《HIV检测宣传资料.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV检测宣传资料.ppt（40页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 HIVHIV感染的检测感染的检测3A3A组组LOGO检测的重要性2任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者甚至对家庭和社会都产生十分重要的影响 艾滋病诊断的一项重要指标，也是控制HIV传播和控制艾滋病流行的重要手段 LOGO检测的目的 3诊诊断断 为确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。监监测测 为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群血血液液筛筛查查 为防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。临床治疗和预后的判断临床治疗和预后的判断 疗效观察和耐药性监测 LOGO HIV感染
2、的实验室检测4初筛试验初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集试验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验以及放射免疫沉淀试验(RIPA)病毒分离培养电镜形态观察病毒抗原检测病毒核酸检测（HIV核酸定性检测、HIV-RNA定量测定）常用HIV病原学检测方法:常用HIV抗体检测方法：其他：CD4+/CD8+T cell 计数等LOGO常用HIV病原学检测方法5l病毒分离培养l电镜形态观察l病毒抗原检测l病毒核酸检测（HIV核酸定性检测、HIV-RNA 定量测定）常用HIV病原学检测方法:由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和
3、专业技术人员。因此仅抗原检测和病毒核酸检测可用于临床诊断。分离及培养HIV需要在特定的P3实验室(生物安全防护三级实验室)进行，且HIV的分离率在30%60%，这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究，不适用于HIV病毒的检测。LOGO病毒抗原检测6窗口期：HIV 感染人体后有一段窗口期，在这段时期病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。HIV-1感染机体后,感染者血液中最早出现的是病毒gag基因表达产物p24抗原,然后才出现相应的特异性抗HIV抗体,以后随抗体滴度的升高p24抗原含量呈逐渐下降的趋势以至检测不出。在病情发展到AIDS期，病毒大量复制，机体免疫力下降，所产生的抗体
4、不足以中和病毒抗原时，p24抗原在血中又可检测出。P24抗原检测LOGO病毒抗原检测u方法：以P24单克隆抗体包被微孔板，加人待检标本孵育，待检标本中若存在P24抗原，则被“捕捉”结合于包被抗体，然后依次加入生物素化的抗HIV多克隆抗体、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色，最后用酶联免疫检测仪测定OD值判断结果。u应用：血液及其他体液标本中P24抗原的检测可以缩短窗口期，有助于HIV-1的早期诊断、预后判断及评价抗病毒治疗的效果，具有良好的实际应用价值。ELISA检测P24抗原LOGO病毒抗原检测u结果报告和解释（局限性）8HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认HIV-1
5、P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应不能排除HIV感染LOGO病毒核酸检测RT-PCRRT-PCR定性试验定性试验是否存在病毒核酸是否存在病毒核酸定量实验定量实验血液中病毒复制血液中病毒复制水平水平病病毒毒核核酸酸检检测测核酸序列扩增试验（核酸序列扩增试验（NASBANASBA）逆转录逆转录PCRPCR试验（试验（RT-PCRRT-PCR）分支分支DNADNA杂交试验（杂交试验（bDNAbDNA）荧光定量荧光定量PCRPCR试验试验LOGO10 病毒核酸检测婴儿婴儿HIVHIV感染的诊断感染的诊断 检测HIV前病毒 DN
6、A是婴儿HIV感染诊断首选的方法，与病毒培养和随访的符合率达到95-100%。HIVHIV感染的早期诊断感染的早期诊断 感染以后1-2周就可用PCR方法检测出HIV 基因，比抗体出现的时间提前，使窗口期大大缩短，有利于早期诊断。HIVHIV抗体检测不确定结果的诊断抗体检测不确定结果的诊断 有助于及时阐明HIV抗体的不确定结果是早期HIV感染还是非特异性反应，在迫切需要诊断结果的时候很有用处。定性检测主要用途LOGO11病毒核酸检测辅助诊断辅助诊断 在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断，但在特殊情况下，单纯抗体检测不足以完成明确的判定，如出现某些非典型的抗体反应形式，特别
7、是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。虽然单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否，但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（3，000c/ml），感染发生的可能性非常大。病程监控病程监控 根据HIV感染发生后病毒载量具有一定的变化规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量的检测有助于确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。定量检测主要用途LOGO 指导治疗方案及疗效判定指导治疗方案及疗效判定 临床实践证明，并非在任何情况下HIV感染者都应该进行抗病毒治疗。通常在病毒载量达到一定水平后（如3500050000c/ml）抗病毒治疗才具有良好的效果。在进行治疗
8、后，通过病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常在治疗前后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。预测疾病进程预测疾病进程 HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密切，观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。12LOGO HIV感染的实验室检测13初筛试验初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集实验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验 以及放射免疫沉淀试验(RIPA)常用HIV抗体检测方法：LOGOHIV抗体检测方法ELISA 酶联免疫吸附法（ELISA）最早出现、发展最快、至今仍普遍使用很高的
9、灵敏度和特异性适合对大量样品的检测可以进行很方便的质控工作是目前临床最常用的筛查检测方法 LOGO酶联免疫吸附（ELISA）YY第一代第一代 第二代第二代Y第三代第三代YYYYYYY第四代第四代YYYYYYELISA是最常用的HIV抗体检测方法，其试剂已经发展到第4代 solidphasehumansampleconjugateLOGOHIV ELISA试剂的发展过程ELISA是最常用的HIV抗体检测方法，其试剂已经发展到第4代 LOGOHIV感染窗口期4rd4rd代代4th gen3rd gen=1st-2nd genHIV antigenIgM abIgG abDetection limi
10、t100pg/ml)，单独检测p24抗原试剂的敏感度(3.510pg/ml)。LOGO快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）19u原理：将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。LOGO快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）u结果判读LOGO快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）21对照粒子的反应图象为纽扣状凝集，致敏粒子的反应图象为环状凝集，则判为阳性阳性。无论对照粒子呈何种图象，只要致敏粒子的反应图象显示为纽扣状凝集时即判为阴性阴性。若对照因子反
11、应图象为纽扣状凝集，致敏因子反应难以确定则判定为可疑可疑。对于对照粒子和致敏粒子均显示可疑或阳性以上的样品，要在完成吸收实验的基础上进行在实验，或用其他试剂检测；结果为阳性或不确定样本，应用该试剂和其他试剂重复检测，如果仍为阳性需用蛋白印迹法确诊试验。LOGO快速检测方法-明胶颗粒凝集试验（PA）22PA是一种简便的HIV血清抗体免疫学检测方法。由于操作简便，无需特殊仪器设备，很适合对少量标本的检测。但由于其灵敏度和特异度不及ELISA，故不宜用于献血员和大规模常规检测。优优缺缺点点LOGO其他快速诊断方法点击添加文本点击添加文本点击添加文本免疫斑点和免疫层析免疫斑点和免疫层析免疫胶体金免疫胶
12、体金（或胶体硒）（或胶体硒）唾液、尿液检测卡唾液、尿液检测卡LOGO快速诊断方法的特点敏感度、特异敏感度、特异度低于度低于ELISAELISA，且价格，且价格贵贵快速诊断阳性快速诊断阳性结果还需经结果还需经ELISAELISA方法验方法验证证适用于血站覆盖适用于血站覆盖不到的边远地区不到的边远地区/城市大医院急城市大医院急诊、手术前检查诊、手术前检查快速、不需快速、不需特殊仪器特殊仪器LOGO HIV感染的实验室检测25初筛试验初筛试验：酶联免疫吸附（ELISA）、凝集实验、唾液、尿液检测卡以及斑点印迹试验等确认试验确认试验：免疫印迹法(WB)、免疫荧光试验(IFA)、条带免疫试验 以及放射免
13、疫沉淀试验(RIPA)常用HIV抗体检测方法：LOGO免疫印迹法（WB）u常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB）u免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型，一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测uHIV病毒蛋白用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品与硝酸纤维素膜一起孵育，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有抗HIV抗体，就会与膜条上的带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使有反应的抗原-
14、抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果。LOGOHIV抗体诊断 WB结果判定标准（我国）HIV-1抗体阳性：至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现或至少1 条env带和p24带同时出现HIV-2抗体血清学阳性：出现至少2条env带（gp36和gp140/gp105）以上均要符合试剂盒提供的阳性判定标准。抗体阳性LOGO无HIV抗体特异性带出现抗体阴性出现HIV特异性抗体带,但带型不足以确认阳性者抗体可疑HIV抗体诊断 WB结果判定标准（我国）LOGOWB检测的优缺点优点优点：WB的敏感性和特异性均较高。其假阳性率低于1/2万，假阴性率约为1/25万。其较高的特异性主
15、要基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化。由于能够同时检测多种抗体以及对阳性判定的要求必须有两条以上的条带出现，因而能够用WB方法鉴别初筛试验的假阳性结果。缺点缺点：相对窗口期较长，灵敏度稍差，技术要求高，影响因素多，操作不当和误判带型的假阳性率2%，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。另外，文献报道大约4%20%的样品经过HIV初筛复检阳性后，WB结果为“不确定。LOGOWB不确定结果u当出现任何HIV病毒特异条带，但不足以被判断为阳性则判定为不确定结果。u不仅初筛阳性的标本可以出现不确定的结果，
16、初筛阴性的标本经WB检测也有大约15%出现针对一个或几个抗原的不确定结果。uWB不确定结果的出现确实给临床诊断带来困难，需要更多的时间和实验进一步确认，也会对受试者造成额外的心理负担。从另一方面而言，WB不确定结果确是受试者真实的血清学反应。LOGOWB出现不确定结果的原因检测对象：HIV及相关感染：早期血清学转换、AIDS晚期、早产感染、HIV缺失株感染、免疫静止型AIDS、HIV-2感染、散发 HIV/SIV(猴免疫缺陷病毒)其它逆转录病毒感染：山羊关节炎-脑炎病毒其它临床状态：自身免疫疾病（系统性红斑狼疮，原发性干燥综合征）、麻风病、恶性肿瘤、高胆红素、高核蛋白、高类风湿因子无感染：HI
17、V阳性母亲所生的正常婴儿、未筛查血液制品的接受者、疫苗试验志愿者、保持WB结果不变的供者LOGOWB出现不确定结果的原因检测试剂：宿主细胞蛋白残留、判断准则、试剂盒的条件优化/稳定性实验操作：交叉污染、试验程序、仪器设备、样本处理及溶血LOGO免疫荧光试验免疫荧光试验(IFA)(IFA)放射免疫放射免疫沉淀试验沉淀试验(RIPA)(RIPA)条带免疫试验条带免疫试验 其他HIV抗体确认实验LOGO34其他：CD4+/CD8+T cell 计数等与艾滋病相关的免疫细胞检测LOGO与艾滋病相关的免疫细胞检测 外周血中CD4+T淋巴细胞的数量对于确定HIV感染状态、是否进入AIDS期、机会性感染及肿瘤发病的可能性以及评价治疗效果具有极其重要的作用。HIV-1感染并破坏CD4+T细胞 CD4+T细胞的下降导致机体免疫缺陷免疫缺陷导致机会性感染或肿瘤 获得性免疫缺陷综合征 AIDSLOGOQ:艾滋病的艾滋病的“潜伏期潜伏期”和和“窗口期窗口期”这两这两个概念。它们是同一回事吗？如果不是，它个概念。它们是同一回事吗？如果不是，它们之间有什么区别？们之间有什么区别？LOGO传播途径LOGO防治LOGO？1.蚊虫叮咬会传播艾滋病吗？2.艾滋病病毒感染的母亲采取怎样的措施减少胎儿被感染的危险？THANK YOU!