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1、探究不同浓度的臭氧水对非洲猪瘟病毒的杀灭效果,畜牧兽医论文本篇论文目录导航：【】【】【】 探究不同浓度的臭氧水对非洲猪瘟病毒的杀灭效果【】【】 非洲猪瘟论文：探究不同浓度的臭氧水对非洲猪瘟病毒的杀灭效果 内容摘要：生物安全还是当下防控非洲猪瘟的最重要措施。然而，在猪场的各个生物安全环节中，对员工食材的消毒尚未见较好的方式方法。臭氧消毒是多场景中均可使用的消毒方式。因而，为了探究臭氧溶于水后对非洲猪瘟病毒ASFV的杀灭效果，试验通过臭氧水与ASFV的作用后的红细胞吸附HAD试验来断定臭氧水对ASFV的杀灭效果。试验结果显示：10 m L浓度为2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水
2、与100 L的3.0 104拷贝数的ASFV作用2 min、5 min和10 min时，HAD结果均为阴性，表示清楚2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水作用于100 L的3.0 104拷贝数的ASFV 2 min、5 min和10 min时，均可完全杀灭病毒。以上试验表示清楚，臭氧水在不同作用时间下对ASFV具有较好的杀灭效果。 本文关键词语:臭氧;非洲猪瘟病毒;杀灭效果; 非洲猪瘟African Swine Fever,ASF是由非洲猪瘟病毒African Swine Fever Virus,ASFV引起的急性、烈性和高度接触的传染性疾病1。2007年以前，ASF在撒哈拉以
3、南国家流行，随后一株高度毒力的ASFV被带到高加索地区，开场在东欧和俄罗斯传播2。2021年8月，ASF在中国的东北部爆发，随后席卷全国，对经济社会产生宏大影响3。ASF被世界动物卫生组织设定为法定报告的动物疫病，而且属于我们国家重点防备的一类动物疫情。ASFV是非洲猪瘟相关病毒科Asfarviridae非洲猪瘟病毒属Asfivirus的唯一成员，也是唯一的虫媒DNA病毒，其基因组为双链DNA，大小为170 kb190 kb之间，病毒粒子的外形近似六边形，直径约200 nm4。软蜱是ASFV的重要传播媒介，最早在非洲东部和南部的发现，没有携带ASFV的软蜱，由于叮咬携带ASFV的病猪，也会成为
4、ASFV潜在的传染源，再次叮咬阴性疣猪时，使其感染ASFV。ASFV在野生猪群中通过蜱作为中间宿主在猪群传播5。同时ASFV可以以通过空气或附着在ASFV污染物的外表进行传播6。ASFV能够引起家猪和野猪特征性出血和发热，临床异常感觉和状态表现为发烧、皮肤发绀和多脏器广泛性出血，强毒株感染时死亡率高达100%。由于ASFV的对机体免疫机制的影响极为复杂，基因型多，因而没有有效疫苗用于防控7。ASFV作为最具毁坏性的病毒之一，对动物健康、国民经济和人民生活构成宏大威胁。当前我们国家养殖业针对ASFV采取的措施主要是以预防为主，在猪场原材料和人工等方面严格把控，一切原材料进入猪场之前进行严格的杀菌
5、和消毒，以控制ASFV的传入。消毒剂作为杀灭ASFV常用的主要消毒产品在猪场被广泛使用。而臭氧作为消毒剂具备下面几个特点。首先，臭氧是一种广谱杀菌剂，可杀灭细菌繁衍体和芽孢、病毒、真菌等，且臭氧在水中杀菌速度是液氯的3000倍以上。其次，臭氧杀菌速度是急速的，当浓度超过一定阈值后，消毒杀菌甚至能够霎时完成。并且臭氧利用其强氧化性能消毒，不产生有害生成物，剩余臭氧会自行分解为氧气，因此不产生残存余留污染9。臭氧气体和臭氧水消毒为臭氧常见的消毒方式，应用控制简单、方便、经济。由于臭氧特有的优势，其在食品处理中有很多附加价值，如无须使用化学药剂，没有化学副产物，减少成本支出，使用环境更安全。基于臭氧
6、的这些特点，食操行业采用高浓度臭氧水进行食品杀菌，主要应用于员工洗手消毒、食操行业器械消毒、大小型蔬果处理厂、食品加工业和定点清洁。因而，为了探究将臭氧消毒应用于猪场内食品的消毒能否切实可行，本试验模拟了猪场内员工食材消毒场景，初步探究了不同浓度的臭氧水对ASFV杀灭效果。 1 材料和方式方法 1.1 材料 ASFV病毒粒子、猪红细胞、PAMs细胞、96孔细胞培养板、1640培养基、胎牛血清、臭氧水机： 瑞净活氧水机 DT-01C、12W、 杭州陆恒生物 臭氧水浓度检测仪M900。 1.2 方式方法 1.2.1 臭氧水机不同作用时间下臭氧水浓度变化 启动臭氧水机，将水槽内注满自来水，在不同作用
7、时间后，使用 杭州陆恒生物 臭氧水浓度检测仪M900测定臭氧水浓度，探究臭氧水随时间变化曲线。 1.2.2 探究震荡对臭氧水浓度的影响 将3.0 ppm臭氧水取出装至50 m L离心管内，漩涡震荡15 s，使用 杭州陆恒生物 臭氧水浓度检测仪M900测定臭氧水浓度，探究臭氧水浓度随着震荡时间变化曲线，探究震荡能否能够消除水中溶解的臭氧。 1.2.3 臭氧水杀灭ASFV效果探究 探究不同臭氧水对ASFV杀灭效果的试验分为三组：试验组，阳性对照组和阴性对照组。试验组：2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水10 m L与病毒悬液病毒拷贝数为3.0 104分别作用2 min、5 min
8、和10 min。病毒阳性对照组：无菌水10 m L与100 L的病毒悬液病毒拷贝数为3.0 104分别作用2 min、5 min和10 min。作用结束后，震荡去除水中溶解的臭氧，再接种于提早铺有PAMs细胞的96孔细胞培养板，孵育2 h后，置37二氧化碳培养箱中培养。病毒阴性对照组：无菌水10 m L震荡，再接种于提早铺有PAMs细胞的96孔细胞培养板，每个实验组设置8个重复，孵育2 h后，置37二氧化碳培养箱中培养。分别向上述三组不同处理实验组中参加猪红细胞，观察能否存在红细胞吸附现象。以上牵涉ASFV活病毒的试验均在华南农业大学动物生物安全三级实验室内开展。 2 试验结果 2.1 臭氧水
9、机不同作用时间下水中臭氧浓度变化 臭氧水机不同作用时间下水中臭氧浓度变化方差S2为1.0506如此图1所示，随着臭氧水机的开启，水中臭氧浓度逐步上升，并于45 min时到达5.2 ppm,45 min后，在臭氧水机开启的情况下水中臭氧浓度一直保持在5.0 ppm以上。 图1 臭氧水机不同作用时间下水中臭氧浓度变化曲线 2.2 震荡对臭氧水浓度的影响 震荡对臭氧水浓度的影响方差S2为1.02164如此图2所示，随着漩涡震荡时间的增加，臭氧水的浓度逐步降低，并于75 s接近0 ppm，表示清楚震荡可有效去除水中溶解的臭氧，可用于中止臭氧反响试验。 图2 臭氧水浓度随着震荡时间变化曲线 2.3 臭氧
10、水杀灭ASFV效果探究 臭氧水杀灭ASFV的结果如表1所示：阴性对照空白对照组HAD结果为阴性，表示清楚试验经过操作严谨，试验无污染。阳性对照病毒组与无菌水作用2 min、5 min和10 min时，HAD结果均为阳性，表示清楚病毒活性良好，试验切实可行。臭氧水试验组，10 m L浓度为2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水与100 L 3.0 104拷贝数的ASFV作用2 min、5 min和10 min时，HAD结果均为阴性，表示清楚2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水与均100 L3.0 104拷贝数的ASFV作用2 min、5 min和10 min时，
11、均可完全杀灭病毒。 表1 臭氧水杀灭ASFV效果探究 注： - 代表HAD阴性，表示病毒被完全杀灭； + 代表HAD阳性，表示病毒未被完全杀灭 3 讨论 2021年8月，ASFV入侵我们国家，随后立即发布了相关防控政策，但ASF仍在一年内迅速蔓延至中国大陆各省。到当前为止，ASF疫情在我们国家尚未得到完全的控制。ASFV在猪群中的持续感染，大量的猪只被扑杀，引起了猪群数量和生猪产量的剧烈波动，导致猪肉价格的剧烈波动，对我们国家生猪产业和经济发展带来了挑战。ASF在我们国家的出现和迅速蔓延，表示清楚我们国家针对外来动物疾病的生物安全体系存在薄弱环节，因而我们需要提高生物安全意识，完善猪场生物安全
12、体系8。当前我们国家猪场生物安全防控的措施主要从三方面入手：第一，建立良好的生物安全屏障；第二，建立良好的消毒和无害化处理措施；第三，提高猪场工作人员的生物安全意识。良好的消毒措施对于控制ASFV的传播至关重要。当前国内猪场主要采取消毒剂的方式对猪场进行消毒，主要以强酸、强碱、强氧化剂、季铵盐和卤素类消毒剂为主，固然对病原体有较好的杀灭效果，但大部分消毒剂对猪和人有一定危害，且对猪场内员工食材并非是较好的消毒方式方法10。臭氧作为消毒剂具有高效性、广谱性、无污染等特点。考虑到臭氧消毒的优越性，本试验模拟了猪场内员工食材消毒场景，证实了臭氧水对ASFV有较好的杀灭效果。可见，将臭氧水应用于猪场内
13、员工食材的清洗和消毒是一种较优的补充生物安全措施的方式。 4 结论 试验表示清楚，臭氧水在不同作用时间下对ASFV具有较好的杀灭效果，可考虑将臭氧水应用于猪场内员工食材的清洗和消毒。 以下为参考文献 1 SANCHEZ-CORDON P J,MONTOYA M.REIS A L.et al.Afric an swine fever.A re emerging viral disease threatening the global pig industryJ.Veterinary Journal,2021,233:41-48. 2 CWYNAR P,STOJKOV J,WL AZLAK K.
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