冷暗处备用。制法.；将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121高压灭菌 15min 备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至5055，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。麦康凯培养基麦康凯培养基原理原理1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。配置方法配置方法蛋白胨 17g脙胨 3g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g氯化钠 5g琼脂 17g蒸馏水 1000
4、mL乳糖 10g0.01%结晶紫水溶液 10mL0.5%中性红水溶液 5mL麦康凯麦康凯-制法制法1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL 蒸馏水中，校正 pH7.2。将琼脂加入 600mL加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121高压灭菌 15min 备用。2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至 5055时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。吲哚试验吲哚试验吲哚（indol）试验 有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试
5、验阳性。LBLB 培养基培养基配方配方胰化蛋白胨 1g酵母提取物 0.5gNaCl 1g琼脂 1.5-2g水 100mlLBLB 培养基培养基-LB-LB 培养基条件培养基条件LBLB 培养基培养基-固态培养基固态培养基LB 固体培养基 1L 和液体一样，加 15g 琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。LB 固体培养基倒板1.配制：100mlLB 培养基加入 1.5g 琼脂粉.；2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置与 55的水浴中，待培养基温度降到 55时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。3.倒板：一般 10ml 倒 1 个板子
6、。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照 10-15 分钟。4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4保存，一个月内使用。牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）配方配方蛋白胨 10g；牛肉膏 3g；氯化钠 5g；琼脂 1520g；蒸馏水 1000mL；制法制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约 2mL，校正 pH 至 7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌 15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。甲基红试验甲基红试验甲基红试验-
7、化学属性甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH 值下降至 pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红。甲基红试验-试验方法挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于361C 或 30C（以 30C 较好）35 天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂 12 滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5 天仍为阴性、即可判定结果。甲基红为酸性指示剂，pH 范围为 4.46.0，其pK 值为 5.0。故在pH5.0
8、 以下，随酸度而增强黄色，在 pH5.0 以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0 或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。尿素酶尿素酶某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35孵育 1824h，观察结果。红色为阳性，不变为阴性。主要用于肠杆菌科变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。明胶液化明胶液化明胶液化 gelaune liquefaction指细菌把明胶胶分解成液状的现象。明胶液化-它的特征这种能力可因细菌种类不同而有显著差异，因此很早以来就被用来作为鉴别、测定细菌的一种特征。明胶液化-适应范围葡
9、萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。由于明胶是在热水中溶解胶原（collagen）而成的蛋白质，因此，它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的。用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。.；VPVP 试验试验VP 试验-试验简介英 VP test微生物检验中常用的生化反应之一。某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称 VP（+）反应。VP 试验-试验方法1）OMeara 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于361C 培养 48h
10、，培养液1ml 加 OMeara 试剂（加有 0.3%肌酸 Creatine 或肌酸酐 Creatinine 的 40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管 12min，静置于室温或 361C 恒温箱，若 4h 内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在 4850C 水浴放置 2h 后判定结果者。2）Barritt 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于361C 培养 4 天、培养液2.5ml 先加入5C萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液 0.6ml,再加 40%氢氧化钾水溶液 0.2ml，摇动 25min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或 361C 恒温箱，如 2h 内仍不显现红色
11、、可判定为阴性。3）快速法：将0.5%肌酸溶液 2 滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入 5%-萘酚 3 滴，40%氢氧化钠水溶液 2 滴，振动后放置 5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。生理盐水生理盐水生理盐水就是 0.9%的氯化钠水溶液,因为它的渗透压值和正常人的血浆、组织液都是大致一样的，所以可以用作补液（不会降低和增加正常人体内钠离子浓度）以及其他医疗用途，也常用作体外培养活组织、细胞。氯化钠：
12、俗称盐、食盐。菌注射用水一般使用来溶解难溶于生理盐水药物使用的，生理盐水就是我们静脉点滴常用的 0.9的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用。所以它们不是一样的概念.。人体细胞生活中所处液体环境的浓度配方：配方：哺乳类需用生理盐水浓度是 0.9%。称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 100 毫升。血琼脂平板血琼脂平板制法制法：取营养琼脂（PH76），加热使其溶解待冷至 45-50，以灭菌操作于每 100 毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血 5-10 毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。血琼脂平板-用途用途：1 一般棉拭子均接种此培养基。2尿液，脓液3分离
13、细菌标本用。.；胰蛋白胨胰蛋白胨胰蛋白胨水成分成分胰蛋白胨 10g；蒸馏水 1000mL；pH7.0制法制法将上述成分溶解，校正pH。分装试管，121高压灭菌 15min。BairdBairdParkerParker 氏培养基氏培养基成分成分胰蛋白胨10g；牛肉膏5g；酵母膏1g；丙酮酸钠10g；甘氨酸12g；氯化锂(LiCl6H2O)5g；琼脂20g；蒸馏水950mL；PH7.5。增菌剂的配法30%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1%亚蹄酸钾溶液 10mL 混合，保存于冰箱内。制法制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25，校正pH。分装每瓶95mL，121高压灭菌 15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50，每95mL 加入预热至 50的卵黄亚蹄酸钾增菌剂 5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过 48h。血浆凝固酶血浆凝固酶血浆凝固酶-血浆凝固酶血浆凝固酶:是能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生,是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标.