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1、实验常用试剂、缓冲液的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml组份浓度 100mg/ml Ampicillin配制量 50mL配置方法 1.称量 5g Ampicillin 置于 50mL 离心管中。2.加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50mL。3.用 0.22m 滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。Kan（卡那霉素）50mg/ml组分浓度 50mg/ml 卡那霉素配制量 50mL配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。2.加入 40ml 灭菌水，充分混合溶解之后定容至 50mL。3.用 0.22m 滤膜过滤除菌
2、。4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。IPTG(异丙基-D-硫代半乳糖苷)24 mg/ml组份浓度 24mg/L IPTG配制量 50mL配置方法 1.称量 1.2gIPTG 置于 50mL 离心管中。2.加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50mL。3.用 0.22m 滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。X-Gal 20mg/m组份浓度 20mg/L X-Gal配制量 50mL配置方法 1.称取 1gX-Gal 置于 50mL 离心管中。2.加入 40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解，定容至 50mL。3.小份分装（1mL/份）后，-20避光保
3、存。LB 培养基组份浓度 1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl配制量 1L配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。Word文档 3.滴加 5N NaOH（约 0.2mL），调节 pH 值至 7.2-7.3。4.加去离子水定容至 1L。5.高温高压灭菌后，4保存。注：1.LB 固体培养基每 100ml LB 培养基加入 1.5g 琼脂粉。2.5N NaOH 新配后溶液加入需
4、要重新测定。3.待培养基温度降至 50时，以手不烫为准，按比例加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。50TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 100m L配制方法 1.称量下列试剂，置于 200mL 烧杯中。Tris 24.2 g Na2EDTA2H2O 3.72 g 2.向烧杯中加入约 80 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入 5.71 ml 的冰乙酸，充分搅拌。4.加去离子水将溶液定容至 100mL 后，室温保存。注：1xTAE 的稀释（如 500ml1xTAE 即 10mL 50 xTAE 稀释于 490m
5、L 的去离子水）。1琼脂糖凝胶（核酸电泳用）组份浓度 1琼脂糖凝胶配制量 100m L配制方法 1.称量 1g 琼脂糖置于 200mL 锥形瓶中。2.加入 100ml1TAE Buffer，摇动混匀。3.放入微波炉加热 2min 至琼脂糖完全溶化。4.插入梳子，等温度降下来，倒胶。1.M Tris-HCl组份浓度 1 M Tris-HCl（pH6.8）配制量 100mL配置方法 1.称量 12.11gTris 置于 200mL 烧杯中。2.加入约 80mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入 11mL 的浓盐酸。4.定容至 100mL，室温保存。1.5M Tris-HCl组份浓度 1.5 M
6、Tris-HCl（pH8.8）配制量 100L配置方法 1.称取 18.17gTris 置于 200mL 烧杯中。2.加入约 80mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至 100mL。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值。Word文档5 N NaOH组份浓度 5N NaOH配制量 100mL配置方法 1.量取 80mL 去离子水置于 100200mL 塑料烧杯中 2.称取 20g NaOH 逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌以放热。3.待 NaOH 完全溶解后，定容至 100mL。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
7、注：NaOH 溶解过程量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂。2.5 N HCl组份浓度 2.5 N HCl配制量 100mL配置方法 1.在 78.4mL 的去离子水中加入 21.6mL 的浓盐酸（11.6N），均匀混合。2.室温保存。25xPB Buffer组份浓度 25xPB Buffer配制量 100mL配制方法 1.称量下列试剂，置于 100 ML 烧杯中。Na2HPO4(磷酸氢二钠)2.74g NaH2PO4（磷酸二氢钠）0.79g 2.向烧杯中加入约 80 ML 去离子水，充分搅拌溶解。3.定容至 100 ML。1xPBS Buffer组份浓度 1xPBS Buffer配制量 100mL配
8、制方法 1.称量 8.5g Nacl 置于 100 ML 烧杯中。2.向烧杯中加入 40 ML 25xPB Buffer 搅拌溶解。3.滴加 5N NaoH 调节 PH 值至 7.2，将溶液定容至 1L.4.高温灭菌后，室温保存。注：PBST 的配制:1L 1xPBS 加 1ml 吐温-20。10%（W/V）过硫酸铵组分浓度 10%（W/V）过硫酸铵配制量 10mL配制方法 1.称取 1g 过硫酸铵；2.加入 10ml 的去离子水后搅拌溶解，3.贮存于 4。注：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在 4保存可使用 2 周左右，过期会失去催化效果。Word文档10%（W/V）SDS组份浓度 1
9、0%（W/V）配制量 100mL配制方法 1.称量 10gSDS置于 100200mL烧杯中，加入约 80mL 的去离子水，68加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7.2。3.将溶液定容至 100mL 后，室温保存5X Tris-Glycine Buffer组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5%(W/V)SDS配制量 1L配制方法 1.称取下列试剂，置于 1L 的烧杯中 Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约 800ml 的去离子水，搅拌溶解。3.加入去离子水定容至 1L 后，室温保存。注：1X Tris-Glyci
10、ne Buffer（500ml 即量取 100ml 稀释于 400ml 去离子水中）。考马斯亮蓝 R-250 染色液组份浓度 0.1（W/V）考马斯亮蓝 R-250，25%（V/V）异丙醇，10（V/V）冰醋酸配制量 1L配置方法 1.称取 1g 考马斯亮蓝 R-250,置于 1L 烧杯中。2.量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3.加入 100mL 的冰乙醋酸，均匀搅拌。4.加入 650mL 的去离子水，均匀搅拌。5.用滤纸去除颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度 10（V/V）醋酸，5（V/V）乙醇配制量 1L配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。醋
11、酸 100mL乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。膜转移缓冲液（Western 杂交用）组份浓度 39mMGlycine，48mMTris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂，置于 lL 烧杯中。Word文档 Glycine 2.9g Tris 5.8g SDS0.37g 2.向烧杯中加入约 600ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定溶至 800ml。4.加入 200ml 的甲醇，室温保存。封闭缓冲液（Western 杂交用）组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/PBSTBuffer配制量 100mL配制方法1.称 0.5g 脱脂奶粉加入到 10mlPBSTBuffer 中，搅拌溶解。2.4保存待用(本封闭液应该现配现用)。100mM EDTA(PH8.0)组份浓度 100mM EDTA配制量 100mL配制方法1.称取 37.524gNa2EDTA2H2O,置于 200mL 烧杯里。2.加入约 800ml 的去离子水，充分搅拌。3.用 NaOH 调节 PH 值至 8.0（让 EDTA 完全溶解）。4.加去离子水将溶液定容至 100ml。5.高压灭菌后，室温保存。Word文档