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1、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法_实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1MTris-HCl(pH7.4，7.6，8.0)组份浓度1MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个
2、单位。1.5MTris-HCl(pH8.8)10TEBuffer(pH7.4，7.6，8.0)组份浓度1.5MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。组份浓度100mMTris-HCI，10mMEDTA配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HClBufferpH7.4,
3、7.6,8.0100ml500mMEDTA(pH8.0)20ml2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法3M醋酸钠(pH5.2)PBSBuffer10M醋酸铵组份浓度3M醋酸钠配制量100ml配制方法1.称量40.8gNaOAc3H2O置于100200ml烧杯中，参加约40ml的去离子水搅拌溶解。2.参加冰醋酸调节pH值至5.2。3.加去离子水将溶液定容至100ml。4.高温高压灭菌后，室温保存。组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2m
4、MKH2PO4配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后参加去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。组份浓度10M醋酸铵配制量100ml配制方法1.称量77.1醋酸铵置于100200ml烧杯中，参加约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用0.22m滤器过滤除菌。4.
5、密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法Tris-HCl平衡苯酚苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用，同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因而，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重
6、灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：由于在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因而使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值到达7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：1液化苯酚应储存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其到达室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。2参加羟基喹啉8-Quinolinol至终浓度0.1%。该化合物是一种复原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。3参加等体积的1MTris-HClpH8.0，使用磁
7、力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。4重复操作步骤3。5参加等体积的0.1MTris-HClpH8.0，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。6重复操作步骤5，略微残留部分上层水相。7使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。8将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。配制方法1.讲明：从核酸样品中除去蛋白质时经常使用苯酚/氯仿/异戊醇25:24:1。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提经过中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇24:1混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。实验室常用试剂、
8、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法10%W/VSDS2NNaOH2.5NHCl5MNaCl20%W/VGlucose组份浓度10%W/VSDS配制量100ml配制方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加热溶解。2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2。3.将溶液定容至100ml后，室温保存。组份浓度2NNaOH配制量100ml配制方法1.量取80ml去离子水置于100200ml塑料烧杯中NaOH溶解经过中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂。2.称取8gNaOH小心地逐步参加到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容
9、至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。组份浓度2.5NHCl配制量100ml配制方法1.在78.4ml的去离子水中参加21.6ml的浓盐酸11.6N，均匀混合。2.室温保存。组份浓度5MNaCl配制量1L配制方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，参加约800ml的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。组份浓度20%W/VGlucose配制量100ml配制方法1.称取20gGlucose置于100200ml烧杯中，参加约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.高温高压灭菌后，4保
10、存。实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法SolutionI(质粒提取用)SolutionII(质粒提取用)SolutionIII(质粒提取用)0.5MEDTA(pH8.0)组份浓度25mMTris-HClpH8.0，10mMEDTA，50mMGlucose配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HClpH8.025ml0.5MEDTApH8.020ml20%Glucose1.11M45mldH2O910ml2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每50ml的SolutionI中参加2ml的RNaseA20mg/ml。组份浓度200mMNaOH
11、，1%W/VSDS配制量500ml配制方法1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中。10%SDS50ml2NNaOH50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀。3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH配制量500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5ml2.参加300ml去离子水后搅拌溶解。3.参加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压灭菌后，4保存。组份浓度0.5MEDTA配制量1L配制方法1.称取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中
12、。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至8.0约20gNaOH。注意：pH至8.0时，EDTA才能完成溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。实验室常用试剂、缓冲液的配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1MDTT10mMATP组份浓度1MDTT配制量20ml配制方法1.称取3.09gDTT，参加到50ml塑料离心管内。2.参加20ml的0.01MNaOAcpH5.2，溶解后使用0.22m滤器过滤除菌。3.适量分成小份后，-20保存。组份浓度10mMATP配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O，参加到50ml塑料离心管内。2.加20ml的25mMTris-HClpH8.0，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。